книги из ГПНТБ / Эйнор Л.О. Реконструирование энергетических механизмов фотосинтеза

редукции НАДФ+ быстро теряется при инкубации в растворе

0,5% -ного	дигитонина.
Скорость фоторедукции для НАДФ+, по Арнону с соавт., со­
ставляла 62 и для феррицианида			116 мкмоль/мг		Хл-ч, а	по	Бо-
ардману	[166]	соответствующие	величины	составляли		17	и
160 мкмоль/мг		Хл-ч. Боардман,	в отличие	от	Арнона,	считает,

что скорость фоторедукции НАДФ+ по сравнению со скоростью фоторедукции ДХФИФ относительно невелика. Однако это рас­ хождение имеет принципиальное значение, так как, согласно концепции Кнаффа и Арнона, частицы ФС-П обладают способ­

ностью	к фоторедукции		такого	низкопотенциального акцептора,
каким	является НАДФ+		[620]. Боардман, считая, что				частицы
10 000	g проявляют	в этом отношении			низкую	активность,		как
нам кажется, склонен скорее расценивать эти данные							как	ре­
зультат загрязнения		фракции 10 000 g			другими	фракциями		ча­
стиц [245]. На низкую скорость восстановления						НАДФ+ тяже­
лыми	фрагментами	указывают		также	Фринд	[401],	Хеннин-
жер с соавт. [483],		Сиронваль		с соавт.	[872],	результаты		ко­
торых	согласуются	с данными		лаборатории Боардмана, а				не
Арнона.

В первых работах группы Вернона с частицами, полученными с применением тритона Х-100, не удалось обнаружить фоторе­ дукции ДХФИФ во фракции частиц ТСФ-П (т. е. во фракции частиц ФС-П). Однако при использовании в процессе обработ­ ки тритоном высоких (0,5М) концентраций сахарозы выделен­ ные частицы проявили слабую активность. Наоборот, фракция ТСФ-І не обнаружила активности фоторедукции ДХФИФ, но в присутствии Д Х Ф И Ф + А К восстанавливала на свету НАДФ+ [939]. В той же работе приводятся данные о том, что в обеих фракциях фрагментов определялась активность каталазы и пероксидазы и показывается, что ТСФ-І, но не ТСФ-П, прояв­ ляла активность каталазы и пероксидазы. Поэтому авторы пред­ положили, что эти ферменты не имеют отношения к механизму разложения воды, а являются защитными ферментами восста­ новительной стороны цепи переноса электрона,— перекись мо­ жет быть образована в результате реакции с кислородом пере­ носчика, восстановленного этой цепью.

Распределение металлов по фракциям. Проведенные в груп­ пе Боардмана [167] анализы на содержание металлов по фрак­

циям фрагментов 10 000	g и 144 000 g	были сделаны в расчете
на магний (содержание	магния должно	быть эквивалентно со­

держанию хлорофилла). Были получены следующие результаты!

Фракция Mg Мп Fe Си

Хлоропласти		100	1,37	4,16	1,88
10 000	g	100	1,93	2,11	1,0
144 000	g	100	0,41	3,41	1,62

Мп необходим для выделения Ог, и его распределение по фракциям очень характерно: хлоропласты содержат 1 Мп/73 Хл,

фракция 10 000 g		1 Мп/52 Хл. Поэтому сделано заключение, что
Мп	локализован	в ФС-П. Так как весь хлорофилл распределен
равномерно между фотосистемами, то фракция			10 000 g	содер­
жит	70% Мп, а ФС-І — только 30%. Фракция		144 000 g	содер­
жит	больше железа (1 Fe/29 Хл) и меди (1 Си/62 Хл), чем
фракция 10 000 g		(соответственно 1/48 и 1/100).
Распределение		каротиноидов и хинонов. По	данным	Боард-

мана и Андерсон, общее содержание каротиноидов во фракциях 144 000 g и 10 000 g приблизительно пропорционально общему содержанию хлорофилла [247, 244], но отношения в них отдель­ ных каротиноидов разные. Лютеин и неоксантин, согласно Лихтенталеру [663], распределены между фракциями ФС-П и ФС-І как 21/7 и 3,5/0,5 (в расчете на 100 молекул Хл а). По его мнению, Боардман и Андерсон [247] не отделяли пластоглобулы, что внесло ошибки в приводимые ими величины распределе­ ния производных фенола по фракциям из хлоропластов шпина­ та. Распределение хинонов исследовалось также Хеннинжером с

сотр. [483]. Содержание		пластохинонов			Л и С (на 1 мг хлоро­
филла) оказалось	относительно			низким	во фракциях		1000 g и
10 000 g и высоким во фракции 50 000 g.
Фринд, Олсон,	Редферн		[401] обнаружили			низкую	концен­
трацию хинонов во фракциях			1000 g и 10 000 g из хлоропластов
сахарной свеклы, однако не наблюдали					повышенного		содержа­
ния хинонов во фракции 50 000 g.
Лихтенталер	[663]	показал,		что	осадки,	полученные во

фракциях частиц обработанных дигитонином хлоропластов при возрастающем числе оборотов в пределах от 60 000 до 100 000 g, не содержат пластоглобул; ему удалось получить относительно «чистые» частицы ФС-І.

В расчете на 100 молекул Хл а частицы ФС-І содержат, в противоположность неразрушенным тилакоидам, сравнительно низкие концентрации пластохинонов, но более высокие концен­ трации витамина К. Отсюда был сделан вывод, что последний ассоциируется с ФС-І.

Чтобы избежать ошибок, вызванных загрязнением частиц пластоглобулами в ходе анализов, Лихтенталер вычислил состав липидов по фракциям ФС-І и ФС-П, исходя из определений их общего содержания в тилакоидах с учетом определений в одной ФС-І. Полученные им данные [663] представлены в табл. 4. Особенно обращает на себя внимание тот факт, что почти весь витамин Ki ассоциируется с частицами ФС-І. Токохинон явля­ ется окисленной формой а-токоферола. Большой интерес пред­ ставляет вопрос, состоит ли значение этой окислительно-восста­ новительной пары в реакциях ЭТЦ, или же главную роль эти вещества играют как антиоксиданты. Тогда каково их отноше­ ние к каталазе и пероксидазе ФС-І?

Из	расчетов Лихтенталера	[663] следует,		что на 2 моль ви­
тамина	Ki приходится 1 моль	П700	и 1 моль	Цит Ь6. Содержа­
ние пластохинонов и а-токоферола			в тилакоидах		(без	учета
пластоглобул) более высокое — по три молекулы на одну						моле­
кулу. По составу липидов различаются и фракции					частиц ФС-І

и ФС-П, выделенные с помощью детергента тритона Х-100. Оба типа частиц заметно отличны от исходных ламелл хлоропластов и между собой. В процентном отношении фракция ТСФ-П содержит несколько меньше хлорофилла (который создает глав­ ную часть пула неполярных групп) и значительно меньше, по сравнению с «нативной» ламеллой, полярных липидов. Фракция

	ТСФ-І	также		содержит	намного	меньше	полярных и неполяр­
	ных липидов, чем исходный материал.
								Т а б л и ц а 4
	Распределение компонентов липоидной фракции между ФС-П и ФС-І
	(по Лнхтенталеру)
						На 100 молекул Хл а молекул
	Фотосистема		Хл а	Лютеин	Пх	а-токо­	а-токо-	витамина	хинонов
			Хл Ь	Каротин
					общего	ферола	хинона	к,	пластид
	ФС-И		2	2	8	3	0,5	0,1	11,6
	ФС-І		5	0,5	2	2	0,3	1,3	5,6

Детергенты удаляют предпочтительнее полярные липиды; от­ сюда Верной с соавт. [939] заключили, что тритон Х-100, внед­ ряясь в ламеллы, расщепляет их на фрагменты посредством за­ мещения в них полярных липидов, причем при последующем разделении их центрифугированием обнаруживается два типа таких фрагментов.

В опытах Вернона с соавт. [939J с использованием тритона Х-100 для выделения частиц, относящихся к ФС-И и ФС-І, был открыт слой частиц, представлявший каротин-белковый комп­ лекс, который удалось изолировать повторным центрифугиро­ ванием. На рис. 34 показан его спектр до и после экстракции гексаном. Нишимура и Такаматсу [764, 765] показали, что бе­ лок, входящий в состав такого комплекса, является липопротеидом; достигнуто его выделение детергентами и иеводными раст­ ворителями. Выяснение физиологической роли этого комплекса представляет значительный интерес.

Цитохромы. Боардман и Андерсон первыми исследовали распределение цитохромов во фракциях ФС-І (144 000 g) и ФСII (10 000 g) [247]. Дифференциальный спектр хлоропластных цитохромов во фракциях 10 000 g и 144 000 g измеряли при тем­ пературе 20° С и 77° К обычно без предварительной экстракции хлорофиллов. Количественные определения цитохромов проводи­ ли при комнатной температуре, а идентификацию типов цито-

хромов выполняли при	низких температурах — в этом случае
пики делаются более	четкими. Дифференциальные	спектры
фракции 144 ООО g выявили наличие только Цит /		и Цит Ь6.
В низкотемпературных	дифференциальных спектрах	фракции

10 ООО g было выявлено уменьшенное количество Цит / и Цит Ьа и увеличенное — Цит 6559 [247].

Дошн.ед.

	200	300	400	500		600		Л, ни
	Рис. 34. Спектр		поглощения	суспендированного				в бу­
	фере «каротин-белкового комплекса»					из фракции, от­
	носящейся к ФС-Н (по Вернону с соавт. [939]).
	/ — исходный спектр; 2— после			экстракции м-гексаном.
По	сравнению с целыми хлоропластами						фракция		10 000 g
обогащена Цит 6559			(Ы> но содержит меньше Цит / и Цит Ье.
Молярные отношения			оказались	следующими			[245]:
			Целые			10 000 g 144 000 g
			хлоропласты
	Хл/Цит /			430		730	1220
	Хл/(Цит Ь3		+ Цит 66)	118		118	510
Во	фракции	144 000 g Цит f		содержалось			намного		меньше,
чем П700. Так как в обеих фракциях					отношение Хл/Цит / было
заметно выше,		чем в	хлоропластах,		высказано			предположение,

что при обработке хлоропластов дигитонином Цит / частично те­ ряется.

Определение цитохромов в супернатантах, полученных при высокоскоростном центрифугировании в течение нескольких

часов при 144 ООО g, выявило в действительности высокий уровень Цит / и Цит 66 по отношению к хлорофиллу [247, 980]. Потери цитохромов из фракции 144 000 g были минимальными при до­ бавлении девяти объемов буфера к хлоропластным смесям не­ медленно после 30-минутной инкубации с дигитонином при тем­ пературе 0° С и до разделения фрагментов. Однако анализ фрак­ ции 144 000 g, приготовленной по этому способу, показал, что отношения Хл/Цит / и Хл/Цит 66 даже ниже, чем для интакт-

Рис. 35. Дифференциальный				спектр	(восста­
новленный	против	окисленного)			фракции,
относящейся к ФС-П			(ТСФ-П, по		Вернону
[939]).
Четко	видны	пики	Цит	Ь3 559	и реак­
ционного центра ФС-П			(682	нм).

ной ФС-І. Таким образом, можно заключить, что Цит / и Цит be

локализованы в	ПБЛВ-комплексах ФС-І, а Цит	6559 — в
ФС-П.
Анализ фракций ТСФ-П, полученных при обработке хлоро­
пластов тритоном	Х-100 [939] (см. выше), обнаружил,	что Цит/

и Цит 66 соосаждаются с фракцией частиц ТСФ-І в таком соот­ ношении: 0,5П700:Щит /:1Цит 66 : 50Хл [944]. Верной с соавт.

[939]пришли к заключению, что, хотя эти цитохромы содержатся

впрепарате, они не являются составной частью частиц ТСФ-І. При центрифугировании в градиенте плотности сахарозы было обнаружено, что главная зеленая полоса, содержащая частицы ТСФ-І, осаждается отдельно от этих цитохромов. Поэтому, хотя

при выделении частиц ТСФ-І цитохромы не были	локализованы
в виде отдельной полосы, продолжительное (в	течение 30 ч)

центрифугирование при 144 000 g приводило к выделению Цит f и Цит be в виде отдельной полосы над главной зеленой полосой. Анализ фракции ТСФ-П выявил в ней только Цит 6 с максиму­ мом при 559 нм в дифференциальном спектре (рис. 35). С эти­ ми результатами согласуются также данные Хайнда [500].

Андерсон с соавт. [168] наблюдали окисление Цит f при освещении частиц, принадлежащих фракции 144 000 g, но абсорб-

ционные изменения были меньшими, чем можно было ожидать, если бы П700 и Цит f присутствовали в равных количествах. Этот результат согласуется с наблюдаемой потерей Цит f из частиц ФС-І.

5.ВЫДЕЛЕНИЕ РЕАКЦИОННЫХ ЦЕНТРОВ

ИПРОБЛЕМА ВЗАИМОСВЯЗИ МЕЖДУ ФОТОСИСТЕМАМИ

Одна из нерешенных проблем функционирования выделяемых ПБЛВ-комплексов — проблема их функциональной кооперации внутри мембран. В экспериментах с целыми хлоропластами были получены данные, определенно свидетельствующие о сепаратном возбуждении фотосистем, после чего следовало фотоокисление или фотовосстановление соединений, связанных с каждой из них [199, 627].

Верной и Аврон предложили модель, согласно которой две фотосистемы внутри мембраны тилакоида пространственно раз­ делены [937]. Пожалуй, в пользу такой модели свидетельствует не возможность искусственного разделения мембран на ПБЛВ - комплексы, нарушающего нормальную работу фотосинтетическо­ го аппарата, а то обстоятельство, что in vivo сопряжение рабо­ ты фотосистем является наиболее «трудным» моментом для транспорта электронов. Перенос электронов между фотосистема­ ми — наиболее медленный процесс. Поэтому так сравнительно легко удаются попытки замыкания цепей переноса электронов с помощью искусственных кофакторов типа ФМС. Вероятно, за­ мыкание цепи с одной лишь ФС-П является более сложным по­ тому, что здесь участвует чрезвычайно лабильный механизм фо­ тогидролиза и окисления воды.

Отражением большой сложности проблемы взаимосвязи фо­ тосистем является также сосуществование гипотез Майерса [749] и Дюйсенса [749, 354] о переносе энергии света между фотосистемами (см. часть I , стр. 25). Для прямого переноса энер­ гии необходима тесная «упаковка» фотосистем, если модель «переливания» заряда более правильна [310]. Хотя определен­ ный вклад в решение этой проблемы может внести сравнительный анализ результатов экспериментов по фрагментации хлоропла­ стов детергентами или механическим путем, в опытах по дезин­ теграции хлоропластов пока не получено точных доказательств

впользу какой-либо одной нз этих гипотез.

Содной стороны, «тяжелые» частицы (10 000 g), полученные после дезинтеграции хлоропластов низкими концентрациями де­ тергентов и по ряду признаков относящиеся к ФС-П, в то же са­ мое время оказываются активными и в фоторедукции НАДФ+, пусть даже их активность в этом процессе невысока. С другой

стороны,	было установлено, что фракция «легких» частиц
(144 000	£ ), полученная механическим дроблением хлоропла-

Рис. 36. Разделение пигмент - белково - ли- поидно-водного комп­ лекса при центрифу­ гировании на три зо­ ны (по Весселсу [980]).

Пояснение в тексте.

стов,	оказывается	активной		в .восстановлении		как ЫАДФ+,		так
и феррицианида. Таким			образом,		фракционирование		хлоропла­
стов на ПБЛВ-комплексы,				относящиеся преимущественно				к
ФС-І	или ФС-П,	пока	не	дало	однозначного	ответа	в поль­
зу какой-либо из гипотез.

Одним из подходов к изучению работы отдельных фотосистем является выделение их реакционных центров. Как уже отмеча­ лось, реакционным центром ФС-І считается П700. Вопрос о реакционном центре ФС-П остается не вполне ясным, хотя имеются указания, что роль такого центра играет П680.

Наконец, в последнее время начались работы по прямой реконструкции фотохи­ мического аппарата фотосинтеза. Ряд иссле­ дователей добились успеха на пути восста­ новления полной цепи транспорта электрона воссоединением ПБЛВ-комплексов, относя­ щихся к ФС-І и ФС-П. Так, Весселс [980,]j описал разделение хлоропластов шпината, фрагментированных инкубацией с дигитонином в градиенте плотности сахарозы, с выделением при длительном центрифугиро­ вании при 60 ООО—80 ООО g трех полос (рис. 36). Верхним был желто-зеленый слой, со­ держащий Пц. В средней светло-розовой полосе были обнаружены Цит f и Цит Ье- Нижняя сине-зеленая полоса обладала фо­

тохимическими свойствами: она восстанавливала НАДФ+ в при­ сутствии Фд и Фп (или системы АК — ДХФИФ в присутствии Пц, но не Цит f) . Полоса представляла собой ПБЛВ-комплекс.

~	„	Хла	„	П700	1
Отношение в ней		^i~'>	а	~хл~	~ 200 " Максимум поглощения
этой полосы находится при 678 нм.
Сине-зеленый комплекс был					нерастворим в воде, и это
мешало	его разделению,		а любое		воздействие, изменявшее пик

поглощения в коротковолновую сторону, приводило к его инакти­ вации. Однако очистка комплекса без потери активности фото­ редукции НАДФ+ была достигнута повторением процедуры центрифугирования в градиенте плотности сахарозы и хромато­ графией на ДЭАЭ-целлюлозе в присутствии 0,2%-ного дигитонина. После градиентного элюирования фракций из колонки отношение величины поглощения А679/А27о увеличилось до 2, что указывало на очистку препарата, а отношение Хл/П700 снизи­ лось до 140. Низкотемпературный пик флуоресценции обнару­ жен при 730 нм.

Химический анализ выявил содержание в этом ПБЛВ-комп- лексе 75% белка, а в 25%-ной липидной фракции— 15%) хлоро­ филла, 1,6% каротиноидов и 8,4% непигментированных липидов, в том числе 0,5% фосфолипида. Показано отсутствие в нем виолаксантина и неоксантина и обогащение р-каротином. Оказа­ лось, что в сине-зеленой полосе содержание Цит / составляет менее 1 моль на 104 моль Хл. На основании всех этих данных Весселс пришел к заключению, что сине-зеленый ПБЛВ-комп- лекс относится к ФС-І.

В качестве донора электронов для этой очищенной ФС-І вы­ ступает Пц, а не Цит /. Последнее подтверждают данные Хайнда [499], показавшего, что скорости окисления Цит f и восстано­ вления П700 повышаются в присутствии Пц.

Верхние	полосы при разделении по Весселсу [980]		облада­
ли другими	свойствами. Верхняя	(при градиентном центрифуги­
ровании) желто-зеленая полоса		частиц не обнаруживала	актив­

ности фоторедукции НАДФ+; П700 в ней также отсутствовал.

Зато	отчетливо наблюдалась флуоресценция этой полосы уже
при	комнатной температуре. Полосу (будем называть ее желто-

зеленым комплексом, ЖЗК ) можно было разделить на два ком­ понента при соотношении дигитонин/Хл, равном 10/1, путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы или пропу­ скания через колонку ДЭАЭ-целлюлозы. После центрифугиро­

вания более легкая	фракция (^4), обогащенная Хл с		и ксанто­
филлами из ЖЗК , обнаружила спектр		флуоресценции	при 670,5
и 678,5 нм. Более	тяжелая фракция	(Б) — фракция,	задержи­
вавшаяся на колонке ДЭАЭ-целлюлозы,— содержала			повышен­
ные концентрации	Хл Ъ и ксантофиллов и относительно мало
р-каротина.

Обнаруженное Весселсом определенное сходство в свойствах тяжелых частиц с ПБЛВ-комплексами, описанными Ке, Огава, Верноном [600, 601, 778, 938, 943], наводило на мысль, что эти частицы относились к ФС-П. Однако выделенные Весселсом фракции из Ж З К А и Б были активны только в фотореакциях, осуществляемых солюбилизированным Хл а, хотя разница за­ ключалась только в наличии П700 и белка в составе дигитониновых частиц, а также в сдвиге красного максимума поглоще­ ния к 679 нм, что могло быть обусловлено ассоциацией пигмен­ тов с протеином и липопротеидом.

Таким образом, Весселсу удалось в значительной мере очи­ стить ПБЛВ-комплексы, относящиеся как к ФС-І, так и к ФС-П. Однако частицы ФС-П утратили фотохимическую актив­ ность.

Изолирование реакционных центров ФС-І было достигнуто в нескольких лабораториях при использовании фракции гран, а также изолированных межгранных ламелл.

Сейн и Парк [844] разрушили выделенные из шпината хлоропласты, пропуская их через мелкие калиброванные отверстия

пресса Френча. Затем для отделения в осадок крупных нераз­ рушенных фрагментов гомогенат центрифугировали 10 мин при 1000 g, а слитый супернатант— 10 мин при 10 000 g (для полу­ чения в осадке фракции из ламелл гран). Центрифугированием супернатанта при 30 000 g и 40 000 g по 30 мин и при 160 000 g в течение 60 мин получили фракцию ламелл из стромы.

Для выделения реакционных центров ФС-1 использовали

осадки после центрифугирования при 10 000, 40 000			и 160 000 g.
Растворимые белки, и в том числе так называемый			сопрягаю­
щий	фактор, удаляли	из осадков этих фракции	экстракцией
0,75	мМ ЭДТА при рН	8. Затем высокоскоростным	центрифуги­

рованием осаждали ПБЛВ-комплексы. Осадки осторожно вно­ сили в 100%-ный ацетон при —20° С для экстракции пигментов и других веществ, растворимых в 99,5%-ном ацетоне. Получен­ ные после высушивания под вакуумом осадки после новой экст­ ракции раствором 0,75 мМ ЭДТА промывали центрифугировани­ ем в 0,05 М фосфатном буфере рН 7,4 и, в конечном итоге, в нем же ресуспендировали.

Оказалось, что такая процедура обработки приводит к раз­ рушению менее чем 10% всего П700, хотя было удалено около 90% исходного количества хлорофилла. Фракция из ламелл

стромы (160 000 g) содержала 1 молекулу			П700 на 12—18 моле­
кул хлорофилла при	отношении	Хл а/Хл		b не ниже 10. Фрак­
ция из ламелл гран	содержала	1 молекулу		П700 на 28—32 мо­

лекулы хлорофилла, а отношение Хл а/Хл b было в этом случае

ниже. Авторы считают, что им удалось без применения								детерген­
тов частично очистить фракции реакционных					центров			ФС-1 из
ламелл стромы хлоропластов шпината.
Ямамото и Верной [1018] получили ракционные центры ФС-1
другим	путем: хлоропласты из шпината после				промывания по­
вторным	центрифугированием при			25 000 g	с	промежуточной
трехкратной экстракцией 0,01 М раствором NaCl,							содержащим
0,75 мМ ЭДТА и		1 мМ	трицина, высушивали		в	замороженном
состоянии. Затем		сухой	материал	экстрагировали			охлажден­
ной до —18° С смесью			15% ацетона	в гексане,		причем экст­

ракцию повторяли до шести раз. Последний раз частицы обра­

батывали в холодном гексане и	сохраняли при	температуре
—70° С.
Светло-зеленый порошок после	высушивания	в токе азота

освобождали от части оставшегося хлорофилла и цитохромов, суспендируя в 0,05%-ном тритоне Х-100 и центрифугируя при 39 000 g. Остаток солюбилизировали в 5%-ном тритоне Х-100 и разделяли центрифугированием в 2—20%-ном градиенте плот­ ности сахарозы при 131 000 g в течение 20 ч. Частицы, содер­ жащие П700, обнаружены в слое 8%-ной сахарозы, причем вы­ ход П700 после всех этих процедур составлял 60%"- В ходе эк­ стракции ацетон-гексановой смесью были удалены все кароти-

ноиды и около 90%" Хл, а предварительная							экстракция раство­
ром ЭДТА		удаляла «сопрягающий фактор». В слое,							содержа­
щем 4% сахарозы, обнаружены Цит f и Цит bs.									что П700
Анализ		под электронным			микроскопом		показал,
находится в составе частиц с размерами						60X150 А и соотноше­
нием	Хл а : Хл b : П700 в них 24 : 6 : 1. Часть							цитохромов		оста­
лась	прочно связанной			с этими частицами,			причем соотношение
Цит	f: Цит		Ь6: П700	составляло 1 : 1,3 : 3,6.				Фотохимические
свойства этих			полуочищенных реакционных центров ФС-І выра­
жены	слабо,		восстановление		НАДФ+	в	присутствии			АК —
ДХФИФ и Фд происходило с низкой скоростью.
Надо полагать, что описанные здесь процедуры обработки не
только привели к очистке реакционных						центров ФС-І, но и в
значительной степени нарушили эти центры.
Использование различных процедур фрагментации хлоропла­
стов	(с помощью детергентов, озвучивания или продавливания
через	калиброванные			отверстия) в последние				годы	привело к

новым важным открытиям. В работах лаборатории Парка [843] и Джекобм [540] развиваются представления о наличии двух ти­

пов	ФС-І. Характерным для их исследований является				сочета­
ние	изучения биохимических особенностей выделяемых				частиц
с электронномикроскопическим контролем. В лаборатории						Пар­
ка	при изучении фракций, выделенных из ламелл стромы,					обна­
ружены частицы		ПО А, а из ламелл	гран — дополнительно ча­
стицы размером		175 А. Фракция из ламелл стромы осаждается
при 160 000 g, а частицы из ламелл			гран осаждаются	уже при
10 000 g. Однако, по мнению Парка,			нет достаточных	оснований
причислять частицы ПО А к ФС-І, а 175 А — к ФС-П.
	По-видимому,	тип ФС-І, который	локализован в гранах, на­
ходится в более тесной связи с ФС-П, чем тип, который					локали­

зован в ламеллах стромы. Эти выводы сделаны, в частности, на основании анализа отношений П700 в разных видах частиц.

Из	исследований по измерению квантового выхода	[850, 611,
855,	953] был сделан вывод о равном распределении	хлорофил­
ла	между фотосистемами. Поэтому если исходить из того, что
в целых хлоропластах отношение П700 к молекулам		хлорофил­
ла	соответствует 1/425 и на ФС-І приходится половина хлоро­

филла, то в этой фракции отношение должно увеличиться до

1/212. Фракция 160 000 g с 10% всего хлорофилла			(т. е. 20%'
хлорофилла	ФС-І) содержит 1 П700 на 105 молекул		всего хло­
рофилла, а	в оставшихся	80% ФС-І во фракции гран отноше­
ние П700/Хл	ниже — по	расчету 1/200. Эти расчеты,	вероятно,

весьма сложно подтвердить экспериментально.

В защиту развиваемых представлений сотрудники группы Парка приводят также данные о повышенной флуоресценции, источником которой является фракция гран.