Фибриноген

Разработаны различные методы определения фибриногена: кинетический, весовой,

коагулометрический и др. Весовой метод основан на измерении фибриногена в фибрино-вом сгустке путем взвешивания последнего на торсионных весах (метод Рутберг). На рас­творении сгустка и количественном спектрофотометрическом определении белка основан метод Белицер и соавт.. Следует отметить, что метод Рутберг достаточно прост в испол­нении, но дает очень большую ошибку определения, и результат тестирования напрямую зависит от умения лаборанта. Метод Белицера и соавт. более точен, но сложен и длителен по исполнению.

Принцип метода

Метод Клаусса основан на особенностях кинетики реакции фибриноген-тромбин, когда исследуемую плазму крови разбавляют в 10 раз с целью снижения влияния ингиби­торов тромбина (антитромбина III и др.). В этих условиях при высоких концентрациях тромбина и низких концентрациях фибриногена время реакции образования сгустка зави­сит только от количества фибриногена.

Метод Клаусса очень прост в исполнении, определяет только активный фибрино­ген, метод точен и стандартен, широко применяется за рубежом.

Единственный недостаток метода - невозможность работы ручным методом, т.к. образуемый сгусток плохо различим визуально. Однако любые механические или оптико-механические коагулометры позволяют получить точные и воспроизводимые результаты исследования фибриногена по Клауссу. Как показали наши исследования, в плазме доно­ров содержание фибриногена колеблется от 1,8 до 3,5 г/л. Для работы на оптических коа-гулометрах в инкубационную смесь вносят специально разработанный мелкодисперсный каолин.

20 Аналитические характеристики Линейность определяемых значений содержания фибриногена в плазме крови челове­ка в диапазоне концентраций от 0,6 до 5,0 г/л, отклонение от линейности - не более 5%. Коэффициент вариации результатов определения - не более 5%. Чувствительность метода - 0,5 г/л.

Допустимый разброс результатов при использовании разных наборов одной серии -не более 5%.

Интерпретация результатов

В норме содержание фибриногена в плазме крови колеблется от 1,8 до 4,0 г/л.

Концентрация фибриногена возрастает с возрастом, а также при ожирении, у боль­ных атеросклерозом, сахарным диабетом, у курящих, при инфарке миокарда, канцероге­незе, нефрозе.

Фибриноген - это белок острой фазы, его концентрация увеличивается при острых ситуациях: травме, инфекции, воспалении, операции и т.п.

Возрастание в крови содержания фибриногена приводит к риску возникновения атеросклероза коронарных, мозговых и внемозговых артерий и к увеличению смертности.

В результате увеличения концентрации фибриногена в крови резко повышаются СОЭ, вязкость крови, но не усиливается гемокоагуляция.

Уменьшением количества фибриногена А ниже 1 г/л иногда обусловлены кровоте­чения только из-за недостатка фибриногена (гипофибриногенемия). Гипо- и афибриноге-немия (полное отсутствие фибриногена в крови) бывают врожденными и приобретенны­ми. Встречается и дисфибриногенемия — состояние, когда под действием тромбина фиб­риноген крови не превращается в фибрин вследствие функциональной неполноценности молекулы фибриногена. Приобретенные гипо- и афибриногенемии особенно часто выяв­ляют акушеры и хирурги у больных с развивающимся острым ДВС-синдромом, реже воз­никновение фибриногенопении связано с тяжелым нарушением функции печени.

21

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ VIII ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

Функция ф. VIIIа заключается в том, что в качестве кофактора ф. IХа он активиру­ет ф. X и многократно ускоряет процесс свертывания плазмы крови. При недостаточности ф. VIII возникает гемофилия А, которую лечат введением антигемофильных лекарствен­ных средств: свежезамороженной плазмы, криопреципитата, концентрата ф. VIII. Опреде­ление активности ф. VIII необходимо для диагностики гемофилии, для анализа активно­сти антигемофильных лекарственных средств и для наблюдения за результатами терапии.

Компания "РЕНАМ" разработала набор Фактор VIII-тест, набор реагентов для оп­ределения активности ф. VIII. В основу набора был положен одностадийный метод опре­деления активности ф. VIII.

Набор Фактор VIII-тест предназначен для количественного исследования активно­сти ф. VIII в плазме крови человека по стандартному одностадийному методу с целью ди­агностики гемофилии А и для контроля за достаточностью заместительной терапии при гемофилии А.

Принцип метода Измерение активности ф. VIII проводят в сильно разведенных образцах. При разве­дении активность всех факторов, необходимых для процесса свертывания, резко снижена. Для компенсации дефицита этих факторов в инкубационную среду вносят субстратную плазму, в которой практически отсутствует (менее 1%) активность ф. VIII, но сохранена активность всех других факторов свертывания. В такой системе продолжительность про­цесса свертывания зависит только от активности ф. VIII, которую определяют по калиб­ровочному графику.

Анализ активности ф. VIII в криопреципитате Учитывая, что активность ф. VIII в криопреципитате значительно выше, чем в плазме крови и в СЗП, а также то, что активность ф. VIII от разных производителей варь­ирует в достаточно широком диапазоне: от 70 до 200 МЕ в дозе (10-20 мл), исследователь должен сам подобрать необходимое разведение криопреципитата. Принято использовать 2 разведения: предварительное и последующее.

Аналитические характеристики Активность фактора VIII в контрольной плазме - 90-100 % или 0,9-1,0 МЕ/мл.

22

Допустимое отклонение активности фактора VIII в контрольной плазме от аттесто­ванного значения - не более 10%.

Коэффициент вариации результатов определения - не более 10%.

Допустимый разброс результатов при определении активности фактора VIII в од­ной пробе плазмы крови разными наборами одной серии - не более 10%.

Чувствительность определения - 1,5 %.

Линейность определяемых значений активности фактора VIII в плазме крови чело­века в диапазоне разведений контрольной плазмы - от 2 до 100%.

Диапазон определяемых значений активности фактора VIII колеблется от 2 до 200 %.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ IX ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

Все исследования проводятся точно так же, как при определении активности ф. VIII, но в качестве субстратной берется плазма больных гемофилией В.

ФИБРИНСТАБИЛИЗИРУЮЩИЙ ФАКТОР XIII

Фактор XIII (ф. XIII) присутствует в плазме крови в виде профермента, превраща­ется в активный фермент на конечном этапе свертывания под действием тромбина в при­сутствии ионов кальция. Активированный ф. ХIIIа действует как трансамидаза, переводя водородные связи между двумя фибрин-мономерами в стабильные 8 - (у)-глутамил-лизиновые пептидные связи. Эти реакции трансамидирования имеют место между а и у цепями фибрин-мономеров, не затрагивая b-цепи.

23 Принцип метода Определение активности ф. XIII основано на оценке лизиса фибринового сгустка, содержащего различное количество исследуемого ф. XIII, в 5% монохлоруксусной кисло­те.

В контрольной нормальной плазме наименьшее разведение, при котором сгусток разрушается на мелкие фибриновые нити, составляет 1:128 - 1:256. Активность ф. XIII в исследуемой плазме пациента (А, %) рассчитывают по формуле.

титр иссл плазмы

А% = «100

титр контр плазмы

Интерпретация полученных данных

Снижение активности ф. XIII наблюдается у больных с врожденным дефицитом этого фактора, а также как вторичный синдром при тяжелых заболеваниях печени, при сепсисе, лучевой болезни, после тяжелых операций. Клиническая картина дефицита ф. XIII проявляется в тяжелом геморрагическом синдроме, при этом продолжительность кровотечения может достигать 12-36 ч.

Снижение активности ф. XIII наблюдается у больных с врожденным дефицитом этого фактора, а также как вторичный синдром при тяжелых заболеваниях печени, при сепсисе, лучевой болезни, после тяжелых операций. Клиническая картина дефицита ф. XIII проявляется в тяжелом геморрагическом синдроме, при этом продолжительность кровотечения может достигать 12-36 ч.

Активность ф. XIII у здоровых лиц составляет 60-150%. Активность ф. XIII снижена у но­ворожденных (до 40% от уровня у взрослых), достигает взрослого уровня к 8 годам.