H. influenzae
H. influenzae отличается высокой прихотливостью при культивировании на искусственных питательных средах. Для ее роста необходимы ростовые факторы, содержащиеся в эритроцитах (что отражает название Haemophilus – «любящие кровь»), в частности Х и V. Однако в нативной бараньей и человеческой крови находятся ферменты (НАДазы), разрушающие V фактор. Поэтому V- зависимые виды гемофил плохо или совсем не растут на кровяном агаре (КА), приготовленном на основе бараньей или человеческой крови. На КА, приготовленном на основе лошадиной или кроличьей крови, гемофильные палочки могут расти в виде мельчайших точечных колоний. Они обладают цитохромоксидазной и каталазной активностью. Для чистой культуры гемофильной палочки характерно наличие специфического мышиного запаха.
H. influenzae
H. influenzae will grow in
the hemolytic zone of
Staphylococcus aureus on
blood agar plates. The hemolysis of cells by S. aureus releases nutrients vital to the growth of H. influenzae. H. influenzae
will not grow outside the hemolytic zone of S. aureus due to the lack of nutrients in these areas.
H. influenzae
Для улучшения выделения H. influenzae из клинического материала рекомендуется использовать шоколадный агар. Вероятность выделения МО из клинического материала нижних дыхательных путей повышается при использовании питательных сред, содержащих бацитрацин (могут применяться как готовые коммерческие среды, так и приготовленные на основе шоколадного агара). Также могут быть использованы коммерческие сапонинобацитрациновые диски или диски с бацитрацином (10 ЕД). Высокая концентрация этого антибиотика подавляет рост большинства других МО, являющихся представителями микрофлоры дыхательных путей (стафилококков, стрептококков и др.), что позволяет получить рост гемофильной палочки из сильно контаминированного клинического материала. Оптимальными условиями инкубации H. influenzae являются влажная атмосфера с повышенным содержанием СО2 (5-10%) и температура 35-37 оС. Подобные условия могут быть созданы в СО2-термостате или при инкубации чашек в эксикаторе с зажженной свечой.
В связи с тем что гемофильная палочка отличается низкой жизнеспособностью во внешней среде, рекомендуется использовать транспортные средства и немедленно (не позднее 2 ч) доставлять материал в клиническую лабораторию
H. influenzae
Для идентификации H. influenzae рекомендованы следующие тесты:
• тест на наличие β-галактозидазной активности (гемофильная палочка не обладает
этим ферментом, и, таким образом, на основании данного теста может быть дифференцирована от других видов гемофил, нуждающихся в X и V факторах);
•тест с сапонином (основан на способности сапонина лизировать эритроциты, что приводит к высвобождению находящихся в эритроцитах X и V факторов. Рост колоний вокруг дисков с сапонином и его отсутствие вне зоны гемолиза служат дифференциальным признаком принадлежности исследуемого МО к роду Haemophilus);
•тест на способность к сателлитному росту (метод «кормушек»). Принцип метода «кормушек» аналогичен описанному выше методу дисков с сапонином.
М. Килиан предложил для биотипирования H. influenzae использовать ряд биохимических тестов. На основании тестов на продукцию индола, уреазную и орнитиндекарбоксилазную активность выделяют 8 биотипов H. influenzae. Биотипирование гемофильной палочки имеет лишь эпидемиологическое значение.
Поскольку скорость бактериологического метода идентификации невысока, ведутся разработки альтернативных методов для быстрой диагностики инфекций, вызванных
H. influenzae.
В настоящее время предложены иммунологические методики выявления капсульного антигена H. influenzae типа b в ликворе, крови, плевральной жидкости и моче: латекс- агглютинация, коагглютинация со стафилококковым протеином А, встречный иммуноэлектрофорез и иммуноферментный анализ. Также разрабатываются другие экспресс-тесты для обнаружения H. influenzae (как типа b, так и нетипируемых) в клиническом материале (с помощью моноклональных антител, конъюгированных с иммунопероксидазой, радиоактивно меченые ДНК-пробы и др.).
Moraxella catarrhalis
Moraxella catarrhalis (M. catarrhalis) – это аэробные грамотрицательные диплококки (диаметром 0,6-1,0 мкм), которые могут быть снабжены фимбриями, обеспечивающими им «дергающую» подвижность. Делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях, поэтому иногда образуют тетрады (что является их отличительной особенностью). M. catarrhalis относятся к семейству Neisseriaceae, образуя подрод Branchamella в составе рода Moraxella. Ранее в соответствии с морфологическими и метаболическими признаками их рассматривали как представителей рода Neisseria, но исследование состава ДНК и жирных кислот показало отсутствие признаков генетического родства с нейссериями, и в 1970 г. эти МО были выделены в отдельный род. M. сatarrhalis, как и S. pneumoniae и H. influenzae, колонизируют носоглотку в раннем детском возрасте, и к 2 годам около 78% детей становятся бактерионосителями. До недавнего времени M. сatarrhalis считались нормальными обитателями слизистых оболочек верхних дыхательных путей, однако за последние 10-15 лет накоплены убедительные данные об их участии в развитии различных инфекций.
Moraxella catarrhalis
В отличие от H. influenzae, M. сatarrhalis относится к неприхотливым МО. Посевы осуществляют на кровяной или шоколадный агар, и чашки инкубируют при температуре 35 оС в обычных условиях или в атмосфере с содержанием углекислого газа 5-7%. На КА растут в виде беспигментных (в отличие от сапрофитных нейссерий) круглых непрозрачных полусферических колоний диаметром до 2-3 мм. Идентификацию проводят с помощью коммерческих биохимических панелей (Gonochek-II, quardFERM+, NEISSERIA- KWIK, HNID Panel, Neisseria/Ha- emophylus Identification Card) [7] в общепринятых тестах по ключевым признакам: гемолиз не образуют, коррозию агара не вызывают, являются оксидазо- и каталазоположительными, не образуют кислоту из углеводов в аэробных (окисление) и анаэробных (ферментация) условиях, восстанавливают нитраты.
P. aeruginosa, Acinetobacter spp
По данным Американского центра по контролю за болезнями (СDС), суммарная доля инфекций, обусловленных P. аeruginosa, в больницах США составляет около 0,4%. Этот МО, являясь четвертым по встречаемости среди нозокомиальных патогенов, вызывает около 10,1% всех внутрибольничных инфекций. По другим данным, P. aeruginosa является причиной 28,7% всех госпитальных инфекций, 20-40% всех поздних нозокомиальных пневмоний. Наибольшую опасность P. aeruginosa представляет для онкологических, ожоговых и СПИД-больных, у которых может вызывать даже бактериемию, при которой смертность достигает 50%.
Естественной средой обитания Acinetobacter spp. являются вода и почва, они часто выделяются из сточных вод. Эти МО входят в состав микрофлоры кожи здоровых лиц (чаще колонизируют участки между пальцами ног и в паховой области, особенно у проживающих в жарком и влажном климате), желудочно-кишечного и урогенитального трактов и относятся к малопатогенным
микроорганизмам, однако наличие определенных свойств способствует повышению вирулентности Acinetobacter spp.
Acinetobacter spp
Клинически наиболее значимыми МО рода Acinetobacter spp. считаются виды A. baumannii, гораздо реже являются возбудителями заболеваний A. lwoffii. Поэтому при упоминании ацинетобактерной инфекции в первую очередь подразумевается A. baumannii. У тяжелых больных (палаты интенсивной терапии, реанимация) A. baumannii может вызывать пневмонии, трахеобронхиты, инфекции кровяного русла, мочевого тракта, катетер-ассоциированные и раневые инфекции. В отделениях интенсивной терапии (ОИТ) США в 2003 г. Acinetobacter spp. стал причиной 6,9% всего количества пневмоний, 2,4% инфекций кровяного русла, 2,1% инфекций области хирургического вмешательства и 1,6% инфекций мочевыделительной системы. В условиях тропического климата Acinetobacter spp. может обусловливать тяжелые внебольничные пневмонии.
Смертность при ацинетобактерной инфекции обычно очень высокая и составляет 20-60%, атрибутивная летальность – около 10-20%.
P. aeruginosa
P. aeruginosa и Acinetobacter spp. относятся к грамнегативным неферментирующим микроорганизмам.
P. aeruginosa («синегнойная палочка») – грамотрицательная подвижная бактерия палочковидной формы, облигатный аэроб. Имеет размеры 0,5-0,8 мкм в толщину и 1,5-3 мкм в длину. Относится к роду Pseudomonas (насчитывающему более 140 видов бактерий) семейства Pseudomonadaceae (псевдомонады).
Подавляющее большинство МО семейства Pseudomonadaceae, обитая в почве
и воде, имеют небольшое клиническое значение (за исключением B. mallei и B. pseudomallei – возбудителей сапа и мелиоидоза соответственно). В бытовых условиях синегнойная палочка способна колонизировать кафельную поверхность, забиваясь в швы и образуя защитную биопленку, в силу чего на нее плохо воздействуют стандартные дезинфицирующие средства.
В больницах P. aeruginosa может находиться на поверхности различных предметов и оборудования, а также в резервуарах с жидкостями. Часто переносится с зараженной пищей или водой, а также транзитом через санузлы, раковины, ручки кранов для воды, предметы, особенно влажные (например, полотенца), которыми могут совместно пользоваться больные, при непосредственном контакте с бактерионосителем или опосредованно через руки медицинского персонала и т.п.
Высокая частота выделения и более выраженная патогенность P. aeruginosa в сравнении с другими псевдомонадами связаны с наличием у этого МО ряда факторов вирулентности, способствующих колонизации и инфицированию тканей организма человека. К детерминантам вирулентности относятся факторы адгезии, инвазии и цитотоксичности.
Acinetobacter
Род Acinetobacter объединяет грамотрицательные (иногда плохо обесцвечиваются спиртом при окраске по Граму) неподвижные (может наблюдаться движение рывками за счет полярно расположенных фимбрий длиной 10-15 мкм и диаметром 6 мкм) коккобациллы. Строгие аэробы,
оксидазонегативные и каталазоположительные.
A. baumannii – водный организм, обитающий в различных искусственных и естественных водоемах. В то же время эти бактерии способны выживать на сухой поверхности до 1 месяца.
В условиях стационаров A. baumannii часто колонизирует растворы для наружного, внутреннего и парентерального многоразового применения. МО обладает низкой вирулентностью. Часто его можно выделить с кожи и мокроты больных, ран, мочи, что, как правило, свидетельствует не об инфекции, а о колонизации.
Развитие ацинетобактерной инфекции нетипично, более характерно для иммуноскомпрометированных больных. Инфекция более тропна к тканям и органам с большим содержанием жидкости (респираторный и мочевыделительный тракты, ликвор, кровь, перитонеальная жидкость). Проявляется в виде нозокомиальных пневмоний, инфекций, ассоциированных с длительным перитонеальным диализом, катетер-ассоциированных инфекций. Наличие МО в респираторных секретах интубированных пациентов практически всегда свидетельствует о колонизации. Пневмонии могут быть эпидемиологически связаны с колонизацией респираторного оборудования или жидкостей, плевриты – дренажных систем, сепсис – катетеров и прочего инфузионного оборудования и растворов.