БХ-методичка

компоненты он содержит, их биоpоль, механизм образования HCl.

4.2.Hазовите нормальные величины кислотности желудочного сока, "дебит-час" свободной HCl, принципы их определения.

4.3.Объясните механизм активации пепсиногена, действие пепсина на белки.

4.4.Какой показатель называют "дебитчасом" свободной HCl. Почему его определение точнее характеризует кислотообразующую функцию желудка? Объясните патологические изменения кислотности желудочного сока: гипо- и гипеpхлоpгидpия, ахлоpгидpия, ахилия.

4.5.Hазовите патологические составные части желудочного сока, их диагностическое значение.

5. Пищеварение		белков в	5.1. Расскажите			про	особенности
кишечнике.			полостного	и	мембранного		пищеварения
			белков.	Протеолитические			ферменты
			кишечного сока. Чем отличается действие
			трипсина,	хемотpипсина,			амино-	и
			каpбоксипептидаз?			Специфичность
			действия ферментов.
6. Переваривание углеводов.			6.1. Hазовите ферменты полостного и
			мембранного		пищеварения		углеводов;
			объясните механизм их действия. Hазовите
			моносахариды, которые образуются при
			пищеварении крахмала, сахарозы, лактозы.
			Особенности их всасывания в кровь.
7.	Наследственные		7.1. Рассказать про “непереносимость
нарушения	усвоения	углеводов	дисахаридов”, клинические проявления и
пищи.			подходы к лечению.

Практические навыки.

Объяснять биохимические механизмы пищеварения белков, углеводов при участии ферментов ЖКТ.

Задание для индивидуальной самостоятельной работы студентов.

Подготовить реферативное сообщение по темам:

1.Нарушение пищеварения белков в кишечнике.

2.Наследственные нарушения пищеварения и усвоения углеводов.

Алгоритм лабораторной работы.

Качественный и количественный анализ желудочного сока.

Принцип методов: по степени гидролиза белка определяют активность пепсина. Кислотность определяют титрованием HCl желудочного сока раствором NaOH в присутствии индикаторов диметиламиноазобензола (при рН 2,4-4,0 изменение цвета от красного на желтый: по желто-оранжевому определяют свободную HCl, по светложелтому - связанную) и фенолфталеина (при рН > 8,0 окрашивается в красный цвет: определение общей кислотности). Наличие крови определяют по реакции гемоглобина с перекисью водорода и бензидином, которая дает зеленый продукт

81

окисления. Наличие молочной кислоты определяют по исчезновению черного цвета фенолята железа при образовании желтого лактата за счет вытеснения фенола (реакция Уффельмана).

Ход определения.

1) Определение кислотности: к 5,0 мл сока добавляют индикаторы: 2 капли диметиламиноазобензола и 2 капли фенолфталеина и титруют 0,1 М раствором NaOH. Отмечают количество щелочи до перехода в желто-оранжевый, цвет семги (свободная HCl, І пункт), в светло-желтый, лимонный (ІІ пункт, для расчета связанной HCl), в красный цвет (ІІІ пункт, общая кислотность).

Расчет кислотности в ммоль/л:

І пункт – определяют свободную НСl

Хмл 1000 0,1 , где Х мл - количество раствора NaOH;

5

1000 – пересчет на 1 л;

0,1 - молярность NaOH.

ІІ пункт используют для определения связанной HCl. Среднее арифметическое между ІІ и ІІІ пунктами считают общей HCl. Связанная HCl определяется по разнице между общей и свободной HCl.

ІІІ пункт – общая кислотность (принцип расчета см. пункт І)

2)Определение наличия крови: к 3 мл сока добавляют 1 мл 1% раствора

бензидина и 1 мл 3% раствора Н2О2. При наличии гемоглобина крови образуется комплекс, который имеет сине-зеленую окраску.

3)Определение наличия молочной кислоты: к 1 мл реактива Уффельмана добавляют 10 капель желудочного сока, при наличии молочной кислоты цвет становится желтым.

В норме	в желудочном соке общая кислотность 40-60 ммоль/л,	свободная
НCl 20-40	ммоль/л, дебит-час общей HCl - 2-6 ммоль/час,	свободной
НCl 1-4,5 ммоль/час, отсутствуют кровь и молочная кислота, сок без цвета.

Тема 14. Исследование процесса переваривания питательных веществ (липидов) в пищеварительном тракте.

Актуальность темы.

Эмульгирование липидов – важный физико-химический процесс, который протекает в кишечнике при участии желчных кислот и бикарбоната. Нарушение эмульгирования липидов в пищеварительном тракте при заболеваниях печени, желчного пузыря сопровождается нарушением переваривания и всасывания липидов, а также всасывания жирорастворимых витаминов. Определение общих липидов крови имеет клиническое значение для оценки состояния больных, так как при многих заболеваниях (атеросклероз, сахарный диабет, ИБС, острый гепатит, липоидный нефроз и др.) их содержание значительно повышается.

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

Уметь использовать знание о переваривании и всасывании липидов, а также их общего содержания в крови для диагностики и прогноза при разных видах патологии липидного обмена.

82

Конкретные цели:

1.Трактовать физиологические потребности и энергетическую ценность липидов.

2.Объяснять биохимические механизмы ферментативных процессов пищеварения и поступления в ткани составных компонентов нутриентов при наследственных и приобретенных нарушениях синтеза и активности ферментов расщепления липидов.

3.Объяснять возникновение основных патологических процессов пищеварения в желудке и кишечнике.

Исходный уровень знаний-умений.

1.Уметь писать формулы жирных кислот, глицерина, триглицеридов, желчных парных кислот.

2.Уметь колориметрировать на ФЭК.

3.Знать механизм действия ферментов.

4.Знать анатомию и гистологию органов ЖКТ.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание		и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1.	Изучение	кинетики	1.1. В тетрадь протоколов опытов
действия липазы.			выписать алгоритм лабораторной работы.
2.	Потребность	организма	2.1. Общая характеристика липидов.
человека в липидах.			2.2.	Физиологические				потребности и
			энергетическая ценность липидов.
			2.3. Потребность организма человека в
			липидах (жирах, фосфолипидах).
			2.4. Биологическая ценность липидов.
			Рациональное			питание.		Содержание
			липидов в		распространенных				продуктах
			питания.
3.	Механизм переваривания		3.1.		Общая			характеристика
липидов в пищеварительном			переваривания			липидов.			Ферменты,
тракте.			биохимические механизмы переваривания
			липидов		в	отдельных			отделах
			пищеварительного тракта.
			3.2. Состав желчи. Биохимические
			механизмы			развития		желчекамянной
			болезни.
			3.3. Биохимические изменения обмена
			липидов при нарушениях функции желудка
			и кишечника и их клинико-биохимическая
			диагностика.
			3.4.	Нарушение секреторной функции
			поджелудочной железы при остром и
			хроническом панкреатитах, их клинико-
			биохимическая характеристика.
			3.5. Виды стеаторей: панкреатическая
			стеаторея		(дефицит		панкреатической
			липазы при панкреатитах), гепатогенная
			стеаторея (дефицит желчи в кишечнике),
			энтерогенная			стеаторея		(ингибирование
			ферментов			липолиза		и	ресинтеза

83

триацилглицеролов в кишечнике).

Индивидуальная самостоятельная работа студента:

Создать схему пищеварения и транспорта липидов.

Практические навыки:

1.Объяснять биохимические механизмы пищеварения липидов при участии ферментов в желудочно-кишечном тракте.

2.Изучение кинетики действия липазы поджелудочной железы. Какие соединения в организме активируют липазу? Проиллюстрируйте ответ результатами практической работы.

Алгоритм лабораторной работы.

Исследование активности липазы поджелудочной железы.

Принцип метода: об активности панкреатической липазы судят по количеству освобожденных под действием ферментов жирных кислот, которые оттитровуются щелочью.

Ход работы: Три пробирки заполняют по схеме. содержание пробирок инкубируют на водяной бане при 37оС на протяжении 15 мин. После инкубации проводят титрование 0,1 М раствором гидроксида натрия в присутствии фенолфталеина. Количество щелочи в мл, израсходованной на титрование (нейтрализацию) освобожденных жирных кислот, является показателем активности липазы.

	Компоненты			№ пробирки
	смеси		1	2	3
1.	Растительное масло		0,5	0,5	0,5
2.	Вытяжка из поджелудочной		1,0	1,0	-
железы
3.	Желчь		-	2,0	2,0
4.	Буфер рН 7,8		3,0	1,0	2,0
Количество		NaOH,
израсходованной на титрование

Тема 15. Исследование функциональной роли жирорастворимых витаминов в метаболизме и реализации клеточных функций.

Актуальность темы.

Жирорастворимые витамины – А, Д, Е, К – являются компонентами питания, экзогенными гормонами, которые попадая в организм стимулируют синтез специфических белков. Витамин Е как наиболее мощный естественный биоантиоксидант, инактивирует продукты перекисного окисления липидов и предупреждает окислительную модификацию биомолекул (белков, нуклеиновых кислот), обеспечивает нормальную функцию репродуктивных органов.

Полиненасыщенные жирные кислоты (витамин F) входят в состав фосфолипидов клеточных мембран и являются предшественниками синтеза физиологически активных соединений – эйкозаноидов.

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

84

Знать процессы и молекулярные основы влияния жирорастворимых витаминов и проявления гиповитаминозов и гипервитаминозов.

Конкретные цели:

1.Объяснить биорегуляторные (гормоноподобные) и антиоксидантные функции жирорастворимых витаминов А, Е, К, F, D.

2.Анализировать причины и молекулярно-биохимические механизмы возникновения патологических изменений при гипо- и гипервитаминозах.

Исходный уровень знаний-умений.

Знать структуру биоорганических соединений (холестерола, полиненасыщенных жирных кислот, β-каротина).

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание					и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1.	Практическое			изучение		1.1. В тетрадь протоколов практических
качественных			специфическихзанятий				выписать	алгоритм		лабораторной
реакций на		жирорастворимыеработы.
витамины.
2.	Общая		характеристика			2.1. Классификация витаминов.
витаминов		как	компонентов			2.2. Экзогенные и эндогенные гипо- и
питания человека.						авитаминозы.
						2.3.	Использование			витаминных
						препаратов в профилактике и лечении
						заболеваний.
3.	Особенности усвоения				и	3.1. Витамины как компоненты питания
метаболизма		жирорастворимыхчеловека.
витаминов.
4.	Биологические			свойства,		4.1. Биохимические механизмы участия в
роль	в	обмене		веществ,метаболизме жирорастворимых витаминов А,
проявления		недостаточности			иЕ, К, F, D.
гипервитаминоза витаминов.						4.2.	Биохимические			проявления
						недостаточности витаминов А, D, Е, К.
						4.3.	Биохимические			проявления
						гипервитаминозов А, D.
5.	Биоантиоксидантные					5.1. Механизм антиоксидантного действия
свойства		коферментных			ивитаминов.
жирорастворимых витаминов.						5.2.	Понятие	о	физиологической
						антиоксидантной системе.

Индивидуальная самостоятельная работа студента.

Подготовить реферативные сообщения на темы: а) “Биологическая роль витамина F”

б) “Токоферол – естественный антиоксидант”.

Алгоритм лабораторной работы.

1) Качественная реакция на витамин А (реакция Друммонда).

Принцип метода: ретинол при взаимодействии с хлороформным раствором SbCl3 образует продукты реакции синего цвета.

Ход работы.

85

В сухую пробирку вносят 1кап. витамина А и добавляют 4-5 кап. 33% хлоpофоpмного раствора SbCl3. Наблюдают возникновение интенсивно-синей окраски смеси.

2) Качественная реакция на витамин D.

Принцип метода: при взаимодействие витамина D со смесью анилина и конц. HCl раствор приобретает красный цвет.

Ход работы.

В сухую пробирку вносят 1 кап. витамина D, 5 кап. хлороформа и добавляют 1 кап. анилинового реактива (15 ч. анилина + 1 ч. HCl). При нагревании развивается красная окраска.

3) Качественная реакция на витамин E.

Принцип метода: спиртовой раствор токофеpола при взаимодействие с HNO3 окрашивается в красный цвет.

Ход работы.

В сухую пробирку вносят 5 кап. раствора токофеpола и 10 кап. HNO3. Наблюдают развитие красной окраски.

4) Качественная реакция на витамин К.

Принцип метода: при добавлении к раствору витамина К цистеина и раствора щелочи развивается лимонно-желтая окраска.

Ход работы.

К 5 кап. раствора витамина К добавляют 5 кап. цистеина и 1 кап. 10% NaOH. Наблюдают возникновение желтой окраски.

Тема 16. Исследование белков плазмы крови: белков острой фазы воспаления, собственных и индикаторных белков.

Актуальность темы.

Исследование системы крови и, в частности, белков плазмы дает очень ценную диагностическую информацию. Известно более 100 белков, которые в плазме выполняют важные физиологичные функции. При неотложных состояниях часто используют средства для поддержания онкотического давления, которое больше всего зависит от содержания альбуминов.

Гуморальный иммунитет оценивают на основании определения иммуноглобулинов. Важное значение для анализа роли системы протеолиза в патогенезе многих заболеваний имеет концентрация протеолитических ферментов и их ингибиторов. Исследование белков острой фазы воспаления широко используется для диагностики воспалительных, аллергических и других патологических процессов. Энзимодиагностика – один из наиболее чувствительных и информативных методов диагностики заболеваний внутренних органов (инфаркт миокарда, гепатит и др.).

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

Уметь анализировать состояние здоровья человека в норме и при условиях развития патологических процессов на основании клинико-биохимической характеристики системы крови.

Конкретные цели:

86

3. Анализировать биохимический состав крови и объяснять диагностическую роль белков плазмы крови.

4.Знать клиническое значение и диагностическую оценку белков „острой фазы” воспалительных процессов.

5.Уметь оценить изменения активности ферментов плазмы при наиболее распространенных заболеваниях внутренних органов как точного высокоинформативного метода энзимодиагностики.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание			и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1.	Практическое		изучение		1.1.	Определение			С-реактивного
определения		С-реактивного		протеина в сыворотке крови.
протеина в сыворотке крови.
2. Белки плазмы крови и их					2.1. Фракции белков плазмы крови и их
клинико-биохимическая				физиологичная роль.
характеристика.					2.2.	Количественная					оценка
				протеинограммы и общие закономерности
				ее	изменений		при		патологических
				процессах		(острое		и	хроническое
				воспаление, заболевание печени, почек,
				инфекционные процессы).
3.	Компоненты		системы		3.1.			α1-протеиназный
неспецифической				ингибитор,				α2-макроглобулин,
резистентности и тестовые белки				физиологическая				роль	и	характер
„острой	фазы”		(БОФ)	изменений при патологических процессах.
воспалительных процессов.					3.2. С-реактивный протеин, клинико-
				диагностическое значение.
					3.3.	Фибронектин,			физиологичное
				значение и диагностическая роль.
					3.4. Криоглобулин, церулоплазмин,
				гаптоглобин как компоненты БОФ.
4. Ферменты плазмы крови и					4.1.	Аминотрансферазы,				биороль,
их значение в энзимодиагностике				клиническое и диагностическое						значение
заболеваний внутренних органов.				(АсАТ, АлАТ).
					4.2. Амилаза, биороль, клинико-
				биохимическое значение.
					4.3.	Креатинкиназа					как
				кардиоспецифический					фермент		в
				диагностике инфаркта миокарда.
					4.4. Фосфатаза щелочная и кислая,
				биороль,			клинико-диагностическое
				значение.
5.	Калликреин-кининовая				5.1. Биологическая роль ККС.
система (ККС).					5.2. Участие ККС в развитии отдельных
				патологических процессов.

Практические навыки.

1.Оценивать состояние системы крови и ее биохимических функций.

2.Объяснять роль белков, индикаторных ферментов плазмы крови в норме и при патологии.

87

Индивидуальная самостоятельная работа по выбору.

1.Создать электронную схему калликреин-кининовой системы.

2.Подготовить реферат на тему „Система протеолиза и ее роль в норме и при повреждении тканей”.

Алгоритм лабораторной работы.

Определение С-реактивного протеина в сыворотке крови.

Принцип метода основан на реакции преципитации С-реактивного протеина (СРП) с антисывороткой.

Ход работы.

Стеклянный капилляр держат двумя пальцами и под углом 40-450 опускают концом во флакон с антисывороткой, набирая ее на 1/3 длины капилляра (3 см). Капилляр опускают тем же концом в исследуемую сыворотку и набирают также на 1/3 длины капилляра – 3 см (не должен быть воздух между реагентами!). Дальше капилляр заполненный на 2/3 длины, протирают ватой покачивают 10-12 раз, перемешивая жидкость от одного конца к другому, и устанавливают в штатив. Перед установлением капилляра в штатив его следует наклонить, чтобы конец, через который набирали сыворотку, был свободным на 15 мм. Потом этот конец опускают в пластилин штатива так, чтобы уровень жидкости в нем был выше поверхности пластилина на 10 см (сыворотка находится на воздушном столбике). Капилляр при фиксации держат горизонтально, а штатив – вертикально, чтобы не вылить содержание капилляра.

Образование преципитата (осадок) в капилляре указывает на наличие СРП в исследуемой сыворотке.

Тема 17. Исследование кислотно-основного состояния крови и дыхательной функции эритроцитов. Патологические формы гемоглобинов.

Актуальность темы.

Нарушение кислотно-основного гомеостаза возникает при многих патологических процессах и относится к неотложным состояниям, декомпенсация которых вызывает угрозу жизни больных.

Особенности механизмов регуляции и поддержки кислотно-основного гомеостаза необходимое для понимания состояния больных при развитии ацидоза или алкалоза, а также для адекватного выбора методов коррекции их нарушений.

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

Анализировать формы нарушения КОР, объяснять изменения показателей КОР при разных формах ацидоза и алкалоза.

Конкретные цели:

1.Трактовать биохимические принципы дыхательной функции эритроцитов.

2.Анализировать механизмы регуляции и поддержки КОР: буферные системы крови, функции легких и почек.

3.Трактовать типы гипоксии, механизмы их возникновения.

88

Исходный уровень знаний-умений: знать химический состав буферных систем и механизм их действия.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание		и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1.	Практическое	изучение	1.1.	Определение		геминовой группы
определения геминовой группы			гемоглобина. Объясните принцип метода.
гемоглобина.
2.	Дыхательная	функция	2.1. Гемоглобин: структура, свойства.
эритроцитов.			2.2. Механизм участия гемоглобина в
			транспорте		кислорода		и	диоксида
			углерода.
			2.3. Варианты гемоглобинов человека;
			молекулярные		нарушения			строения
			гемоглобинов		–	гемоглобинопатии,
			талассемии.
3.	Кислотно-основное		3.1. Механизмы регуляции и поддержки
состояние организма человека.			кислотно-основного состояния: буферные
			системы крови; функция легких и почек.
			3.2. Показатели кислотно-основного
			состояния, которые исследуются в клинике.
4.	Нарушение	кислотно-	4.1. Метаболический алкалоз и ацидоз,
основного состояния.			механизмы их возникновения.
			4.2. Респираторные алкалоз и ацидоз,
			механизмы их возникновения.
5. Главные типы гипоксии.			5.1.	Механизмы			возникновения
			гипоксий.
			5.2. Приемы лабораторной диагностики
			гипоксий.

Алгоритм лабораторной работы.

Определение геминовой группы гемоглобина бензидиновой пробой.

Принцип метода. Для определения геминовой группы используют бензидиновую пробу, которая базируется на каталитических свойствах производных гемоглобина (оксигемоглобина, карбоксигемоглобина). Продукт окисления бензидина имеет синий цвет, который постепенно может переходить в красный. Проба очень чувствительная.

Ход работы. В пробирку вносят 5 капель разбавленной крови, добавляют 5 капель раствора бензидина и 2-3 капли перекиси водорода. Наблюдают за изменением цвета.

Ситуационные задачи.

1.Концентрация стандартного бикарбоната в плазме крови у больного воспалением легких составляет 20 ммоль/л, pH крови - 7,33, концентрация растворенного в

плазме СО2 - 50 мм pт.ст. Какое состояние кислотно-основного равновесия и чем оно обусловлено?

2.Концентрация стандартного бикарбоната (BS) в плазме крови больного сахарным диабетом составляет 6 ммоль/л, pH крови - 7,10, граница значений ВЕ ("избыток или дефицит кислот") составляет -5,2. Сделайте вывод о состоянии кислотноосновного равновесия и объясните механизм изменений.

89

3.pH крови больного токсичным гепатитом равняется 7,27, pСО2 = 42 мм рт.ст., ВS=23 ммоль/л, ВВ=33 ммоль/л, ВЕ= - 9, молочная кислота = 9,7 ммоль/л. Дайте оценку состояния КОР. Hазовите форму нарушения, объясните механизм развития.

4.pH плазмы крови больного равняется 7,20, pСО2 = 68 мм pт.ст., ВS=13 ммоль/л, ВВ=15 ммоль/л; ВЕ= - 11. Сделайте вывод о состоянии и форме нарушения КОР.

5.pH плазмы крови больного составляет 7,45, pСО2 =28 мм pт.ст., ВS=32,4 ммоль/л; ВЕ= + 5,8; ВВ=68 ммоль/л. Сделайте вывод о состоянии КОР и форме нарушения.

Тема 18. Исследование азотистого обмена и небелковых азотосодержащих компонентов крови – конечных продуктов катаболизма гема.

Актуальность темы.

Вместе с белками в крови находятся азотистые соединения небелкового характера: мочевина, мочевая кислота, кpеатинин, аммоний-ион, индикан, билирубин, аминокислоты, пептиды, креатин. За исключением трех последних, они являются конечными продуктами азотистого обмена. Азот вышеназванных веществ носит название "остаточного", так как он определяется после осаждения белков в безбелковом фильтрате крови. Выделяют ретенционную и продукционную азотемию. Ретенционная азотемия возникает в результате нарушения азотовыделительной функции почек, а также при сердечно-сосудистой недостаточности. Продукционная азотемия развивается при печеночной недостаточности, при повышенном распаде белков в организме (злокачественные опухоли, туберкулез) и др.

Определение остаточного азота в крови является обязательным для диагностики заболеваний почек.

При катаболизме гемма происходит разрыв тетрапирольного кольца гемма, образование вердоглобина, биливердина, билирубина, превращение в билирубиндиглюкуронид, экскреция в желчь. Определение желчных пигментов применяется для дифференциальной диагностики желтух.

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

Оценивать показатели азотистого обмена и изменения содержания азотосодержащих небелковых компонентов крови.

Конкретные цели:

1. Анализировать биохимический состав крови и объяснять диагностическую роль небелковых азотосодержащих соединений (остаточный азот) и небелковых азотосодержащих компонентов крови – конечных продуктов катаболизма гема в норме и в условиях патологии.

Исходный уровень знаний-умений: знать структуру, метаболизм, локализацию, нормы компонентов остаточного азота крови. Знать строение молекулы гемоглобина.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

Содержание	и	Указания к учебным действиям
последовательность действий
1. Практическое	изучение	1.1. Определение остаточного азота
определения	содержания	крови.

90