книги из ГПНТБ / Эйнор Л.О. Реконструирование энергетических механизмов фотосинтеза

новление Цит с, причем, как было показано позднее, количест­ во восстановленного в темноте Цит с отражало количество накопленного восстановителя. Этот восстановитель был назван «цитохром-с-восстанавливающим фактором» (ЦВФ).

Фьюджита и Майерс [406—410] привели доказательства ре­ ального существования ЦВФ и даже попытались его выделить. Оказалось, что это вещество (или вещества) обладает очень низким редокс-потенциалом (—0,5 в), а по химической природе

_, |

•о

X

X

ШИРМ I

Рис. 28. Трехступенчатая схема переноса элек­

трона при	фотосинтезе	с пунктами включения
экзогенного	животного	цитохрома с в моделях
с хлоропластами.

не относится непосредственно к белкам или липидам. ЦВФ до­ статочно прочно связан с ламеллярной структурой: промывание солевыми растворами, диализ, обработка хлоропластов озвучива­ нием не ведут к растворению ЦВФ.

Рассмотрим некоторые особенности поведения экзогенного животного Цит с, которые привели к открытию веществ весьма

близких,	если не идентичных, загадочному X		в схемах ЭТЦ.
В 1965 г. Фьюджита и Майерс		[406], изучая	хлоропластные
частицы,	выделенные из Anabaena,	показали,	что в аэробных

условиях они ведут себя «противоположным образом» по сравне­ нию с хлоропластами из высших растений. На свету происходила не фоторедукция, а фотоокисление Цит с. Однако в анаэробных условиях можно было четко наблюдать обратное темновое вос­ становление окисленного Цит с, и эти циклы ; можно было пов-

торять многократно. Темновое восстановление в аэробных усло-

• виях б ы л о ' З н а ч и т е л ь н о меньшим и тормозилось диуроном. Бензилвиологен, ФМН и диквейт также подавляли аэробное темно-

.' вое восстановление Цит с, но зато усиливали аэробное световое
окисление. В анаэробных	условиях	эти редокс-реакции Цит	с
' были индифферентны к	красителям	типа бензилвиологена,	а

ФМС ингибировал как аэробно, так и анаэробно все реакции.

Для	проведения	этих реакций	клетки водоросли		разрушали
в среде	0,1 М rpuc-буфера рН 7,8, 0,1 М NaCl, 0,001				М MgCl2 ,
0,001 М СаС12 , 0,001 М ЭДТА и			0,4 г/мл	полиэтиленгликоля.
Для разрушения		использовали	стеклянные	бусы.	Активную

, фракцию частиц выделяли центрифугированием в пределах 8000—21 000 g. Реакцию ЦВФ обнаруживали при освещении светом с длиной волны 630 нм. Очень важно, что экзогенный

Цит с553 из самой эвглены вел себя как животный		Цит с (но
не Цит с549).
і Като и Сан-Пьетро [588—592]	весьма искусно	применили
сравнительно-биохимический метод	исследований и	объяснили

разницу в поведении частиц хлоропластов из шпината и эвглены. Как показали Смайли [875] и Перини [798], в процессе выделе­ ния хлоропластов из эвглены теряется Цит с553, по функции аналогичный Цит f из высших растений. Цит f в высших расте­ ниях, как мы отмечали ранее, более прочно связан со структурой

. пигмент-белкового комплекса, чем Цит с553 из эвглены, и его освобождение связано с большими трудностями.

Хлоропласты эвглены, в отличие от хлоропластов шпината или гороха, легко восстанавливают типичные окислители Хилла,

Іно не Цит с, даже при добавлении ФПНР. Следовательно, по­ теря Цит с553 нарушает взаимодействие двух фотосистем.

Однако если в инкубационную смесь с хлоропластами из эвглены ввести, наряду с ФПНР, Цит с553, то легко можно на­ блюдать при освещении восстановление НАДФ или Цит с.

Фьюджита и Майерс [407] показали, что хлоропластные ча­ стицы, полученные озвучиванием клеток АпаЬаепа с последую­ щим промыванием путем центрифугирования, не содержат бел­ ков фракции ФПНР, Пц, Фд и Цит типа f и не способны к реак­ ции Хилла как с Цит с, так и с ДХФИФ, но при освещении в анаэробных условиях проявляют активность фотоокисления Цит с. Таким образом, в круг реакций окислительно-восстановитель­ ного обмена оказывается втянутым короткий участок цепи пе­ реноса электрона

Цит с ФС-І -> ЦВФ.

В темноте более конкурентоспособным, чем Цит с, в роли окислителя является Ог. Как отмечалось выше, промывание, ди­ ализ или озвучивание не влияют на реакцию. Термостабильный ЦВФ можно было частично отделить после обработки ацетоном

хлоропластных частиц посредством буферной экстракции. Эти авторы показали [409], что молярная концентрация ЦВФ со­ ставляет 1/10 или 1/5 концентрации Хл а.

Принцип выделения ЦВФ заключался в следующем. Фраг­ менты ламелл анабены или шпината вносили в охлажденный до температуры —50° С ацетон, конечная концентрация которого составляла 60%. Спустя 5 мин ацетон отделяли от частиц цент­ рифугированием, а остаток быстро высушивали и экстрагировали водным раствором ЭДТА в течение 20 ч. Экстракцию повторяли дважды, экстракты диализировали против 0,001 М трис-буфе- ра рН 7,6 и концентрировали лиофилизацией. Белки и пигменты удаляли 6-минутным нагреванием при 100° С с последующим центрифугированием. Раствор пропускали через сефадекс G-25 для отделения от низкомолекулярных веществ. На колонке пик ЦВФ следовал за пиком белков, а за пиком ЦВФ следовал пик низкомолекулярных веществ, активных в восстановлении ДХФИФ. Молекулярный вес ЦВФ 3000—4000. Положение на колонках ионообменников веществ, обладавших активностью ЦВФ и стимулировавших ФФ, совпадали.

Однако как химическая природа ЦВФ, так и место его в ЭТЦ при фотосинтезе остаются неясными. ЦВФ обнаружен в ламеллах шпината, анабены, анацистиса и других растений [408], поэтому можно предположить, что это универсальный компонент хлоро­ пластов. По-видимому, все же проявляются существенные раз­ личия в активности ЦВФ среди представителей разных система­ тических групп растений. Возникает, кроме того, вопрос: почему для проявления активности ЦВФ в работе со шпинатом или хламидомонадой необходимо дополнительное внесение Пц и Цит f?

Необходимо получить ответы и на следующие вопросы:

1. Каково отношение открытого ЦВФ к другим факторам X?- Чем объяснить большое число таких X? В связи с последним — нет ли более глубокой связи между открытием большого числа форм факторов X, Q н существованием нескольких форм хлоро­ филла и не является ли такая аналогия проявлением биологиче­ ской закономерности функционирования «ловушек»?

2. Каковы отношения между «цитохром-с-фотооксидазоц», реакционными центрами фотосистем и пигмент-белковыми комп­ лексами в хлоропластах? Является ли «цитохром-с-фотооксидаза» таким модифицированным комплексом, или же это модифи­ цированный реакционный центр?

Хотя последний вопрос несколько схоластичен, вопрос о вза­ имных отношениях между различными открытыми ферментатив­ ными и фотохимическими активностями хлоропластов наименее исследован. Нам кажется, что следующий шаг логично сделать в сторону рассмотрения вопросов анализа и реконструирования уже на более мелких субъединицах клетки, чем целые изолиро­ ванные хлоропласты.

3. ПИГМЕНТ-БЕЛКОВО-ЛИПИДНО-ВОДНЫЕ КОМПЛЕКСЫ ХЛОРОПЛАСТОВ

Внастоящее время четко выкристаллизовались представления

оведущей роли тилакоидных мембран как в осуществлении

превращения энергии поглощаемых квантов света в энергию в виде химических эквивалентов, так и в работе ЭТЦ.

По мнению Витта, тилакоидная мембрана является функци­ ональной единицей фотосинтеза. Отсюда следует, что дальней­ шие успехи в познании природы фотосинтетического процесса в значительной степени определяются возможностями углубле­ ния в изучение именно мембран хлоропласта.

Однако и на этом уровне сложность и запутанность реакций фотосинтеза не намного уступают тем, с которыми встречаются при исследованиях на уровне изучения целых хлоропластов. Ха­ рактерным отличием тилакоидных мембран от окружающей их стромы является особое значение упорядоченности их структур­ ной организации для выполнения ими функций как реакционных центров хлоропласта. В этом отношении тилакоид отличается от окружающей его стромы более жесткой упаковкой молекул белков и липидов.

Заметим, что экспериментальная биология приобрела ярко выраженный молекулярно-мембранный аспект [142], хотя сле­ дует признать, что представления о структурной организации мембран, в том числе тилакоидов, носят довольно-таки поверх­ ностный характер (см. стр. 55—59).

Нерастворимость тилакоидных мембран в водных растворах в отсутствие агрессивных химических агентов позволяет отделить материал мембран от материала стромы хлоропластов. Однако для выделения фракции мембран при центрифугировании пред­ варительно требуется довольно жесткое дезинтегрирование ма­ териала. В конечном итоге как физические методы разрушения хлоропластов, так и применение детергентов приводят к выделе­ нию частиц мембран, которые по сути представляют нативные пигмент-'белковые комплексы. Таким образом, эти комплексы от­ ражают нативную структуру мембран, нарушенную в большей или меньшей степени. Необходимо заметить, что в понятие «пиг­ мент-белковые комплексы» разные исследователи вкладывают различный смысл. В одних случаях пигмент-белковыми комп­ лексами называют неопределенные фракции из ламелл хлоро­ пластов, в других — совершенно искусственные образования из белков и хлорофилла, причем последние могут и не обнаружи­ вать даже тех фотохимических свойств, которые характерны для хлорофилла в органическом растворителе.

Так как биологические свойства тилакоидных мембран опре­ деляют состав и взаимодействие белков, липидов, пигментов и особым образом связанной (структурированной) воды, то под ПБЛВ-комплексом мы будем далее подразумевать только мелкие

частицы тилакоидов различной степени дисперсности, гомоген­ ные при ультрацентрифугировании или в электрофорезе. Рас­ плывчатость понятия в этом случае сохраняется в отношении размеров частиц, но в биохимическом плане для всех ПБЛВкомплексов характерна примерно та же надмолекулярная орга­ низация, что и для нативных ламелл. В этом случае частицы, вы­ деленные из хлоропластов с помощью детергентов и после меха­ нических воздействий и относящиеся к ФС-1 или ФС-П, будут также ПБЛВ-комплексами.

ПБЛВ-комплексы обязательно выполняют часть функций, свойственных хлоропластам, но они являются субъединицами хлоропластов, для которых принцип аддитивности не всегда вы­ полним.

Заметим, что выделенные так называемые реакционные цент­ ры ФС-1 и ФС-И уже не будут ПБЛВ-комплексами, так как в биохимическом аспекте естественные, характерные для ламелл отношения между белками, липидами и пигментами в них силь­ но нарушены при воздействии неводных растворителей.

Следует обратить внимание на два момента.

1. По ряду причин биоэнергетический аппарат дыхания жи­ вотных изучен более глубоко, чем аппарат фотосинтеза растений. При использовании митохондрий из тканей животных удалось

добиться	их фрагментации на несколько	белковых комплек­
сов, субъединиц НАД-Н-оксидазы (комплексы I , I I , IV Грина
[47, 48]),	которые в собранном виде представляют дыхательную
цепь окислительного фосфорилирования.		Имеется уже много

сведений по реконструкции дыхательной цепи. В этом случае можно применить принцип аддитивности.

2. Грин и Флейшер частицей называют водонерастворимый комплекс, легко выпадающий в осадок в относительно слабых гравитационных полях ([48], стр. 294). С этих позиций мы не можем противопоставить частицу белково-липидному комплек­ су. В биохимическом плане между ПБЛВ-комплексами и мембра­ нами хлоропластов различия не являются резкими и заключают­ ся, на наш взгляд, в более характерном сохранении последними

присущей им in vivo	структурной организации.
Таким образом,	ПБЛВ-комплекс как субъединица проще,
чем мембрана хлоропласта, но более сложный, чем			реакционный
центр. Отношения между		ними можно представить	следующим
: образом:
Хлоропласт ->- Ламелла		ПБЛВ-комплекс -> Реакционный
/ мембрана \		центр
^хлоропласта/

Пигменты,

белки,

липиды

Химический анализ целых листьев, хлоропластов и различных пигмент-белковых комплексов хлоропластов проводился неодно­ кратно.

По данным разных исследователей, в хлоропластах шпината находится 38—55% белка, 18—32% липидов и также колеблю­ щееся в процентном отношении содержание углеводов и мине­ ральных солей [107]- Пределы колебаний значительны и зависят от вида, возраста, характера (качества) питания растений, а так­ же других физиологических условий.

В последние годы благодаря заметным успехам в разработке методов выделения отдельных субхлоропластных фракций (на­ пример, рибосом, липосом, тилакоидных мембран) анализ струк­ тур приобрел большую ценность, так как результаты связыва­ лись с конкретной ролью этих веществ. В частности, Крейтц [643] приводит следующие количества молекул отдельных ком­ понентов на единицу поверхности, образуемую тремя блоками белка в ламелле, каждый из которых имеет размер 166 А X Х166А2 :

Хлорофилл		416	Фп	1
Каротиноид		84	Пх	42
Цит	/	I	Фосфолипид	204
Цит	be	1	Гликолипид	861
Пц		1	Сульфолипид	84
Фд		1	Стерол	105

Разумеется, эти величины получены на основании расчетов, точность которых довольно условна, так как ошибки допускаются в процессе выделения препаратов и при проведении самого ана­ лиза. Однако следует подчеркнуть, что если расчеты Крейтца позволяют построить модель мембраны и, конечно, представляют интерес, то проведение так называемых общих анализов к на­ стоящему времени утратило ценность. Измерения содержания «общего бе.:ка», «общей липидной фракции» и т. д. мало что могут дать безотносительно конкретных субхлоропластных струк­

тур, когда они связаны с решением проблемы		физиологической
значимости	анализируемого компонента. Еще в	1952 г. Вилдман
и Ягендорф	[990] указывали, что проблемой	будущего явится

анализ поведения специфических белков в связи с выполняемыми ими функциями. То же можно сказать и о других компонентах.

Существует несколько принципов классификации белков хло­ ропластов. Можно условно разделить их на белки ламелл и бел­ ки стромы.

Белки стромы хлоропласта. Раздельное выделение белков из цитоплазмы листьев и из стромы хлоропластов представляет значительные трудности, так как хлоропласта легко разрушаю­ тся при выделении.

Основную часть белков стромы представляют так называе­ мые белки фракции I . Первые данные относительно белков стро­ мы получены в лабораториях Вилдмана [989] и Н. М. Сисакяна

[124]. Методы электрофореза			и ультрацентрпфугировапня позво­
лили		раздельно выявить только два компонента — фракции Г
и	П	[81], позднее названные	соответственно «белки фракции
Ь	и «белки фракции II».

Для нашего обзора больший интерес представляют белки фракции I . Замечательной особенностью белков фракции I , в состав которой входит 75—80% белков стромы, является ее го­ могенность в электрофорезе и при ультрацентрпфугировании [598]. Константа седиментации этой «фракции», выделенной как из целого листа, так и из хлоропластов разных видов растений, меняется от 16,2 до 18,5S, а ее молекулярный вес составляет 375000—595 000 [81]. Белки фракции I обнаруживают поли­ функциональность и проявляют активность фосфатазы, рибулозофосфатизомеразы, рибулозофосфаткиназы и карбоксилазы. В составе этой «фракции» обнаруживают нуклеиновые кислоты, углеводы и липиды [81, 10, 11].

С этой точки зрения можно рассматривать белки фракции I как белково-липидный комплекс, оказывающийся гомогенным при центрифугировании, пропускании через колонки с' ионооб-

менниками или при	электрофоретическом	разделении.	Однако
позднее отмечалось	[4], что очищенный препарат белков		фрак­
ции I проявляет только карбоксилирующую		активность.	Актив­

ность других ферментов, по-видимому, объясняется загрязнением этой «фракции», разделение которой на отдельные компоненты затрудняется вследствие близости их физико-химических пара­ метров. Тем не менее, какая бы точка зрения ни установилась окончательно, необходимо признать, что «белок фракции I» яв­ ляется ключевым ферментом, обеспечивающим фиксацию угле­ кислоты. На основании данных о локализации белков фракции I именно в строме хлоропласта Кавашима и Вилдман [598] выдвинули предположение, что эти белки не только играют роль ключевого фермента, катализирующего первую ступень фикса­ ции СОг, но служат также основным структурным элементом подвижной фазы хлоропласта. Циклические изменения в раство­ римости белков фракции I , индуцируемые рибулозо- 1,5-дифосфа- том, с одной стороны, и солями магния и бикарбоната, с другой,

наводят на мысль, что эти вещества контролируют	степень вяз­
кости стромы. В некотором отношении переход	от состояния
геля в состояние золя и способность к «амебоидным	движениям»,

а также возможность конформационных изменений белков фрак­ ции I определяются ионами магния и бикарбоната, являющими­ ся антагонистами.

Содержание белков фракции I увеличивается в процессе зе­ ленения листьев и достигает максимума в условиях нормального хода фотосинтеза, а к концу вегетации падает [649, 346]. Не­ давно было показано, что количество белков фракции I харак­ теризует состояние фотосинтетического аппарата и может явля­ ться физиологическим показателем его активности [4] .

Анализ		мембран хлоропластов. Ламеллярные белки состоят
в основном		из водонерастворимых белков липопротеиновой при­
роды	[11, 93], которые содержат до 35% эфирорастворимых ве­
ществ	[718]. Выделение белков из ламелл без инактивации пред­
ставляет чрезвычайно сложную задачу.
Вообще		говоря, цепь переноса электрона можно разложить

на отдельные функционирующие части лишь в том случае, если раздел проводить по естественным линиям, где силы связей наи­ меньшие. Липиды являются одними из основных связующих ве­ ществ, поэтому для разложения мембран на фрагменты с сохра­ нением возможности функционирования хотя бы отдельных отрезков цепи пригодны лишь реагенты, разрывающие связи липид — ли пид.

Грин и Флейшер [48], рассматривая организацию биоэнерге­ тического аппарата митохондрий, отмечали, что только немногие вещества могут быть использованы для такой фрагментации митохондрий, которая в перспективе сохраняет возможность обратного воссоединения выделенных комплексов с восстанов­ лением ЭТЦ. Связи липид — белок или липид — лнпид способно разрывать сравнительно небольшое число реагентов. К ним от­ носятся холат и дезоксихолат (детергенты), третичный амило­ вый спирт и бутанол (спирты), циклогексан и петролейный эфир (углеводороды). Желчные кислоты (типа холата) эффективны только в присутствии солей, а углеводороды — в присутствии желчных кислот. Из митохондрий удалось выделить белковолипоидные комплексы, способные к воссоединению с восстанов­ лением ЭТЦ.

Проведено большое число исследований, задачей которых бы­ ло выделение различных пигмент-белковых комплексов из мем­ бран хлоропластов или освобождение из них отдельных физио­ логически активных веществ, в том числе белков. Как и в работе на животных митохондриях, для растворения ламеллярной си­ стемы хлоропластов использован широкий спектр веществ, часто в сочетании с применением различных физических факторов воздействия. Разрушение структуры тилакоидных мембран хло­ ропластов достигалось при действии следующими реагентами: а) солевыми растворами, при использовании кислот или основа­ ний, при применении металлсвязующих агентов; б) спиртами и углеводородами — метанолом, этанолом, бутанолом, третичным амиловым спиртом, циклогексаном, ацетоном; в) детергентами — дигитонином, тритоном Х-100, холатом, твином, додецилсульфатом; г) гидролитическими ферментами — проназой, пепсином,, трипсином, фосфолипазой. Разумеется, этот список включает лишь часть веществ, которые были использованы для разруше­ ния хлоропластов, и часто отмеченные реагенты применялись одновременно или последовательно.

Можно	привести только отдельные отчеты об исследованиях,
в которых	было достигнуто растворение тилакоидных мембран.

Вебер [970] экстрагировал белки из ламелл смесями мета­ нола и эфира, а оставшиеся частицы солюбилизировал в анги­ дриде муравьиной кислоты. Были получены субъединицы в виде гликопротеидов, содержащие менее 1% феофитина. Молекуляр­

ный вес их около	165 000. Это исследование получило развитие
в работе Крейтца	и Вебера, которые, используя рентгенострук-

турный анализ, установили, что комплекс имеет «16-клеточную» организацию из четырех субъединиц вокруг внутреннего «кана­

ла» диаметром 42А [644].
Бейли с соавт. [212] выделяли		феофитин-белковый комплекс,
растворяя ламеллы	хлоропластов	в 70%-ной уксусной кислоте.
В его составе были	обнаружены	гликопротеид, липиды, оксиге-

нированные каротиноиды и феофитины а и Ь. (Органические кислоты вызывают феофитинизацию хлорофилла)- Крейдл и Парк [322] растворяли ацетоновые препараты фрагментов хло­ ропластов в смеси 0,1%-ного додецилсульфата и 1%-ной моче­ вины.

Локшин и Буррис [672] для растворения ламеллярных белков применили встряхивание с бутанолом. Растворилось около 2/3 белка. Авторы пришли к заключению, что применение бутанола способствует эффективному и быстрому освобождению ламелляр­ ных белков от липидов и пигментов, но эти белки способны ко вторичному связыванию с фосфолипидами, липидами, хлорофил­ лом и Фн .

Браунитцер и Бауер-Штеб [261] разделяли белки ламелл, выделенные из четырех видов растений (Spinacia oleracea, Antirhinutn majus, Lactuca sativa и Hemerocallis fulva), с помощью специальной модификации гель-электрофореза на три зоны — а, (3, у, соотношения между которыми по денситометрическому спектру были различными у разных видов. Такие зоны характер­ ны для всех изученных представителей, от зеленых водорослей до высших растений. Поэтому был сделан вывод, что «химиче­ ская структура фотосинтетического аппарата всех растений в принципе одинакова». Ламеллярные белки растворяли в смеси фенола, муравьиной кислоты и воды, взятых в отношении 2 : 1 : 1 , которую авторы назвали фенольной системой. (Также эффектив­ ным растворителем является смесь фенола, уксусной кислоты и воды ( 1 : 1 : 1 ) , причем пептидные связи не затрагиваются.)

Этанол и метанол используют для выделения липопротеидов из ламелл [10, 11, 93]. Тернбер и соавт. [906] добились осажде­ ния ламеллярных белков хлоропластов смесью метанола с (NH 4 ) 2 S0 4 [885].

Ацетон — наиболее часто используемый реагент при экстрак­ ции пигментов из хлоропластов, вызывающий наименьшие пов­ реждения ферментов. Однако действие ацетона приводит к глу-. боким нарушениям внутри нативных ПБЛВ-комплексов и даже к освобождению части компонентов.

Металлы, содержащиеся в натуральных ПБЛВ-комплексах, выполняют важные функции [23, 24]. Так, в составе комплексно­ го соединения магния — хлорофилла — находится 15—20% всего магния клеток. Этот элемент более прочно удерживается в виде внутренней комплексной соли с четырьмя пиррольными группа­ ми, чем железо в составе гемов цитохромов, также входящих в состав таких ПБЛВ-комплексов. Комплексы марганца в ламеллах играют важную роль в механизме фоторазложения воды. Комплексы железа и марганца в хлоропластах находятся в со­ единении с различными группами липидов. Железо может быть связано с фосфатидами, а марганец — с галактозилдиглицеридами.

В настоящее время становится общепризнанным, что большая часть воды в цитоплазме и других биологических структурах клетки является структурированной и составляет единую систе­ му с биополимерами. Компоненты всей этой системы взаимосвя­ заны, и нашим термином «пигмент-белково-липидно-водные комплексы» подчеркивается наличие этой взаимосвязи. Однако вода внутри биологических структур находится в нескольких различных состояниях. Относительно числа таких состояний и их конкретной роли единого мнения не имеется [34, 127, 231, 617, 662].

Согласно двухструктурной модели воды О. Я. Самойлова, сле­ дует различать две фракции воды: решеточно-упорядоченную и плотноупакованную. В соответствии как с этой, так и с другими, более сложными классификациями состояния воды в биологиче­ ских объектах, повышенная «упорядоченность» структуры воды связывается с ее уплотнениями благодаря образованию химиче­ ской связи между молекулами самой воды, а также между молекулами воды и молекулами биополимеров за счет главным образом водородных связей. Разница в степени упорядоченности структур воды находит отражение в различии термодинамических параметров различных форм воды.

Взаимодействие между молекулами воды имеет большое зна­ чение для поведения частиц как в водных растворах, так и внут­ ри «структуры» гелей. Для биологических мембран характерна именно «структура гелей». Изменения гидратации макромолекул и их комплексов приводят к значительным пространственным '(конформационным) изменениям. Различия в характере ги­ дратации ионов и калия также играют важную роль в от­ правлении мембранами различных биоэнергетических функций -[127].

Выделение физиологически активных белков из ламелл. Ме- -тоды выделения физиологически активных легкоподвижных бел­ ков из ламелл были предложены в нескольких лабораториях на рубеже 60-х гг. Как уже упоминалось, экстракция ацетоновых осадков водою приводит к выделению нескольких водорастворим мых белков (рис. 29).