книги из ГПНТБ / Эйнор Л.О. Реконструирование энергетических механизмов фотосинтеза

цитохромов Ъ и /. Тем не менее попытки добиться вымывания цитохромов группы b из такого осадка при использовании широ­ кого спектра солевых растворов или смесей с органическими рас­ творителями оказались пока безуспешными. Инкубация суспен­ зии осадка в фосфатном буфере нейтрального рН с равным объ­ емом 10%-ного холата приводит к частичной солюбилизации только Цит f, но не цитохромов группы Ь.

Из наших опытов можно было сделать вывод, что обработка хлоропластов ацетоном, хотя и нарушает нативную структуру ламелл, вызывает частичную денатурацию цитохромов. Цит b в составе осадка сохранял способность к окислительно-восста­ новительным превращениям, но терял способность к растворе­ нию. Не удалось также перевести Цит b в раствор при примене­ нии бутанола, фенола, петролейного эфира, серного эфира, и его смеси с этанолом.

Действие гидролаз. Обработка хлоропластов гидролитичес­ кими ферментами не получила признания как метод выделения пигмент-белковых комплексов, в отличие от применения детер­ гентов, и лишь эпизодически используется для разрушения хло­

ропластов. Обычно		гидролазы применяют	для	изучения	строе­
ния хлоропластов,		а также в отдельных случаях для исследова­
ния ЭТЦ. Приведем примеры таких работ.
Инкубация	с липазой уменьшает дихроизм			хлоропластов, а
с протеазой—	увеличивает. На основании		этих данных,		Томас

иХардвельд [904] сделали вывод, что молекулы хлорофилла окружены липидным слоем, который разрушается липазой, в ре­ зультате чего ориентация молекул хлорофилла может несколько нарушаться. Протеаза, наоборот, изменяет форму липопротеидов,

ипри частичном разрушении ламелл происходит «уплощение» липопротеидов. В результате дихроизм при обработке трипсином увеличивается.

Мантаи [707] сообщил о применении трипсина для изучения ЭТЦ хлоропластов. Изменение спектров низкотемпературной флуоресценции хлоропластов шпината при их обработке липазой и протеазой наблюдал Брил [270, 271]. В этих случаях происхо­ дило начальное усиление реакции Хилла, вызванное, вероятно, разобщением, но затем фермент ингибировал транспорт элект­ ронов.

Островская с сотр. [99, 101], изучая влияние галактолипазы, папаина и трипсина на спектральные и фотохимические свойства хлоропластов гороха, сравнивала изменение этих свойств в обо­ гащенных ФС-1 и ФС-П частицах после их выделения путем ин­ кубации с дигитонином. Установлена, в частности, роль галактолипидов в организации ПБЛВ-комплекса, относящегося к ФС-1, но не к ФС-П.

Ввиду неспецифичности действия гидролаз едва ли в бли­ жайшее время следует ожидать важных результатов от их при-

менения в выделении ПБЛВ-комплексов, в особенности комплек­ сных препаратов протеаз, например проназы из Bacillus subtilis. Наоборот, применение тонко и точно действующих гидролаз, вы­ деляемых из змеиных ядов, например фосфолипазы из яда коб­ ры, весьма перспективно. Однако отчетов о законченных исследо­ ваниях с применением такой обработки для выделения ПБЛВкомплексов пока нет.

Описанные выше приемы с использованием неводных раство­ рителей, детергентов или гидролаз для выделения ПБЛВ-комп­ лексов в большей или меньшей степени изменяют нативные ПБЛВ-комплексы. Попытки избежать такого рода воздействий с помощью разрушения хлоропластов физическими методами'за­ служивают особого внимания, однако разработка этих методов находится в начальной стадии. Поэтому следует сделать общий вывод, что проблема выделения нативных ПБЛВ-комплексов остается до конца не решенной. С этим отчасти связано отсут­ ствие в литературе однозначного, сколько-нибудь четкого опре­

деления понятия «пигмент-белковый	комплекс».	Исследователи
н авторы соответствующих обзоров чаще всего		вообще избега­
ют давать определения [718, 321, 425,	426, 76].

Искусственные пигмент-белковые комплексы. В общее поня­ тие «пигмент-белковые комплексы» включают также искусствен­ ные образования, создаваемые соединением хлорофилла из од­ ного источника с белками (илипидами) из других источников. Ис­ кусственные пигмент-белковые комплексы начали создавать еще до того, как были достигнуты первые успехи на пути выделения естественных пигмент-белковых комплексов из хлоропластов.

Одними из таких работ раннего периода являются исследова­ ния Вишняка [39, 949] фотохимических и энзиматических свойств комплекса, полученного добавлением спиртового раство­ ра хлорофилла к экстрагированному ацетоном хлоропластному материалу. Вишняк, наблюдая (в атмосфере гелия) восстанов­ ление окисленного глутатиона в присутствии глутатионредуктазы и НАДФ+, пришел к заключению, что восстановление глу­ татиона может служить мерой восстановления НАДФ+. Фото­ химическая активность измерялась также по уменьшению редокс-потенциала при включении света. (Очень важно, что про­ кипяченные или подвергнутые замораживанию экстракты не бы­ ли эффективными. Поэтому реконструированная система в дан­ ном случае включала фотохимический и энзиматический меха­ низмы. Часто исследователи забывают о подобном контроле, что существенно снижает ценность полученных ими результатов). В опытах Вишняка не было получено данных о том, что донором электронов является вода. Вероятнее всего, донорами электро­ нов служили другие компоненты экстракта.

Уолкен [1009] добавлял 85%-ный ацетоновый раствор пиг­ ментов из хлоропластов к различным белковым растворам. До­ бавление желатина, бычьего сывороточного альбумина или

Y-глобулина вызывало образование комплексов. Спектры этих комплексов сравнивались со спектрами иативных хлоропластов.

В лаборатории Красновского в течение многих лет изучают­ ся различные фотохимические модели, в том числе модели с белками [65, 67, 31, 30, 32]. Развивая прежние исследования по изучению механизма участия хлорофилла в инициируемых све­ том процессах переноса электрона и протона [65], Красновский показал, что хлорофилл, осажденный в виде комплекса с Цит с, вызывает его окислительно-восстановительные превращения.

Необходимо подчеркнуть, что между подобными фотохими­ ческими моделями и так называемыми пигмент-белковыми комп­ лексами, создаваемыми Гиллером, Сапожниковым [45], Толибековьш [131], Серебровской, Лозовой [77, 122], и между нативными или модифицированными пигмент-белковыми комп­ лексами существуют различия принципиального характера. 1

Чрезвычайное углубление представлений о механизме фото­ синтеза привело к осознанию сложности функций, выполняемых всеми компонентами хлоропласта как в биохимическом, так и в структурном отношении. Поэтому применение искусственных комплексов целесообразно только для решения четко сформули­ рованных задач из области фотохимии, некоторых эволюцион­ ных вопросов и т. д. Однако в настоящее время вряд ли можно серьезно рассматривать вопрос об искусственном фотосинтезе на основе таких пигмент-белковых комплексов.

4. ИЗУЧЕНИЕ ПБЛВ-КОМПЛЕКСОВ, ОТНОСЯЩИХСЯ К ДВУМ ФОТОСИСТЕМАМ

За последние годы с помощью методов препаративной биохи­ мии достигнуты значительные успехи в воспроизведении реакций фотосинтеза вне целого хлоропласта. К важнейшим достижени­ ям следует отнести разделение хлоропластов на ПБЛВ-комплек- сы и достаточно подробное сравнительное изучение их биохими­ ческого состава и фотохимической активности.

Первое сообщение по этому вопросу было опубликовано Боардманом и Андерсон только в 1964 г. [246, 167], но эта об­ ласть исследований стала развиваться особенно стремительно. Естественно, что необычайно бурное развитие исследований в каком-либо направлении является весьма весомым доказатель­ ством его важности.

Авторы первых публикаций избрали для дробления тилакоидных мембран детергенты с дальнейшим разделением частиц дифференциальным центрифугированием. Отдельные фракции были получены при строгом контроле среды инкубации хлоро­ пластов, силы поля гравитации и времени центрифугирования.

Новый толчок исследованиям по разделению фотосистем да­ ло использование физических методов разрушения мембран —• озвучивания или выделения ПБЛВ-комплексов продавливанием

через калиброванные отверстия при высоком давлении. Преиму­ щество физических методов состоит в том, что удается, во-пер­ вых, избежать химического воздействия детергентов как агентов, активно реагирующих с отдельными компонентами комплексов и вытесняющих из них липиды, а во-вторых, получать более чет­ кие фракции частиц. Рассмотрим эти работы.

Действие детергентов и фракционирование фотохимических систем. Боардман и Андерсон впервые так подобрали условия* состав среды, скорость и время центрифугирования, что отдель­ ные выделенные фракции были обогащены частицами, представ­ ляющими ФС-І или ФС-П.

Ниже приведены основные сведения об условиях выделения частиц после получасовой инкубации хлоропластов из шпината в 0,5%-ном дигитонине при температуре 0 С. Отдельные фрак­ ции охарактеризованы по отношению Хл а/Хл b [247] (табл. 1)1

Т а б л и ц а 1 Выделение частиц из хлоропластов после инкуба­

ции с дигитонином	(по Боардману и Андерсон)
Условия	Время	Распре­
	центрифу­		Хл а/Хл Ь
центрифугирования, g	гирования,	деление
	мин	Хл. %
Исходные хлоропласты	_		2,83
1 ООО	10	19,0	2,36
10 ООО	30	46,2	2,27
50 ООО	30	12,3	4,40
144 000	60	11,7	5,34
Супернатант	—	10,8	3,76

Соответствующие осадки, ресуспендированные Боардманом и

Андерсон в фосфатном буфере, получили

название по

величи­

нам g,

при которых

их осаждали. Частицы, которые не удалось

осадить, центрифугированием

в течение 1 ч

при 144 000 g,

были

обозначены как супернатант 144 000 g.

Для

лучшего

разрешения

пиков

Хл а и Хл & in vivo авторы

изучали

спектры

при

температуре

жидкого

азота [77° К] . На

рис.

32

из работы

Боардмана с соавт. [249] сравниваются

спектры

поглощения

фракций

10 000 g и

144 000 g.

Фракция

10 000 g обнаружила

увеличение

поглощения

при 650 и 470 нм,

что

доказывает

более

высокое

содержание

Хл Ь. Плечо

при

490

нм, очевидно,

обусловлено

каротиноидами.

Фрдкция

144 000 g обнаруживает увеличение поглощения при 705—710 нм, что свидетельствует о высоком содержании дальней красной фор­ мы Хл а. Из разностного спектра фракции 144 000 g против 10 000 g, определенного при комнатной температуре, следует, что фракция 10 000 g содержит относительно больше формы Хл a670i

Для фракции 144 000 g, полученной после процедур фрагмен­ тации с дигитонином, отношение Хл/П700 было равно 205, а для

целых хлоропластов — 440. Фракция 10 000

g

содержала

1 моль

П700 только на 690 моль Хл [168, 244].

Метод

разделения,

предложенный

Боардманом

и Андерсон,

вызвал

появление большого числа исследований с использовани­

ем

как

дигитонниа,

так

и

D

А

других

детергентов. Охки

и

0.8

Такамия

[781,]

использова­

// ' 1

ли

фрагментацию

с

помо­

0,6 Г

\ А

щью

дигитонина

для

более

\

\

подробной

характеристики

0А

1 г

\

фракций,

выделяемых

при

\ X

центрифугировании

в гради­

А\\ \

Q2

енте плотности сахарозы

при

V

51 000

g в течение

50

мин.

0

Эти

исследователи примени­

W

500

600

700 А,нн

ли

сравнительно

высокую

Рис. 32. Спектры поглощения частиц из

концентрацию

дигитонина

фракций после инкубации с дигитонином

(20 : 1, по

отношению

к хло­

при

выделении путем

дифференциально­

рофиллу) . Из трех выделен­

го

центрифугирования.

ных

фракций

одна

относи­

из

осадка 144 000 g (по

Боардману с соавт.

лась

к ФС-1

и

содержала

/ — фракция

из осадка

10 000

8. 2 — фракция

(2491).

90%

всего П700,

найденного

в двух

других. Авторы

под­

твердили распределение хлорофилла поровну между фотосисте­ мами, однако не выявили существенных различий между двумя фракциями, относящимися к ФС-П, но выделенными раздельно. Фотохимическая активность хлоропластов из фракций после об­

работки дигитонином		показана	в табл. 2	[166].
				Т а б л и ц а		2
Скорость	восстановления окислителей, мкмоль/мг				Хл-н
Фракция		Феррици-	ДХФИФ	НАДФ+	НАДФ+	+
		аиид			+ АК	+
					+ Д Х Ф И Ф
Хлоропласты		255	152	96
Хлоропласты после
инкубации с дигито­
нином		138	81	33	18
1 000	g	209	139	24	14
10 000	g	160	61	17	17
50 000	g	43	0	0	70
144 000	g	0	0	0	123
Опернатант
"144 000	g	0	0	0	103

Обработка хлоропластов дигитонином приводит, вообще го­ воря, к резкому снижению уровня реакции Хилла. Поэтому ак-

тивность должна сравниваться с активностью целых хлоропла­

стов,	также подвергнутых действию дигитонина. Фракции		1000 g
и 10	ООО g относительно	активнее с феррицианидом и ТХФИФ,
чем «целые хлоропласты»		(но с дигитонином), и намного	актив­

нее мелких частиц. Выделение кислорода находится в стехиомет-

рическом отношении с восстановлением феррицианида.					Наобо­
рот,	весьма велика активность восстановления НАДФ+ мел­
кими	частицами		в присутствии	электронодонорной системы
АК +	ДХФИФ, тогда как «тяжелые» частицы в этом отношении
проявляют слабую			активность.
Активность		супернатанта 144 000 g на 20—30% ниже			актив­
ности фракции		144	000 g.
Действие неионного детергента				тритона Х-100 также	приво­

дит к получению ПБЛВ-комплексов, относящихся к двум фото­ системам [943, 939, 263, 267, 268].

Концентрации тритона Х-100 порядка 0,008% разобщают ре­ акцию ФФ, а концентрации порядка 0,01—0,02% ингибируют реакцию Хилла, хотя реакции ФС-І при этом происходят [942]. В работах группы Вернона для разделения частиц использовали 0,05, 0,2 и 4%-ную концентрации этого детергента. Высокие концентрации приводили к более глубокому разрушению хлоро­ пластов.

Метод получения фотохимически активных частиц в работе с тритоном Х-100 сводится к следующему: хлоропласты из шпина­ та выделяли в 0,35 М NaCl с 0,02 М грыс-буфером. рН 7,8, затем инкубировали в растворе сахарозы (конечная концентрация 0,5 М) с трициновым буфером рН 7,5 и 4%-ным тритоном Х-100

при 0° С. При центрифугировании в	течение		20 мин фракция
10 000 g содержала частицы, относящиеся		к	ФС-И: отношение
Хл а/Хл b составляло 2, содержание лютеина было				повышено
[943]. Ранее в работах группы Вернона эта			фракция	называ­
лась P-I, затем во избежание путаницы		ее	переименовали в
ТСФ-Н (тритон-субхлоропластные фрагменты ФС-П).
Фракцию частиц ФС-І осаждали	при 144 000 g за			10 ч цен­
трифугирования (фракцию назвали	PD-10, а		позднее	ТСФ-І).

Эта фракция весьма напоминала фракцию 144 000 g из дигитони­ на [939]. Отношение Хл а/Хл b составляло 5,7. Частицы в при­ сутствии А К + Д Х Ф И Ф восстанавливали НАДФ+ при добавле­ нии Фд, Фп и Пц. Активность исчезала при нагревании до 40° С за 5 мин. Таким образом, с помощью тритона Х-100 удалось, в конечном итоге, получить субхлоропластные частицы, которые, подобно субхлоропластным частицам, полученным с помощью дигитонина в работах группы Боардмана, относятся соответ­ ственно к ФС-І или ФС-П. Однако, по-видимому, тритон Х-100 ведет себя более агрессивно по отношению к энзиматическим ак­ тивностям, характерным для обеих фотосистем.

Долгое время при использовании тритона Х-100 вообще не удалось получить фотохимически активные частицы [939].

В табл. 3 сравнивается	состав частиц, относящихся	к ФС-П
и ФС-І, выделенных путем	обработки дигитонином (по	Боард-

ману с соавт. [247]) и тритоном Х-100 (по Вернону с соавт. [939, 940]). Фракции 10 000 g и ТСФ-П относятся к ФС-П при обра­ ботке соответственно дигитонином и тритоном Х-100, как описа­ но выше, а фракции 144 000 g и ТСФ-І относятся к ФС-І. В по­ следнем столбце приведены данные из работы Вернона с соавт. для не обработанных детергентом хлоропластов.

Состав субхлоропластных				частиц			Т а б л и ц а 3
				Фотосистема И		Фотосистема 1		Целые хлоро­
	Компонент			10 000 g
					ТСФ-П	144 000 g	ТСФ-І	пласти (по
			Днгитоннн		Тритон	Днгитоннн	Тритон	Вернону)
Хл	а			67	67	85	85	70
Хл	6			33	33	15	15	30
П700				0,14	0,5	0,5	1,4	0,4
Хл	а/Хл	Ь		2	2	5,7	5,7	2,4
Р-Каротин				7	6	14	16	6,3
Лютеин				15	16	6	6	9,6
Неоксантин				5	2	2	1	2,5
Виолаксантнн			А	6	3	5	1	2,8
Пластохинон				2,1	1.8	3	5,5	7,2
Пластохннон			В	0.2	0,2	1.2	4,5	4,2
Пластохинон С -f- D				0,7	0	0,6	3,3	—
а-Токоферолхинон				0,8	0,3	1,8	0,5	1,9
Цитохром		6в		—	0	—	(2)	—
Цитохром		/		—	0	—	(2)	—
Цитохром		6559		—	1	—	0	—
Моногалактозил -дигли -				—		—	25
церид					53			115
Дигалактозил-диглнце-				—	30	—	12	60
рид
Фосфатидил - гл ицерол				—	16	—	5	21
Сульфолипидлецитин				—	6	—	2	9
Белок				1,7	0,5	1,2	1,0	0,4

Все величины выражены в молях на 100 моль Хл a-f-Хл Ь. Брил с сотр. [271] применяли деоксихолат натрия для выделе­ ния фрагментов из хлоропластов. Наилучшее разделение дости­ гнуто при концентрации 0,4% в 0,15 М К О при концентрации хлорофилла 100 мкг/мл. Тяжелые фрагменты (10 000 g, 30 мин),

обогащенные Хл 6

= 1,9 j ,

обнаруживали низкотемпера­

турные спектры флуоресценции при 683 и 695 нм и были неак­ тивны в отношении реакции Хилла с ДХФИФ. Во фракции 144 000 g, полученной центрифугированием за 60 мин, отноше­ ние -ё^ч равно 6,6. Максимум низкотемпературного спектра флуо-

ресценции находился при 735 нм. Деоксихолат, как и додецилсульфат натрия, также не нашел пока применения. Дигитонин и тритон Х-100 использовались до сих пор наиболее широко. По степени повреждающего действия фотохимических функций дигитонин оказывается более мягким, чем тритон Х-100, кото­

рый, в свою очередь, обладает		менее разрушающим эффектом,
чем додецилсульфат натрия.
Биохимический состав субхлоропластных частиц. Особенно­
сти поглощения	и флуоресценции. Типичные		спектры	флуоре­
сценции целых	хлоропластов	и частиц, относящихся		к ФС-П
(10 000 g) и ФС-І (144 000 g),		измеряемой при комнатной тем­
пературе и температуре кипения жидкого азота			(77° К), показа­
ны на рис. 33.

Рис. 33. Спектры	флуоресценции при температуре 293° К (1) и 77° К				(2) целых
хлоропластов (а),	частиц фракций	10 000 g	(б) и 144 000 g	(в) (по	Боардма-
ну [249]).
Гедерстанд	и Говинджи	описали	особенности	абсорбции и
флуоресценции	пигментов при сравнении частиц			Д-10 и Д-144

(10 000 g	и 144 000 g при фрагментации дигитонином) при ком­
натной и	низких		температурах [416]. Плечо		при 650 нм, обна­
руживаемое		во	фракции	Д-10, указывает	на сравнительное
обогащение		этой	фракции	Хл Ь. Эта фракция	содержит относи­
тельно большие			количества формы Хл 670. Абсорбционные мак­

симумы для фракций Д-10 и Д-144 находятся соответственно при 677 и 679 нм, тогда как для целых хлоропластов — при 678,5 нм. В супернатанте 144 000 g максимум обнаруживается при 675 нм, что указывает на содержание в нем солюбилизированного диги­

тонином хлорофилла. Нагревание фракций	в течение 2 мин при
65° С сдвигает максимум поглощения в	обеих фракциях до

669—670 нм. Авторы пришли к выводу, что по сравнению с фрак­ циями частиц Д-10 и Д-50 мелкие частицы содержат больше пространственно ориентированных молекул хлорофилла.

Крамер и Батлер [318] изучили производный спектр погло­ щения частиц хлоропластов, выделенных после фрагментации с дигитонином. Производный спектр интактных хлоропластов имел

полосы 641 (а), 652 (Ь), 663 (с), 673 (d), 682 (е), 686	(f),
ю*	147

690	(g) и 698 нм (h). Для частиц ФС-П		были характерны поло­
сы	641, 652, 663, 673	и 682 нм, а для	частиц ФС-І — 690 и
698	нм наряду с другими	полосами.

Для частиц ФС-П характерно наличие двух типов Хл а с мак­ симумами поглощения при 670 и 676 нм, для частиц ФС-І — один тип Хл а с максимумом при 680 нм.

Один из выводов работы состоял в констатации трудностей разделения частиц без взаимного загрязнения.

Изучение особенностей флуоресценции показало, что при комнатной температуре фракция 144 ООО g флуоресцирует слабо. Выход флуоресценции не усиливается в условиях окисления — восстановления или при добавлении моноурона, или же при вне­

сении кофакторов и энзимов, стимулирующих перенос			электрона
на НАДФ+	[249J. Фракция	10 000 g флуоресцирует	сильнее.
Добавление	феррицианида	ослабляет флуоресценцию во

фракции 10 000 g, тогда как гидросульфит или моноурон усилива­ ют ее.

Эти отношения иллюстрируются следующими сравнительны­

ми показателями квантового выхода флуоресценции,		экв/кв,	по
фракциям хлоропластов:
Хлоропласти (контроль)	0,007
Хлоропласты, в 0,5%-ном
днгитоннне	0,011
10 000 g	0,016
144 000 g	0,003
Хл а, в этаноле	0,235
Эти данные соответствуют заключению Дюйсенса и Свирса
[356], что Хл а в ФС-І флуоресцирует	слабо, тогда	как он же
в ФС-П способен к относительно сильной флуоресценции,			уро­

вень которой зависит, правда, от окислительно-восстановитель­ ных условий.

.•Спектры флуоресценции целых хлоропластов, охлажденных до 77° К, обнаружили полосы при 683, 693 и 735 нм. Фракция 10 000 g выявила низкотемпературный спектр флуоресценции, который оказался сходным с таковым в неразрушенных хлоро­ пластах, но с уменьшенной полосой при 735 нм. Его вклад в об­ щую флуоресценцию составлял 60% по сравнению с 75% в слу­

чае хлоропластов. Для спектра фракции	144 000 g, наоборот,
характерно преобладание флуоресценции	при 735 нм, вклад ее

в общую флуоресценцию по расчету составляет 97%. Фракции,

выделенные	из озвученных хлоропластов,			не обнаруживали
изменений в спектрах при /7° К [249], откуда				следовало, что на­
блюдаемые	спектры	во фракциях 10	000 g и 144 000 g не явля­
лись артефактами,		обусловленными	различными		размерами
частиц. Было сделано заключение, что флуоресценция					хлоропла­
стов при 735 нм, охлажденных до 77° К, обусловлена					главным
образом ФС-І, а при 683 и 693 нм — ФС-Н				[247, 244]. К анало-

гичному выводу пришли Кок и Рураински [634]. При 735 нм, по-видимому, флуоресцирует форма Хл а с максимумом погло­ щения при 705 нм [245].

Боардман с соавт. [249] измеряли спектры возбуждения флуоресценции фракций 10 000 g и 144 000 g при 20° С и 77° .К- Кванты, поглощенные при 470 нм, более эффективны по отно­ шению к квантам, поглощенным при 436 нм, в возбуждении флу­ оресценции с фракцией 10 000 g, чем с фракцией 144 000 g. Этот результат позволяет предположить наличие более высокого уров­ ня содержания Хл Ь во фракции 10 000 g. Но более важное за­ ключение состоит в том, что Хл Ь и каротиноиды сенсибилизиру­

ют флуоресценцию Хл а в обеих фотосистемах;				иначе говоря,
Хл	Ь и каротиноиды		проявляют активность в «собирании		уро­
жая	квантов»	света	для первичных фотохимических процессов
ФС-І и ФС-П		[244],	будучи активнее в частицах	ФС-П	[245].

Восстановление реагентов Хилла. Если с целыми хлоропла­ стами скорость восстановления НАДФ+ в присутствии экзоген­ ного Фд достаточно высока и в этом случае добавок Фп не тре­ буется [329], то для реконструкции ЭТЦ с частицами 144 000 g необходимо вносить как Фд, так и Фп [246, 166].

Фотохимическая активность фракции 144 000 g заметно ва­ рьирует также при обработке различными образцами дигитони­ на [245]. Элстнер и Требст [363, 919] показали, что мелкие частицы, полученные после обработки дигитонином, увели­ чивают фоторедукцию НАДФ+ при добавлении Пц или Цит / из эвглены.

Согласно Вернону с соавт. [938], в присутствии Фд, Фп и Пц скорость фоторедукции НАДФ+ с фракцией частиц 144 000 g до­

стигает	1400 мкмоль/мг	Хл • ч при	рН 6,0.	Стимуляция	фото­
редукции НАДФ+ мелкими частицами из				хлоропластов	го­
роха в	присутствии Пц	показана	также Акуловой и Мухи­
ным [2].

Арнон с соавт. [185] исследовали активность ФФ в частицах после фрагментации с дигитонином. Скорость НФФ с частицами 10 000 g была втрое меньше, чем с целыми хлоропластами, а с

частицами		144 000 g равнялась нулю.			Отношение		~ Р / 2 е ~ для
фракции 10 000 g составляло			0,6	с	феррицианидом			и	0,8	с
НАДФ+. ЦФФ составляло 13% по отношению к целым									хлоро­
пластам	в	присутствии Фд,	1 8 % — к		менадиону		и	2 4 % — к
ФМС.	В	противоположность	частицам			10 000	g,	частицы
144 000	g были неактивны с менадионом или Фд, а с ФМС									ак­
тивность составляла только 15%- Арнон и соавт. [185]								рассмат­
ривали	обнаруженную частицами			10 000 g		активность		в	восста­

новлении НАДФ+ как доказательство возможности восстановле­ ния НАДФ+ посредством одной ФС-П и указывали на сходство этих частиц по химическому составу с частицами, выделенными Боардманом с соавт. [246, 166]. В то же время Арнон с соавт, подчеркивали [185], что способность тяжелых частиц к фото-