Приложение № 1 Лабораторная диагностика сифилиса

1. Материал и его отбор

1. Отделяемое из твердого шанкра (берут в специализированных лабораториях, в клиническом отделении).

Для получения необходимо:

- тщательно промыть язву или эрозию ваткой (избегать сильного растирания и кровотечения), смоченной стерильным физиологическим раствором (0,85% NaCl);

- очищенную поверхность осторожно растираем прокаленным и остуженным металлическим шпателем (можно снимать край шанкра пинцетом);

- отделяемое (оно появляется не сразу), набрать в пастеровскую пипетку и далее использовать для микроскопического исследовании;

- при наличии инфильтрата без язвы – пунктат шприцом.

2. Пунктат лимфатических узлов.

3. Отделяемое или соскоб с кожных поражений сыпных элементов при вторичном сифилисе.

4. Спинномозговая жидкость (пунктат).

5. Кровь(брать натощак, не менее 2-х мл) в сухие чистые пробирки для серологических проб, направляют в закрытых пробкой пробирках в специализированную лабораторию.

2. Микробиологическое исследование при сифилисе.

Материал: - Оделяемое: твердого шанкра, кожных поражений при вторичном сифилисе, пунктат лимфатических узлов.

Микроскопическое исследование

1.Нативный препарат 2. Препараты, 3. Препараты,

для микроскопии окрашенные по: обработанные по:

- в темном поле - Граму, - Бурри,

- с фазово-контрастным - Романовскому-Гимзе, - Морозову.

устройством - флюорохромом - РИФ, РНИФ

Серодиагностика

Для скрининга используется реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном, которую называют ЭДС – экспресс-диагностика сифилиса.

Материал :

Сыворотка крови, ликвор

С визуальной оценкой реакций: Оценка реакций при микроскопии

Специфических - р.иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

• р.Вассермана;

• РПГА - непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ)

- прямой иммунофлюоресцентный (РИФ)

Приложение № 2

Иммунологическая диагностика сифилиса.

1. В качестве антигенов для реакции Вассермана используют:

- спиртовый экстракт липидов из мышцы сердца быка с добавлением 0,25 – 0,3 % холестерина (близок по составу к трепангам);

- кардиолипиновый (высокоочищенный экстракт бычьего сердца, имеющий постоянный химический состав липидов и смешанный в постоянной пропорции с лецитином, холестерином (постоянство химического состава обеспечивает унификацию результатов);

- протеиновый специфический комплекс (ультрозвученный антиген) из культуры бледных трепонем.

Кардиолипиновый антиген лишен антикомплементарности и гемотоксичности (поэтому нет необходимости в контролях).

2. Схема основного опыта реакции Вассермана (при объеме 2.5 мл)

№ п/п	Ингредиенты	№ пробирок
		1	2	3		контроли
						Сыворотки		Антигена на анти-комплементарность		Гемотоксич-носгь
1.	Испытуемая, инактивированная при + 56^о С 30 минут сыворотка больного, мл	0,1	0,1	0,1		0,1		-	-	-
2.	Физиологический раствор (0,85 % NaCl)	0,4	0,4	0,4		0,9		0,5	0,5	1,0	1,0
3.	Антиген № 1 кар-диолипиновый антиген,разведенный по титру	0,5	-	-		-		-	-	-
4.	Антиген № 2 спиртовый экстракт липоидов из мышцы сердца быка	-	0,5	-		-		0,5	-	0,5	-
5.	Антиген № 3 ультраозвученный антиген из культуры бледных трепонем	-	-	0,5		-		-	0,5	-	0,5
6.	Комплемент в рабочей дозе	0,5	0,5	0,5		0,5		0,5	0,5	-	-
В термостат на 45 минут, при + 37^о С.
7.	Гемолитическая система (сенсибилизированная)	1,0	1,0	1,0	1,0		1,0		1,0	1,0	1,0
Результат у больного сифилисом		Задержка гемолиза			Гемолиз		Гемолиз		Гемолиз	Нет гемолиза	Нет гемолиза