Занятие 32

Цель занятия

1. Знать:

• общую характеристику и классификацию методов жидкостной хроматографии;

• основные принципы плоскостной жидкостной хроматографии и применение её в анализе, алгоритм получения и интерпретации плоскостных хроматограмм;

• основные принципы высокоэффективной жидкостной хроматографии и её отличие от классической жидкостной хроматографии, устройство и принцип работы жидкостного хроматографа, требования к неподвижным и подвижным фазам, используемым в ВЭЖХ;

• основные закономерности, лежащие в основе методов жидкостной хроматографии: ионообменной, эксклюзионной и др., используемые неподвижные и подвижные фазы, выбор условий хроматографирования и применение в анализе.

1. Уметь:

• проводить хромато-фотометрическое определение аминазина.

1. Жидкостная хроматография. Общая характеристика и классификация.

2. Плоскостная хроматография (бумажная, тонкослойная). Характеристики подвижных и неподвижных фаз. Методика получения плоскостной хроматограммы.

3. Анализ плоскостной хроматограммы. Практическое применение бумажной и тонкослойной хроматографии.

4. Колоночная жидкостная хроматография. Устройство и принцип работы жидкостного хроматографа.

5. Ионообменная хроматография. Характеристика неподвижных и подвижных фаз. Ионообменное равновесие.

6. Практическое применение ионообменной хроматографии. Понятие об ионной и ион-парной хроматографии.

7. Эксклюзионная хроматография. Механизм разделения, характеристика используемых твёрдых носителей и растворителей. Практическое применение.

8. Практическое применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в фармацевтическом анализе.

1. Какой вариант жидкостной хроматографии называется высокоэффективным? Чем отличаются нормально-фазовая и обращено-фазовая ВЭЖХ?

2. Охарактеризуйте основные этапы получения и интерпретации плоскостной хроматограммы.

3. В состав некоторых готовых пластинок для ТСХ, выпускаемые различными фирмами, специально добавляют вещества (например, силикат цинка), которые флуоресцируют в УФ-свете (такие пластинки имеют маркировку F или UV). Зачем это делается?

4. Количество исследуемого вещества (объём анализируемого раствора), наносимого на хроматографическую пластинку имеет важное значение. Если количество вещества слишком мало, то его можно не заметить при последующем проявлении. Нанесение на пластинку слишком большого количества исследуемого вещества приводит к размыванию пятна и уменьшению величины R_f. Объясните, почему это происходит?

5. Почему все растворы, используемые в ВЭЖХ, перед применением должны быть освобождены от растворённых в них газов (“дегазированы”)?

6. При работе с какими элюентами: вода, ацетон, метанол, н-гексан, пиридин, бензол использование УФ-детектора с фиксированной длиной волны (254 нм) невозможно?

7. Предложите алгоритм ионообменного разделения смеси нескольких слабых органических кислот (pK_a  5). Какой ионообменник следует взять? При каком примерно значении рН следует проводить разделение? От чего будет зависеть порядок выхода компонентов разделяемой смеси из колонки?

8. Эксклюзионная хроматография может быть как колоночной, так и плоскостной, проводиться как в «классическом» варианте, так и в высокоэффективном. Что такое «гель-фильтрационная» и «гель-проникающая хроматография»?

9. Объясните принцип ион-парной хроматографии. Для разделения каких веществ она используется?

10. Охарактеризуйте возможные пути использования жидкостной хроматографии (плоскостной, колоночной) в фармацевтическом анализе.