Самостійна робота студентів

1. Підготувати листок хроматографічного паперу для хроматографії (відмітити лінію старту та точки 1, 2, 3, 4).

2. Нанести 1, 2, 3, 4 обєми 0,01 М розчину амінокислоти, причому кожну наступну краплину розчину наносять після повного висушування попередньої. На 5-ту точку наносять один обєм розчину амінокислоти невідомої концентрації.

3. Занурити хроматограму на кілька секунд у кювету з 0,5%-м розчином нінгідрину в ацетоні.

4. Просушити хроматограму при кімнатній температурі та прогріти протягом 15 хв. для проявлення забарвлення в сушильній шафі при 60⁰ С.

5. Зони хроматограми з яскраво-ліловими плямами амінокислот вирізати ножицями, подрібнити та вмістити в окремі пробірки №1, №2, №3 та №4.

6. Збоку на чистому місці вирізати рівний за розміром кружечок

контрольної зони, також подрібнити та вмістити в пробірку №5.

5. Елюювати комплексну сполуку амінокислоти з паперу в розчин.

6. Витримати пробірки протягом 30 хв. в темному місці при кімнатній температурі.

7. Фотометрувати проти контрольної проби на ФЕК при 540 нм (зелений).

10.На основі знайденої оптичної густини і взятих концентрації

побудувати калібрувальний графік, для чого на осі абсцис відкладають концентрацію амінокислот в мікромолях, а на осі ординат – оптичну густину.

11. Знайти оптичну густину амінокислоти невідомої концентрації та за

калібрувальним графіком визначити її концентрацію.

12.Написати висновок.

Реактиви:

1. 0,01 М розчини амінокислот.

2. 0.015, 0.025, 0.03, 0.035 М розчини амінокислот (для невідомої концентрації).

3. Суміш розчинників н-бутанол, оцтова кислота, вода в обємному співвідношенні 4:1:5 (40 мл н-бутанолу, 10 мл оцтової кислоти, 50 мл дистильованої води струшують протягом 1-2 хв. в ділильній воронці. Після розшарування нижній шар зливають, а верхній використовують як рухомі фазу).

4. 0,5% -й розчин нінгідрину в ацетоні (95 частин 0,5%-го розчину нінгідрину в ацетоні, 1 частина льодяної оцтової кислоти і 4 частини води змішують безпосередньо перед визначенням).

5. 0,005%-й розчин CuSO₄5H₂O в 75%-му етиловому спирті (5 мг сульфату міді розчиняють в 22 мл води і обєм доводять 96%-м спиртом до 100 мл).

6. 96%-й етиловий спирт.

7. Стандартні 0,01 М розчини амінокислот (кількість кожної амінокислоти, що відповідає 0,05 М розчину, зважують на аналітичних терезах і розчиняють в 0,01 н розчині соляної кислоти).

Матеріали та обладнання: хроматографічний папір, дозатори з наконечниками, кювета з розчином нінгидрину в ацетоні, пробірки скляні зі штативом, витяжна шафа, термостат з t = 60⁰ С, термостат з кімнатною температурою, ФЕК з довжиною хвилі 540 нм (зелений світлофільтр), лінійка, олівець, ножиці.

Підготовка до проведення лабораторної роботи

Студенти розділяють на бригади по 2 особи, проводять попереднє тренування в нанесенні води на звичайний папір за допомогою дозатора. Олівцем підписують пластинку (прізвище або № бригади).

Хід роботи

На листку хроматографічного паперу олівцем відмічають лінію старту та 4 точки для нанесення розчину амінокислоти відомої концентрації та 5-ту точку для амінокислоти невідомої концентрації.

лінія

старту

____х____х____х____х____х____

1 2 3 4 5