Принцип работы иммунохроматографического экспресс-теста.

• 1 – образец, содержащий аналит; 2 – конъюгат; 3,4 – иммобилизованные антитела (тестовая и контрольная полосы); 5 – подушечка для образца; 6 – подушечка для конъюгата; 7 – мембрана; 8 – подушечка для абсорбции реагентов; 9 – подложка для мембраны; 10 – тестовая полоса: положительный результат; 11 – контрольная полоса: достоверный результат теста.

•Схема работы иммунохроматографического экспресс-теста (на

примере тестов производства компании R-Biopharm (ФРГ) приведена на Рис.

•Исследуемый образец суспендируют в специальном буферном растворе, твердым частицам дают осесть в течение нескольких минут.

•Надосадочную жидкость вносят в специальное окошко тест- кассеты, после чего она смешивается в определенной пропорции с конъюгатом — специфичными к определяемому антигену антителами, связанными с окрашенными частицами латекса.

•Частицы образовавшегося комплекса «антиген–конъюгат» двигаются с током жидкости вдоль нитроцеллюлозной мембраны, в определенном месте которой (тестовой зоне) иммобилизованы другие антитела, также специфичные к антигену.

•Молекулы этих антител связывают частицы движущегося комплекса, в результате чего в тестовой зоне концентрируются окрашенные частицы и образуется видимая глазом полоса, свидетельствующая о наличии определяемого возбудителя в образце.

•Кроме того, проявляется контрольная полоса, свидетельствующая о том, что миграция образца вдоль мембраны произошла нормально, следовательно, анализ выполнен правильно и его результат достоверен.

•На мембране комбинированных экспресс-тестов, предназначенных для определения нескольких возбудителей одновременно, антитела разной специфичности присутствуют в нескольких тестовых зонах, соответственно в результате анализа может окраситься несколько тестовых полос, обычно разного цвета, соответствующих присутствующему в образце возбудителю

•Положительный результат экспресс-теста RIDA Quick Verotoxin / О157 Combi

•Формат теста: вверху – тест-кассета, внизу – тест-полоска.

1 – участок внесения образца.

2 – участок расположения конъюгата.

3 – реакционная зона; слева направо – контрольная полоса (С); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии в образце веротоксина (T2); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии антигенов штамма O157 (T1).

4 – участок абсорбции реагентов (закрыт пленкой с названием теста).

Острые бактериальные кишечные инфекции

•Острые бактериальные кишечные инфекции — диареи — относятся к числу наиболее распространенных болезней. Их возбудителями являются многие виды бактерий, но наиболее часто - представители семейства Enterobacteriaceae. Оно объединяет бактерии, которым присущи следующие признаки:

•1) единство морфологии короткие, не образующие спор палочки с закругленными концами, подвижные (перитрихи) или неподвижные, не образующие или образующие капсулы;

2)отрицательная окраска по Граму; 3) ферментация глюкозы (и ряда других углеводов) с образованием кислоты и газа или только кислоты; 4) отсутствие, как правило, протеолитических свойств; 5) факультативные анаэробы или аэробы; 6) хорошо растут на обычных питательных средах; 7) место обитания ки шечный тракт и дыхательные пути; 8) фекально-оральный (в некоторых случаях — воздушно-капельный) путь заражения;

9)отсутствие цитохромоксидазы; 10) каталазопозитивны; 11) восстанавливают нитраты в нитриты; 12) хемоорганотрофы;

13)сумма Г + Ц в ДНК - 39-59 мол %; 14) обладают пиразинамидазой.

•Семейство Enterobacteriaceae

насчитывает более 30 родов и более 100 видов. Наиболее важными для человека являются роды: Escherichia. Citrobacter, Enterobacter, Hafnia. Klebsiella.

Salmonella. Египта, Serratia,

Edwardsiella, Shigella. Yersinia.

Proteus. Morganella, Providencia.

•Представители семейства являются грамотрицательными палочками размером 1-5x0,4-0,8 мкм. Спор

•не образуют, за исключением родов Shigella и Klebsiella, подвижны за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Некоторые образуют капсулу.

•Растут на простых питательных средах, большинство, за исключением рода Yersinia, хорошо культивируются при 37 С.

•Факультативные анаэробы. Обладают оксидативным и бродильным метаболизмом. Оксидазоотрицательны. Обладают нитратредуктазой.

•Глюкозу ферментируют муравьино-кислым брожением с образованием как большого количества кислот, выявляемых реакцией метиленового красного, так и 2,3-бутандиола, который определяют в реакции Фогеса- Проскауэра.

•Некоторые представители семейства при ферментации глюкозы образуют газ.

•Энтеробактерии обладают широким спектром биохимической активности, которая служит основой для подразделения внутри семейства на роды, а внутри некоторых родов на виды. Ключевыми тестами при первичной идентификации энтеробактерий являются

•• способность образовывать газ при ферментации глюкозы;

•• способность расщеплять лактозу;

•• продукция сероводорода.

Для родовой идентификации также определяют продукты, образующиеся при ферментации глюкозы (реакции с метиленовым красным и Фогеса- Проскауэра), способность продуцировать индол, расщеплять мочевину, утилизировать цитрат, вырабатывать ферменты, превращающие аминокислоты - декарбоксилазы лизина и орнитина, дезаминазу фенилаланина, а также способность использовать различные моно-, олиго- и полисахариды в качестве энергетического источника.

•Дифференциация представителей семейства Enterobacteriaceae на среде Клиглера: 1 - среда до посева; 2 - Salmonella; 3 - Escherichia; 4 - Shigella; 5 - Salmonella Typhi

• Представители родов Escherichia, Salmonella, Shigella являются возбудителями острых кишечных инфекций, энтеропатогенные иерсинии Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica вызывают у человека псевдотуберкулез и кишечный иерсиниоз соответственно, а Y. pestis - чуму. Представители родов

Klebsiella, Proteus, Providencia, Serratia являются возбудителями внутрибольничных инфекций, а некоторые из них вызывают пищевые токсикоинфекции

Эшерихии (род Escherichia)

•Прямые грамотрицательные палочки размером 0,4-0,6x2- 6 мкм, подвижные за счет перитрихиально расположенных жгутиков.

•Культуральные свойства. На плотных средах образуют колонии в R- и S-формах. Колонии в S-формах гладкие, блестящие, полупрозрачные. На жидких средах образуют диффузное помутнение и придонный осадок.

•Биохимические свойства. Обладают выраженной биохимической активностью. Биохимическими свойствами, составляющими основу дифференциальной диагностики при бактериологическом исследовании, являются:

•• продукция кислоты и газа при ферментации глюкозы;

•• ферментация лактозы;

•• отсутствие продукции сероводорода;

•• продукция индола.

•Микробиологическая диагностика

осуществляется бактериологическим методом. Материалом для исследования при кишечных эшерихиозах служат испражнения, при парентеральных - материал из соответствующего инфекционного очага (моча, отделяемое раны, кровь, ликвор). Исследуемый материал (кроме крови и ликвора) засевается на дифференциальные лактозосодержащие среды, после инкубации при 37 С в течение 18 ч отбираются колонии, агглютинирующиеся поливалентной ОВ- агглютинирующей сывороткой, которые подвергаются идентификации до вида по биохимическим тестам с последующим определением их серологического варианта.