БХ-методичка

остаточного азота крови.
2. Небелковые азотистые	2.1. Норма остаточного азота в
органические соединения плазмы	сыворотке крови. Клиническое значение
крови.	его определения.
	2.2.	Состав		остаточного		азота.
	Происхождение, нормы и клиническое
	значение		определения:		мочевины,
	аммиака, мочевой кислоты, креатина,
	креатинина,		индикана,		аминокислот,
	билирубина.
	2.3. Укажите причины ретенционной и
	продукционной азотемии, их связь с
	отдельными формами патологии органов и
	систем.
	2.4. Какие особенности состава
	остаточного азота характерные для разных
	видов азотемии?
3. Катаболизм гемоглобина.	3.1. Схема катаболизма гемоглобина и
	гемма.
	3.2. Строение желчных пигментов.
	Нормы содержания в сыворотке крови,
	моче, кале.
	3.3. Клиническое значение определения
	желчных пигментов.

Практические навыки.

Оценивать показатели азотистого обмена и изменения содержания азотосодержащих небелковых компонентов крови.

Алгоритм лабораторной работы.

Определение остаточного азота крови за Раппопортом-Ейхгорном.

Принцип метода: после осаждения белков крови на азотные соединения центрифугата действуют щелочным раствором гипобромита, остаток которого определяют йодометрично. Разница в количестве гипосульфита, израсходованного на титрование контроля и опыта, используют для расчета остаточного азота в сыворотке крови.

Ход работы:

	ОПЫТ				КОНТРОЛЬ
	В центрифужную пробирку вносим			В колбу отмеряем 2 мл осадителя,
	1 мл воды, 1 мл сыворотки крови, 4 мл			добавляем	2,5	мл	гипобромита
	осадителя, перемешиваем и через 10			перемешиваем и через 1-2 минуты
	минут центрифугируем	5-10	минут. В	добавляем 2-3 капли КІ, 1,5 мл 18% НСl.
	колбу отмеряем 2 мл	центрифугата		Титруем	гипосульфитом			до
				слабожелтого	цвета.		Добавляем	2-3
	добавляем 2,5 мл	гипобромита,
				капли крахмала		и	титруем	до
	перемешиваем и через 2		минуты
				обесцвечения раствором гипосульфита.
	добавляем 2-3 капли КІ, 1,5 мл 18%
	НСl. Титруем гипосульфитом до
	слабожелтого цвета. Добавляем 2-3
	капли крахмала и титруем до
	обесцвечения гипосульфитом.

91

Расчет остаточного азота (RN):

Разница в количестве мл гипосульфита использованного и титрования контрольной (К) и опытной (О) проб умножают на коэффициент (30).

RN = (К – О) · 30 = остаточный азот, мг% мг% · 0,7139= остаточный азот, ммоль/л

Норма остаточного азота крови: 14,3 – 28,6 ммоль/л

Тема 19. Исследование биохимических закономерностей реализации иммунных процессов. Иммунодефицитные состояния.

Актуальность темы.

Иммунная система организма с помощью клеточных и гуморальных механизмов обеспечивает распознавание, связывание и разрушение антигенов как инфекционного, так и неинфекционного происхождения. Иммунная система состоит из тимуса, селезенки, лимфатических узлов, лимфоцитов костного мозга и крови. Кроме лимфоцитов в реакциях иммунитета принимают участие многочисленные белки и пептиды – иммуноглобулины, компоненты системы комплемента, гормоны и медиаторы иммунитета. Знания о биохимических закономерностях иммунных процессов важны для понимания механизмов развития имунодефицитных состояний, которые развиваются в условиях повреждения отдельных звеньев клеточного или гуморального иммунитета.

Цель и исходный уровень знаний-умений.

Общая цель.

Знать биохимические закономерности реализации иммунных процессов.

Конкретные цели:

1.Трактовать биохимические принципы функционирования иммунной системы;

2.Анализировать роль иммуноглобулинов в реакциях гуморального иммунитета; объяснять биохимические основы развития иммунодефицитных состояний.

Исходный уровень знаний-умений: знать строение и функции тимуса,

селезенки, лимфоцитов, иммуноглобулинов.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание		и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1.	Биохимия	иммунных	1.1.	Общая	характеристика			иммунной
процессов.			системы;	клеточные		и	биохимические
			компоненты.
			1.2.	Иммуноглобулины:				структура,
			биологические функции,			механизмы		регуляции
			синтеза	иммуноглобулинов.			Биохимические
			характеристики		отдельных			классов
			иммуноглобулинов человека.
			1.3. Медиаторы и гормоны иммунной системы;
			цитокины	(интерлейкины,			интерфероны,
			белково-пептидные факторы регуляции роста и
			пролиферации клеток).

92

2.		Биохимические	2.1.	Биохимические		компоненты		системы
компоненты		системы	комплемента человека.
комплемента.			2.2.	Классический		и	альтернативный
			(пропердиновый) механизмы активации.
3.	Патохимия иммунных		3.1.	Биохимические			механизмы
процессов.			иммунодефицитных		состояний:			первичные
			(наследственные) и вторичные иммунодефициты.
			3.2.	Синдром			приобретенного
			иммунодефицита человека.

Задание для индивидуальной самостоятельной работы студентов.

1.Создать схему. Система комплемента: 2 механизма активации.

2.Подготовить реферативное сообщение на тему: “Аллергия”, „Синдром приобретенного иммунодефицита человека”.

Примеры маркеров клеток иммунной системы.

Маркер/	Распространенность	Функциональное значение
антиген
CD1	Тимоциты, некоторые	Взаимодействие тимоцитов с
	В-лимфоциты	микроокружением
CD3	Зрелые Т-лимфоциты	Субединицы Т-клеточного антигенного
		рецептора
CD4	Т-хелперы, моноциты	Рецептор гликопротеидов главного
		комплекса гистосовместимости ІІ,
		комплементарный CD8, используется
		вирусом СПИД для внутриклеточного
		проникновения
CD8	Все Т-лимфоциты,	Рецептор гликопротеидов главного
	аутореактивные	комплекса гистосовместимости І,
	В-лимфоциты	комплементарный CD4
CD10	Лимфоидные	Нейтральная эндопептидаза, ранее
	полустволовые клетки,	считался маркером лейкозных бластов
	пре В-лимфоциты, все	при острых лейкозах
	гранулоциты
CD14	Моноциты	Рецептор липополисахаридов
		(экзогенных пирогенов)
CD20	В-лимфоциты	Ионный канал, маркер В-клеток
CD24	Ранние В-лимфоциты,	Используется в дифференцировании
	гранулоциты	форм лимфобластного лейкоза
CD25	Активированные Т- и	Часть рецептора ИЛ-2
	В-лимфоциты, моноциты
CD40	В-лимфоциты	Рецептор индукторов синтеза Ig E
CD45RO	Ранние Т- и В-	Маркер Т-клеток памяти
	лимфоциты, моноциты,
	макрофаги, гранулоциты
CD45	Все лейкоциты	Маркер всех лейкоцитов
CD51	Все лейкоциты,	α-рецептор витронектина
	макрофаги, тромбоциты
CD57	Нормальные киллеры	Маркер нормальных киллеров
CD61	Тромбоциты	β-рецептор витронектина
CD71	Макрофаги,	Трансфериновый рецептор

93

стволовые клетки, активированные лимфоциты и моноциты

Тема 20. Биохимия печени. Патобиохимия желтух.

Актуальность темы: определяется важным значением печени в обмене белков, жиров, углеводов, биологически активных веществ, гормонов, пигментов, а также детоксикации разных веществ.

Знания биохимии печени необходимы для понимания патогенеза разных форм ее патологии и нарушений других систем и органов: нервной, сердечно-сосудистой и почек, а также для обоснования профилактических и лечебных мероприятий при печеночной недостаточности.

Определение содержания билирубина в сыворотке крови важно для оценки функции печени и дифференциальной диагностики желтух (гемолитической, паренхиматозной, механической, генетическидетерминованных).

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

Уметь использовать знания биохимии печени при изучении основ ее патологии и уметь определять содержание билирубина в сыворотке крови для оценки пигментообразующей функции печени и желчевыделения.

Конкретные цели:

1.Трактовать биохимические закономерности функции печени: гликостатической, липидрегулирующей, белок-синтезирующей, мочевинообразующей, пигментной, желчеобразующей.

2.Анализировать дифференциальные изменения биохимических показателей крови и мочи (свободный и конъюгированный билирубин) с целью оценки патобиохимии желтух.

3.Объяснять роль печени в обеспечении нормогликемии (синтез и катаболизм гликогена, глюконеогенез) и патологические изменения – гипо-, гипергликемия, глюкозурия.

4.Объяснять биохимические основы развития недостаточности функции печени при условиях химического, биологического и радиационного поражения.

5.Уметь количественно определять билирубин (прямой, общий) в сыворотке крови по Иендрашику.

Исходный уровень знаний-умений: уметь применять знания о строении и функциях печени, уметь писать формулу гема.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание		и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1. Практическое изучение			1.1.	Определение	билирубина	в
определения	билирубина		всыворотке крови.
сыворотке крови.
2. Функции печени.			2.1. Углеводная (гликогенная) функция
			печени.
			2.2.	Белоксинтезирующая, мочевино-

94

образующая, функция печени. Биохимические механизмы развития печеночной энцефалопатии.

2.3.Роль печени в регуляции липидного состава крови.

2.4.Желче-образовывающая функция печени. Биохимический состав желчи.

2.5.Изменения биохимических показателей при остром гепатите, вызванном вирусами или алкогольной интоксикацией, их диагностическая оценка.

2.6.Изменения биохимических показателей при хроническом гепатите, циррозе, желчекаменной болезни, дискинезии и холецистите, их диагностическая оценка. Связь нарушений в экскреторной функции печени с нарушениями процессов пищеварения в кишечнике, диагностика этих нарушений.

2.7.Роль печени в обмене желчных пигментов. Катаболизм гемоглобина.

3. Патобиохимия желтух	3.1. Гемолитическая (предпеченочная),
	паренхиматозная		(печеночная),
	обтурационная		(подпеченочная)
	желтухи.
	3.2. Ферментативные, наследственные
	желтухи:	синдром	Криглера-Найяра,
	болезнь Жильбера, синдром Дабина-
	Джонсона, желтухи новорожденных.

Задание для индивидуальной самостоятельной работы студентов:

1.Создать схему „Патобиохимия желтух”.

2.Составить таблицу „Дифференциальная диагностика желтух” и заполнить ее.

Алгоритм лабораторной работы.

Определение билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода: в основе метода лежит реакция Ван-ден-Берга: билирубин при взаимодействии с диазореактивом дает красно-розовую окраску, интенсивность которой прямопропорциональна его концентрации. По разнице между количеством общего и прямого билирубина определяют уровень непрямого билирубина.

Ход определения:

Растворы	Пробирка 1	Пробирка 2	Пробирка 3
	общий	прямой	контроль
	билирубин	билирубин
Сыворотка крови	0,5	0,5	-
Кофеин	1,75	-	1,75
Физ. раствор	-	1,75	0,5
Диазореактив	0,25	0,25	0,25

Содержание пробирки 1 колориметрируют через 20 минут. Содержание пробирки 2 колориметрируют через 5-10 минут. ( λ = 540 нм, кювета – 5 мм)

Е

95

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

17,1 34,2 51,3 68,4 85,5 102,6 мкмоль/л

Норма содержания: общий билирубин: 8,5-20,5 мкмоль/л (0,5-1,2 мг%), непрямой билирубин: 1,7-17,1 мкмоль/л (0,1-1,0 мг%), прямой билирубин: 2,2-5,1 мкмоль/л (0,13-0,3 мг%).

Тема 21. Исследование процессов биотрансформиции ксенобиотиков и эндогенных токсинов. Микросомальное окисление,

цитохром Р450.

Актуальность темы.

Все лекарственные вещества разделяются на естественные (аутобиогенные) и инородные (ксенобиотики). Ксенобиотики в норме отсутствуют в организме человека. Ксенобиотики проходят при своем превращении 2 основные фазы: модификацию (несинтетическая) и конъюгацию (синтетическая). В микросомах находятся ферментные цепи окисления веществ (микросомальное окисление). Они представлены двумя короткими цепями переноса электронов и протонов. Один из них

– монооксигеназная цепь окисления, второй – редуктазная цепь окисления. Цитохром Р450 – последнее самоокислительное звено монооксигеназной цепи микросом. Как и все цитохромы, он относится к гемпротеинам.

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

Знать биохимические механизмы детоксикационной функции печени: типы реакций микросомального окисления и конъюгации в биотрансформации ксенобиотиков. Знать ферментные цепи окисления в микросомах.

Конкретные цели: трактовать биохимические механизмы функционирования детоксикационной системы печени, реакции микросомального окисления и конъюгации в биотрансформации ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

Исходный уровень знаний-умений. Знать строение и функции печени. Типы химических реакций.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание				и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1.	Практическое		изучение		1.1. Определение индикана в моче.
определения индикана в моче.
2.		Детоксикационная			2.1. Биотрансформация ксенобиотиков и
функция печени.					эндогенных токсинов.
3.		Типы	реакций		3.1.	Реакции	микросомального
биотрансформации			инородных		окисления.
химических		соединений		в	3.2.	Индукторы	и	ингибиторы
печени.					микросомальных монооксигеназ.
					96

		3.3. Реакции конъюгации в гепатоцитах:
		биохимические	механизмы,
		функциональное значение.
4.	Электроннотранспортные	4.1. Генетический	полиморфизм и
цепи	эндоплазматического	индуцибельность синтеза цитохрома Р450 .
ретикулума.		4.2. Возникновение и природа развития
		толерантности к лекарственным средствам.
5.	Клиническое значение	5.1. Образование индола и этапы его
определения индикана.		обезвреживания.
		5.2. Какое клиническое значение имеет
		определение индикана в крови и моче?

Индивидуальная самостоятельная работа студента:

Реферативное сообщение «Методы определения детоксикационной функции печени».

Алгоритм лабораторной работы.

Выявление индикана в моче (проба Обермейера).

Принцип метода. Индикан (животный индикан) – калиевая соль индоксилсульфата. Метод основан на превращении индикана в индоксил в процессе кислотного гидролиза эфирной связи сильной минеральной кислотой (соляная кислота). Образованый индоксил, в присутствии тимола, окисляется хлоридом железа до индиголигнона – соединения розово-фиолетового цвета.

Ход работы. К 4 мл мочи добавляют 2 мл 10%-го раствора ацетата свинца [Pb (CH3COOH)2] для осаждения желчных пигментов, солей и других веществ, которые мешают проведению реакции. Образованный осадок фильтруют. К 2 мл фильтратов добавляют 1 мл 5%-го раствора тимола в 96%-ом этиловом спирте и 2 мл реактива Обермейера (0,4 г хлорида железа - FeCl3, растворенного в 100 мл соляной кислоты). Через 10 мин. добавляют 1 мл хлороформа, осторожно перемешивают и наблюдают за образованием двух слоев: верхнего – водного и нижнего – хлороформного. Нижний, хлороформный слой окрашивается в розово-фиолетовый цвет. При выраженной индиканурии интенсивность окраски усиливается до красно-фиолетового цвета. Это дает возможность делать наполовину-количественную оценку результатов.

С целью последующего уточнения полученного результата, нижний хлороформный слой отбирают пипеткой, переносят в другую пробирку и добавляют несколько капель 20%-го раствора тиосульфата натрия. При отсутствии индикана в моче окраска исчезает после добавления тиосульфата натрия. При положительной реакции индикана мочи, окраска слоя хлороформа не исчезает после добавления тиосульфата натрия.

Тема 22. Исследование нормальных компонентов мочи.

Актуальность темы.

В регуляции гомеостаза – постоянства внутринней среды организма почкам принадлежит главная роль. Они обеспечивают выведение из организма конечных продуктов азотистого обмена, воды и солей, а также токсичных веществ. Благодаря регуляции состава мочи почки поддерживают постоянство водно-солевого баланса, осмотического давления жидкостей организма и кислотно-основного состояния. Почки синтезируют и секретируют в общий кровоток также некоторые биологически активные соединения.

Биохимическое исследование мочи необходимо врачу для диагностики заболеваний почек, оценки их функции и мочевыделительных путей, а также диагностика заболеваний других органов и систем.

97

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

1.Выучить биохимические процессы которые лежат в основе мочеобразования в почках.

2.Анализировать биохимический состав мочи в норме.

Конкретные цели:

1.Трактовать биохимические механизмы регуляции почками водно-солевого обмена и кислотно-основного равновесия.

2.Оценивать функциональное значение конечных продуктов азотистого обмена и продуктов детоксикации которые выделяются с мочой в норме.

Исходный уровень знаний-умений: знать строение и функции почек, а также название и строение биологически активных веществ, которые регулируют мочеобразование

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание		и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1.	Практическое	изучение	1.1.	Определение			относительной
физико-химических свойств мочи			плотности и рН мочи.
в норме.
2. Биологическая роль почек.			2.1. Объясните функции почек в
			организме, их роль в поддержке баланса
			воды,	электролитов,			постоянства
			осмотического давления, pH, выведении
			конечных продуктов обмена.
			2.2. Объясните роль почек в синтезе
			веществ регуляторного действия (ренин-
			ангиотензин-альдостероновая					система),
			обмене	креатина		и	образовании
			кальцитриола.
3.	Биохимические механизмы		3.1.	Механизм		образования			в
мочеобразовательной		функции	гломеpулах нефрона		первичной мочи и ее
почек.			химический состав. Клиренс креатинина.
			3.2. Механизм образования					вторичной
			мочи.
			3.3. Регуляция мочеобразования.
4. Обмен веществ в почках.			4.1.	Особенности			энергетического
			обмена в почках.
			4.2.	Объясните			молекулярные
			механизмы поддержки			почками		регуляции
			постоянства КОР.
5. Химический состав мочи в			5.1.	Основные		физико-химические
норме.			свойства мочи.
			5.2. Hазовите основные органические и
			минеральные компоненты мочи, количество
			их суточной экскреции.
6.	Клиническое	значение	6.1. Hа конкретных примерах объясните
анализа мочи.			значение анализа мочи для выявления
			патологии	почек,	оценки		их	функции,
			98

диагноза и прогноза болезней других органов и систем.

Индивидуальная самостоятельная работа студентов.

Подготовьте реферативное сообщение по теме:

1.Молекулярные механизмы разных стадий мочеобразования, влияние на них биорегуляторов.

2.Ренин-ангиотензин-альдостероновая система, ее физиологическая роль.

3.Ренальная остеодистрофия.

Алгоритм лабораторной работы.

1.Определение относительной плотности мочи.

Внорме относительная плотность мочи - 1,017-1,022.

Внебольшой цилиндр налить мочу и осторожно опустить урометр. Выполнить измерение по шкале урометра (нижний мениск жидкости).

2.Определение рН мочи (с помощью универсального индикатора).

На середину индикаторной бумаги нанести 2 кап. мочи, через 1 минуту сопоставить цвет с контрольной полоской на универсальном индикаторе и установить соответствующее значение рН опытной мочи.

Тема 23. Исследование патологических компонентов мочи.

Актуальность темы.

Нарушение мочеобразования наблюдается при повреждении нефрона, расстройствах нейрогуморальной регуляции функции почек, болевом синдроме, сердечно-сосудистой недостаточности и др. Наиболее глубокие нарушения гомеостатической функции почек характерны для уремии – тяжелой формы почечной недостаточности, что приводит к значительному уменьшению выделения из организма продуктов азотистого обмена, экскреции ионов водорода и органических кислот, изменению содержания электролитов крови, нарушению гомеостаза. Знания биохимических механизмов патогенеза почечной недостаточности и изменений химического состава мочи необходимы врачу для глубокого понимания основ патологии почек и других систем, имеют важное значение для понимания патогенеза и диагностики заболеваний, для оценки эффективности лечения.

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

Уметь использовать знание биохимии почек в клинической медицине для объяснения патогенеза разных форм патологии почек и обусловленных ими нарушений гомеостаза, для диагностики и контроля лечения заболеваний почек, а также сердечно-сосудистой, эндокринной и других систем.

Конкретные цели:

1.Анализировать дифференциальные изменения биохимических показателей мочи с целью оценки патобиохимии желтух.

2.Трактовать биохимические механизмы регуляции водно-солевого обмена и роль почек в образовании мочи.

3.Анализировать биохимический состав мочи в условиях развития патологических процессов: оценивать функциональное значение конечных продуктов азотистого обмена (мочевина, мочевая кислота, креатин) и продуктов детоксикации (индикан, гиппуровая кислота), изменения их суточного выделения.

99

4.Анализировать состояние здоровья человека на основании биохимических параметров изменений промежуточных и конечных продуктов метаболизма в моче.

Исходный уровень знаний-умений.

1.Биохимический состав мочи человека в норме.

2.Клинико-диагностическое значение анализа состава мочи.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание

и

Указания к учебным действиям

последовательность действий

1.

Практическое

изучение

1.1.

В

тетрадь

протоколов

опытов

методов

качественного

и

выпишите алгоритм лабораторной работы.

количественного

определения

патологических

компонентов

мочи

и

оценка

их

диагностического значения.

2.

Патобиохимия

почек

и

2.1.

Биохимический

состав

мочи

водно-солевого обмена

человека

в

условиях

патологических

процессов.

Клинико-диагностическое

значение анализа состава мочи.

2.2.

Биохимическая

характеристика

почечного клиренса и почечного порога, их

диагностическое значение.

2.3. Клинико-биохимические изменения

при

гломерулонефрите,

амилоидозе,

пиелонефрите,

острой

почечной

недостаточности.

2.4. Диагностика хронической почечной

недостаточности.

2.5.

Характеристика

условий

образования в почках камней, их

химический

состав

и

мероприятия

профилактики.

Индивидуальная самостоятельная работа студента:

1.Подготовить реферативный доклад на тему: «Почечная недостаточность, биохимические изменения крови и мочи».

2.Подготовить реферативный доклад на тему: «Качественные изменения мочеобразования при сильной и длительной боли».

3.Подготовить реферативный доклад на тему: «Микроальбуминурия. Диагностическое значение для оценки диабетогенной нефропатии».

4.Подготовить реферативный доклад на тему: «Изменения показателей мочи при сахарном диабете».

Алгоритм лабораторной работы.

1. Качественное определение белка:

К 0,5 мл мочи добавить 0,5 мл 20% сульфосалициловой кислоты. При наличии белка появляются белые хлопья.

Количественное определение белка:

Проба Геллера: на 0,5 мл 5% раствора HNO3 наслаивают 0,5 мл мочи, образуется белое нитевидное кольцо, которое соответствует 0,033 г/л белка.

2. Качественное определение глюкозы реактивом Фелинга:

100