экз / Bilet_1

Билет 79
Пневмококки и заболевания, вызываемые ими. Пневмококк (Streptococcus pneumoniae) впервые выделил Пастер (1881) во время работы над антирабической вакциной и первоначально посчитал его возбудителем бешенства. Этиологическую роль микроорганизма в развитии пневмоний у человека доказали Френкель и Вайхзельбаум (1884. Являются основными возбудителями воспаления лёгких, также могут вызвать плевриты, менингиты,, гнойные воспаления среднего уха, септические состояния и другие заболевания. Резервуар инфекции — больные и носители ,основной путь передачи — контактный; воздушно-капельный Морфология. Пневмококки являются грам+ диплококками, неподвижны, они не образуют спор, жгутиков не имеют ланцетевидные кокки .В мазках из клинического материала располагаются парами, каждая из которых окружена толстой капсулой. В мазках с питательных сред могут располагаться короткими цепочками и быть более округлыми Культуральные свойства. Пневмококки аэробы или факультативные анаэробы; при культивировании предпочтительны капнофильные условия (5-10% СО2). Хемоорганогрофы и хорошо растут на кровяных или сывороточных средах, дополненных внесением 0,1% глюкозы. Могут расти в диапазоне температур 28-42 °С, оптимум — 37 °С. Оптимум рН —7,6-7,8. На плотных средах образуют полупрозрачные четко—очерченные—колонии.. Пневмококки также не полностью разрушают гемоглобин, а превращают его в метгемоглобин, который обусловливает зеленоватую зону вокруг колоний. На кровяном агаре образуют мелкие полупрозрачные колонии зеленовато-серого цвета. Центр колоний более темный, периферия светлее.). Колонии пневмококка III типа часто имеют слизистую консистенцию, Образуют S- и R-формы колоний. При переходе из S- в R-форму теряют способность синтезировать капсулу. На жидких средах с сывороткой и 0,2% глюкозой дают равномерное помутнение и небольшой хлопьевидный осадок. Фермент. Актив.-метаболизм бродильный, фермент глюк с обр кислоты. Каталазоотриц. Резистентность . В сухой мокроте они сохраняются до двух месяцев. Способны длительно сохраняться при низких температурах; при температуре 60 °С погибают в течение 3-5 минут. 3% раствор карболовой кислоты убивает их за 1-2 минуты. На пневмококки губительно действуют оптохин (в концентрации 1:100000) и желчь, что используют для идентификации бактерий. Антигенная структура. У пневмококков обнаружены несколько видов антигенов полисахаридный, 0-соматический антиген, находящийся в клеточной стенке; полисахаридные капсульные К-антигены и М-белок. Родство обуславливает сходство химической структуры рибиттейхоевых кислот, связанных с холинфосфатом. Капсульные антигены также имеют полисахаридную природу, состоят из повторяющихся в различном сочетании моносахаров: D-глюкозы, D-галактозы и L-рамнозы. По структуре капсульных антигенов пневмококки разделяют на 84 серовара. При переходе из S в R-форму капсульные антигены утрачиваются. Факторы патогенности. Основным фактором является капсула, защищающая бактерии от фагоцитов и уводящая их от действия опсонинов. Важной функцией капсулы и М-белка также является обеспечение адгезии на слизистой. Существенное значение имеет субстанция-С, специфически взаимодействующая с С-реактивным белком. Следствием подобного реагирования являются активация комплементарного каскада и высвобождение медиаторов острой фазы воспаления; их аккумуляция в лёгочной ткани стимулирует миграцию полиморфноядерных фагоцитов.. Пневмококки образуют эндотоксин, а- и в-гемолизины (пневмолизины), лейкоцидин. а-пневмолизин является термолабильным белком, способным нейтрализовать 0-стрептолизин,эритрогенное вещество, нейраминидазу. Пневмококки также синтезируют ряд ферментов, вносящих вклад в патогенез поражений — мурамидазу, гиалуронидазу (способствует распространению микроорганизмов в тканях), пептидазу (расщепляет IgA). Патогенез поражений. Биотопом пневмококков являются верхние дыхательные пути. Патогенез большинства пневмоний включает аспирацию слюны, содержащей S. pneumoniae, и проникновение бактерий в нижние отделы воздухоносных путей. Существенное значение имеет нарушение защитных дренирующих механизмов — кашлевого толчка и мукоцилиарного клиренса. У взрослых чаще наблюдают долевые поражения лёгких, у детей и лиц преклонного возраста доминируют перибронхиальные или очаговые поражения. Из первичного очага возбудитель может проникать в плевральную полость и перикард либо гематогенно диссеминировать и вызвать менингиты, эндокардиты и суставные поражения Клинические проявления. Классическая пневмококковая пневмония начинается внезапно; отмечают подъём температуры тела, продуктивный кашель и боли в груди. ригидностью шейных мышц, головной болью, тошнотой и рвотойИммунитетПосле перенесенного заболевания развивается нестойкий иммунитет, носящий типоспецифический характер и обусловленный появлением антител против типового капсульного полисахарида. Лечение. Основу терапии пневмококковой инфекции составляют антибиотики — пенициллин, тетрациклин, левомицетин, ванкомицин, рифампицин, цефтриаксон. Для профилактики пневмококковых инфекций разработана поливалентная вакцина, включающая капсульные полисахаридные Аг 23 различных сероваров, вызывающих 90% гематогенных инфекций. Иммунизация показана группам повышенного риска; её проводят двукратно с 5-10-летним интервалом Диагностика. Материал для иссл- кровь, гной, моча, мокрота. Основу микробиологической диагностики пневмококка составляют выделение и идентификация возбудителя. На пневмококковую инфекцию указывает наличие нейтрофилов и грамположительных ланцетовидных диплококков (не менее 10 в поле зрения) в мазках клинического материала. Для дифференцировки пневмококка от прочих стрептококков наиболее широко используют тест чувствительности к оптохину. Это средство угнетает рост практически 100% клинических изолятов. При сомнительных результатах можно внутрибрюшинно заразить белых мышей материалом пневмококка, взятым от больного, а затем провести бактериологические и серологические исследования перитонеального экссудата. После вакцинации создается искусственный, активный, типоспецифический иммунитет.	Микрофлора продуктов питания. Её роль в развитии заболеваний. Методы определения и дифференциальной оценки. Санитарно-микробиологическое исследование при пище¬вых токсикоинфекциях и бактериальных токсикозах. 1.Общее микробное число (обсеменение). Определяют факультативные анаэробные макроорганизмы, выросшие в виде колоний на плотной питательной среде после инкубации при 37С в теч. 24 ч. 2. Обнаружение санитарно-показательных бактерий в продуктах питания — кишечной па¬лочки, БГКП, энтерококка, золотистого ста¬филококка, бактерий группы протея, клостридий. 3. Обнаружение сальмонелл - при исследовании продуктов из мяса. По эпидемиологическим показаниям продукты исследуют на наличие патогенных и условно-патогенных микроорганизмов — возбудителей пищевых отравлений микробной этиологии. В кисломолочных продуктах исследуют молочнокислую микро¬флору бактериоскопическим изучением маз¬ков из них, окрашенных метиленовым синим. Отсутствие характерной молочнокислой мик¬рофлоры и наличие посторонней микрофло¬ры (плесневые грибы, дрожжи и др.) указыва¬ют на неудовлетворительное качество. Консервированные продукты питания не должны содержать кишечную палочку, про¬тей и патогенные микробы. При исследова¬нии таких пищевых продуктов, как консервы овощные, рыбные, мясные, предусмотрено: обнаружение аэробных микроорганизмов; обнаружение анаэробных микроорганизмов; определение ботулинических экзотоксинов. Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочных продуктов. Источники микрофлоры в молоке. В молоке всегда содер¬жится незначительное количество микробов-сапрофитов. Основными источниками микрофлоры молока являются сами животные, помещения, воздух, корма, плохо промытые доильные установки, цистерны, молокопроводы, а также сред¬ства его доставки. Среди молочнокислых стрептококков заслуживают внима¬ния лишь те, основным продуктом брожения которых являет¬ся молочная кислота. Это типичный молочнокислый стрепто¬кокк Streptococcus lactis, а также Str. cremoris, Str. citrovo-rum, Str. paracitrovorum, используемые для изготовления сли¬вок, масла и сыра соответствующих сортов. Оптимальная температура развития стрептококков 30—32°С, предел кислотообразования в молоке— 120° по Тернеру. Пороки молока и молочных продуктов. Гнилостные микро¬бы, размножаясь -в молоке и молочных продуктах, расщепля¬ют белки, что сопровождается появлением неприятных вкуса и запаха. Молоко приобретает горький вкус, издает неприят¬ный затхлый запах и не может быть использовано в пищу ни человеку, ни животным. Гнилостные микробы представлены споровыми (сенная, картофельная бациллы) и неспоровыми (бактерия гниения, протей) бактериями, а также микрококками и отдельными видами молочнокислых бактерий, обладающих протеолитиче-ской активностью. При поедании коровами большого количества зеленого, легкобродящего корма, а также при развитии в молоке бактерий группы кишечной палочки и флюоресцирующих бакте¬рий молоко приобретает травяные запах и вкус. О состоянии молока и молоч¬ных продуктов судят по микробному числу и коли-титру. Для определения микробного числа молоко разво¬дят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия и по 1 мл каждого разведения выливают на дно стерильных чашек Петри, которые заливают расплавленным и остуженным агаром. Посевы инкубируют при 37 С в течение суток, после чего подсчитывают количество выросших колоний. Для определения коли-титра молоко засевают в 6 пробирок со средой Кесслера. Посевы инкуби¬руют при 43С в течение суток, после чего из забродивших проб делают посевы на среду Эндо. Из выросших колоний красного цвета готовят мазки, окраши-вают по Граму, микроскопируют и делают посев на среду Козера, а также в пептонную воду с 1% глюкозы. При оценке резуль¬татов учитываются бактерии, вызывающие брожение глюкозы с образованием кислоты и газа, но не дающие роста на нитрат¬ной среде Козера. Аналогично для молочных продуктов. Для обнаружения в молоке патогенных бактерий делают посевы на соответствующие элективные и дифференциально диагностические среды с последующим выделением чистых куль тур и их идентификацией. Санитарно-бактериологическое исследование мяса и мясных продуктов. При микроскопическом исследовании мяса определяют коли¬чество бактерий в мазках-отпечатках, которые готовят из кусоч¬ков мяса. Мазки окрашивают по Граму и микроскопируют. Мясо считается свежим, если в поле зрения обнаружено не более 10 бактериальных клеток. Бактериологическое исследование мяс¬ных продуктов: определяют микробное число, а также устанавливают присут¬ствие БГКП, сальмонелл, бактерий рода Proteus, стафилококков и клостридий. Для определения общего количества микроорганизмов в 1 г продукта делают посев 0,1 и 0,01 г продукта на питательный агар, инкубируют 48ч и подсчитывают число колоний. Для определения БГКП в 1 г продукта производят посев 5 мл взвеси на элективно - дифференциальную среду для БГКП и содержит питательный. При росте лактозоположительных БГКП синий цвет меняется на темно-зеленый или ярко-желтый. Значение условно-патогенных микробов в этиологии пи¬щевых токсикоинфекций. По эпидемическим показаниям продукты исследуют на наличие патогенных и условно- патогенных микроорганизмов – возбудителей пищевых отравлений. Обнаружение санитарно – показательных бактерий в продуктах питания – кишечной палочки, БГКП, энтерококка, золотистого стафилококка, клостридий. Обнаружение сальмонелл – при исследовании продуктов из мяса. Отсутствие характерной молочнокислой микрофлоры на молочных продуктах и наличие посторонней микрофлоры (плесневые грибы, дрожжи) – неудовлетворительное качество. Консервированные продукты питания не должны содержать кишечную палочку, протей и патогенные микробы. При исследовании предусмотрено: обнаружение аэробных, анаэробных микроорганизмов, ботулинических экзотоксинов.	. Реакция Хеддельсона с сывороткой крови больного в объеме 0,2 мл «+ + + +», проба Бюрне «+ + + +», ОФП – 60. Оцените результаты. Реакция Хеддельсона (пластинчатая реакция) ++++ - резко положительная и является показателем наличия инфекции, держится на всем протяжении инфекции и свидетельствует об активном процессе заболевания. Пробы Бюрне (кожно-аллергическая проба) ++++ - резко положительная. Она определяет способность организма специфически отвечать местной реакцией кожи на внутрикожное введение бруцеллина – фильтрата бульонной культуры бруцелл. Она становится резко положительной на 3-4 день от начала болезни, в дальнейшем сохраняется с большим постоянством на протяжении очень длительного времени, даже после клинического выздоровления. ОФП (опсонофагоцитарная проба) 60 – резко положительная. Её проводят с 15-20 дня заболевания. Она основана на способности сегментоядерных нейтрофилов фагоцитировать бруцеллы благодаря наличию в крови человека специфических опсонинов, нарастающих в процессе бруцеллезной болезни. ( можно определить по формуле: Фагоцитарное Число Больного разделить на Фагоцитарное Число Здорового (Фагоцитарное Число – это среднее число поглощенных микробных клеток в одном фагоците)). Данные реакции применяются при диагностике бруцеллеза, а положительные результаты свидетельствуют о наличие данного заболевания.

Билет 80
Менингококки и менингококковая инфекция. Менингококковая инфекция — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением слизистой оболочки носоглот¬ки, оболочек головного мозга и септицемией; антропоноз. Таксономия: возбудитель Neisseria meningitidis (менингококк) относится к отделу Gracilicutes, семейству Neisseriaceae, роду Neisseria. Морфологические свойства. Мелкие диплококки. Характерно расположение в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Неподвижны, спор не образуют, грамотрицательные, имеют пили, капсула непостоянна. Культуральные свойства. Относятся к аэробам, культивируются на средах, содержащих нормальную сыворотку или дефибринированную кровь лошади, растут на искусственных питательных средах, содержащих спе¬циальный набор аминокислот. Элективная среда должна содержать ристомицин. Повышенная концентрация СО2 в атмосфере стимулирует рост менингококков. Антигенная структура: Имеет несколько АГ: родовые, общие для рода нейссерии (белковые и полисахаридные, которые представлены полимерами аминосахаров и сиаловых кислот); видовой (протеиновый); группоспецифические (гликопротеидный комплекс); типоспецифические (белки наружной мембраны), которые разграничивают серотипы внутри серогрупп В и С. По капсульным АГ выделяют девять серогрупп (А, В, С, D, X, Y, Z, W135 и Е). Капсульные АГ некоторых серогрупп иммуногенны для человека. Штаммы серогруппы А вызывают эпидемические вспышки. В, С и Y - спорадические случаи заболевания. На основании различий типоспецифических АГ выделяют серотипы, которые обозначают арабскими цифрами (серотипы выявлены в серогруппах В, С, Y, W135). Наличие АГ серотипа 2 рассматривается как фактор патогенности. Во время эпидемий преобладают менингококки групп А и С, которые являются наиболее патогенными. Биохимическая активность: низкая. Разлагает мальтозу и глк. До кислоты, не образует индол и сероводород. Ферментация глк. и мальтозы – диф.-диагностический признак. Не образует крахмалоподобный полисахарид из сахарозы. Обладает цитохромоксидазой и каталазой. Отсутствие β-галактозидазы, наличие γ-глютаминтрансферазы. Факторы патогенности: капсула – защищает от фагоцитоза. AT, образующиеся к полисахаридам капсулы, проявляют бактерицидные свойства. Токсические проявления менингококковой инфекции обусловле¬ны высокотоксичным эндотоксином. Для генерализованных форм менин¬гококковой инфекции характерны кожные высыпания, выраженное пирогенное действие, образование AT. Пили, белки наружной мембраны, наличие гиалуронидазы и нейроминидазы. Пили явля¬ются фактором адгезии к слизистой оболоч¬ке носоглотки и тканях мозговой оболочки. Менингококки выделяют IgA-протеазы, расщепляющие молекулы IgA, что защищает бактерии от действия Ig. Резистентность. Малоустойчив во внешней среде, чувствителен к высушиванию и охлаждению. В течение нескольких минут погибает при повышении температуры более 50 °С и ниже 22 °С. Чувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, эритромицину, устойчивы к ристомицину и сульфамидам. Чувствительны к 1 % раствору фенола, 0,2 % раствору хлорной извести, 1 % раствору хлора¬мина. Эпидемиология, патогенез и клиника. Чело¬век — единственный природный хозяин менингококков. Носоглотка служит входными воротами инфекции, здесь возбудитель может дли¬тельно существовать, не вызывая воспаления (носительство). Механизм передачи инфекции от больного или носителя воз¬душно-капельный. Инкубационный период составляет 1—10 дней (чаще 2—3 дня). Различают локализованные (назофарингит) и генерализованные (менингит, менингоэнцефалит) формы менингококковой инфекции. Из носоглотки бактерии попадают в кровяное русло (менингококкемия) и вызывают поражение мозговых и слизи¬стых оболочек с развитием лихорадки, геморрагической сыпи, воспаления мозговых оболочек. Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерали¬зованных формах болезни стойкий, напряженный. Микробиологическая диагностика: Материал для исследо¬вания - кровь, спинномозговая жидкость, носогло¬точные смывы. Бактериоскопический метод – окраска мазков из ликвора и крови по Граму для определения лейкоцитарной формулы, выявления менингококков и их количества. Наблюдают полинуклеарные лейкоциты, эритроциты, нити фибрина, менингококки – грам «-», окружены капсулой. Бактериологический метод – выделение чистой культуры. Носоглоточная слизь, кровь, ликвор. Посев на плотные, полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь. Культуры инкубируют в течение 20 ч. При 37С с повышенным содержанием СО2.Оксидазаположительные колонии – принадлежат в данному виду. Наличие N.meningitidis подтверждают образованием уксусной кислоты при ферментации глк. и мальтозы. Принадлежность к серогруппам – в реакции агглютинации (РА). Серологический метод – используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе, или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА,РИА. У больных, перенесших менингококк – в сыворотке специфические АТ: бактерицидные, аггютинины, гемаггютинины. Лечение. В качестве этиотропной терапии используют ан¬тибиотики - бензилпенициллин (пенициллины, левомицетин, рифампицин), сульфамиды. Профилактика. Специфическую профилактику проводят менингококковой химической полисахаридной вакциной серогруппы А и дивакциной серогрупп А и С по эпидемическим показаниям. Неспецифическая профилактика сводится к соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в дошкольных, школь¬ных учреждениях и местах постоянного скопления людей.	Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний. Сущность, техника, варианты, применение Биологический метод состоит в заражении различным материалом (клиническим, лабораторным) лабораторных животных для индикации возбудителя, а также для определения некоторых свойств микроорганизмов, характеризующих их патогенность (токсигенность, токсичность, вирулентность). В качестве лабораторных животных используют белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов и др. Воспроизведение заболевания у животного — абсолютное доказательство патогенности выделенного микроорганизма (в случае бешенства, столбняка и др.). Поэтому биологическая проба на животных является ценным и достоверным диагностическим методом, особенно при тех инфекциях, возбудители которых в исследуемых биологических средах организма человека содержатся в малых концентрациях и плохо или медленно растут на искусственных средах. Молекулярно-биологические методы, используемые в диа¬гностике инфекционных болезней (ПЦР, рестрикционный анализ и др.). Полимеразная цепная реакция позволяет обнаружить микроб в ис¬следуемом материале (воде, продуктах, ма¬териале от больного) по наличию в нем ДНК микроба без выделения последнего в чистую культуру. Для проведения этой реакции из исследу¬емого материала выделяют ДНК, в которой определяют наличие специфичного для дан¬ного микроба гена. Обнаружение гена осу¬ществляют его накоплением. Для этого необ¬ходимо иметь праймеры комплементарного З'-концам ДНК. исходного гена. Накопление (амплификация) гена выполняется следую¬щим образом. Выделенную из исследуемого материала ДНК нагревают. При этом ДНК распадается на 2 нити. Добавляют праймеры. Смесь ДНК и праймеров охлаждают. При этом праймеры, при наличии в смеси ДНК искомо¬го гена, связываются с его комплементарными участками. Затем к смеси ДНК и праймера добавляют ДНК-полимеразу и нуклеотиды. Устанавливают температуру, оптимальную для функционирования ДНК-полимеразы. В этих условиях, в случае комплементарное™ ДНК гена и праймера, происходит присоединение нуклеотидов к З'-концам праймеров, в резуль¬тате чего синтезируются две копии гена. После этого цикл повторяется снова, при этом ко¬личество ДНК гена будет увеличиваться каждый раз вдвое. Проводят реакцию в специальных приборах — амплификаторах. ПЦР применяется для диагностики вирусных и бактериальных инфекций. Рестрикционный анализ. Данный метод основан на применении фер¬ментов, носящих название рестриктаз. Рестриктазы представляют собой эндонук-леазы, которые расщепляют молекулы ДНК, разрывая фосфатные связи не в произвольных местах, а в определенных последовательностях нуклеотидов. Особое значение для методов мо¬лекулярной генетики имеют рестриктазы, кото¬рые узнают последовательности, обладающие центральной симметрией и считывающиеся одинаково в обе стороны от оси симметрии. Точка разрыва ДНК может или совпадать с осью симметрии, или быть сдвинута относи¬тельно нее. В настоящее время из различных бактерий выделено и очищено более 175 различных рестриктаз, для которых известны сайты (участки) узнавания (рестрикции). Выявлено более 80 различных типов сайтов, в которых может про¬исходить разрыв двойной спирали ДНК. В геноме конкретной таксономической еди¬ницы находится строго определенное (генети¬чески задетерминированное) число участков узнавания для определенной рестриктазы. Если выделенную из конкретного микроба ДНК обработать определенной рестриктазой, то это приведет к образованию строго опреде¬ленного количества фрагментов ДНК фикси¬рованного размера. Размер каждого типа фрагментов можно узнать с помощью электрофореза в агарозном геле: мелкие фрагменты перемещаются в геле быстрее, чем более крупные фрагменты, и длина их пробега больше. Гель окрашива¬ют бромистым этидием и фотографируют в УФ-излучении. Таким образом можно полу¬чить рестрикционную карту определенного вида микробов. Сопоставляя карты рестрикции ДНК, вы¬деленных из различных штаммов, можно оп¬ределить их генетическое родство, выявить принадлежность к определенному виду или роду, а также обнаружить участки, подвергну¬тые мутациям. Этот метод используется также как началь¬ный этап метода определения последователь¬ности нуклеотидных пар (секвенирования) и метода молекулярной гибридизации. Метод молекулярной гибридизации позволяет выявить степень сходства раз¬личных ДНК. Применяется при идентифи¬кации микробов для определения их точного таксономического положения. Метод основан на способности двухцепочечной ДНК при повышенной температуре (90 °С) в щелочной среде денатурировать, т. е. расплетаться на две нити, а при понижении температуры на 10 °С вновь восстанавливать исходную двухцепочечную структуру. Метод требует наличия молекулярного зонда. Зондом называется одноцепочечная мо¬лекула нуклеиновой кислоты, меченная ра¬диоактивными нуклидами, с которой сравнивают исследуемую ДНК. Для проведения молекулярной гибридизации исследуемую ДНК расплетают указанным выше способом, одну нить фиксируют на специальном фильтре, который затем помещают в раствор, со-держащий радиоактивный зонд. Создаются ус¬ловия, благоприятные для образования двойных спиралей. В случае наличия комплементарности между зондом и исследуемой ДНК, они образу¬ют между собой двойную спираль. Риботипирование и опосредованная транскрипцией амплификация рибосомальной РНК. Последовательность нуклеотидных основа¬ний в оперонах, кодирующих рРНК, отлича¬ется консервативностью, присущей каждомувиду бактерий. Эти опероны представлены на бактериальной хромосоме в нескольких ко¬пиях. Фрагменты ДНК, полученные после об¬работки ее рестриктазами, содержат последо¬вательности генов рРНК, которые могут быть обнаружены методом молекулярной гибри¬дизации с меченой рРНК соответствующего виды бактерий. Количество и локализация копий оперонов рРНК и рестрикционный состав сайтов как внутри рРНК-оперона, так и по его флангам варьируют у различных вида бактерий. На основе этого свойства построен метод риботипирования, который позволяет производить мониторинг выделенных штам¬мов и определение их вида. В настоящее вре¬мя риботипирование проводится в автомати¬ческом режиме в специальных приборах. Опосредованная транскрипцией амплифика¬ция рРНК используется для диагностики сме¬шанных инфекций. Этот метод основан на обнаружении с помощью молекулярной гиб¬ридизации амплифицированных рРНК, спе¬цифичных для определенного вида бактерий. Исследование проводится в три этапа: 1. Амплификация пула рРНК на матрице вы¬деленной из исследуемого материала ДНК при помощи ДНК-зависимой РНК-полимеразы. 2. Гибридизация накопленного пула рРНК с комплементарными видоспецифическим рРНК олигонуклеотидами, меченными флюорохромом или ферментами. 3. Определение продуктов гибридизации методами денситометрии, иммунофермент-ного анализа (ИФА). Реакция проводится в автоматическом ре¬жиме в установках, в которых одномоментное определение рРНК, принадлежащих различ¬ным видам бактерий, достигается разделе¬нием амплифицированного пула рРНК на несколько проб, в которые вносятся компле¬ментарные видоспецифическим рРНК мече¬ные олигонуклеотиды для гибридизации.	Расшифруйте результаты обследования работника мясокомбината: реакция Райта «+», проба Бюрне «+ + + +», ОФП – 6. Дать заключение. Реакция Райта (реакция развёрнутой агглютинации) + - сомнительная агглютинация (титр 1:50). При таких результатах рекомендуется повторная постановка р-ции Райта через некоторое время (7-10 дней) Пробы Бюрне (кожно-аллергическая проба) ++++ - резко положительная. Она определяет способность организма специфически отвечать местной реакцией кожи на внутрикожное введение бруцеллина – фильтрата бульонной культуры бруцелл. Она становится резко положительной на 3-4 день от начала болезни, в дальнейшем сохраняется с большим постоянством на протяжении очень длительного времени, даже после клинического выздоровления. ОФП (опсонофагоцитарная проба) 6 –слабоположительная. Её проводят с 15-20 дня заболевания. Она основана на способности сегментоядерных нейтрофилов фагоцитировать бруцеллы благодаря наличию в крови человека специфических опсонинов, нарастающих в процессе бруцеллезной болезни (можно определить по формуле: Фагоцитарное Число Больного разделить на Фагоцитарное Число Здорового (Фагоцитарное Число – это среднее число поглощенных микробных клеток в одном фагоците)). Реакция Райта и проба Бюрне взаимно дополняют друг друга. Максимальный диагностический эффект достигается при комплексном их применение, что является надежным способом диагностики бруцеллеза. Вследствие сомнительной реакции Райта можно предположить: латентный период либо недавно перенесенное заболевание – бруцеллез. А положительная пробы Бюрне сохраняется в течение длительного времени, даже после полного клинического выздоровления.