Лабораторная диагностика.

Сложность выращивания in vitro большинство патогенных трепонем наряду с транзиторным характером многих поражений делает невозможной диагностику трепонематозов обычными бактериологическими методами. Хотя спирохеты и обнаруживаются микроскопически при первичных и вторичных поражениях, но диагноз основывается прежде всего на клинических наблюдениях и подтверждается серологическими реакциями. Для практических целей серологический ответ ко всем трепонемам можно считать идентичным, поэтому мы рассмотрим здесь в основном применение серодиагностики сифилиса.

Прямая микроскопия. Трепонемы могут быть обнаружены непосредственно в свежем экссудате из первичных или вторичных сифилом при темно-польной или фазово-контрастной микроскопии. Во всех стадиях заболевания производят микроскопические исследования отделяемого язвы, эрозий, папул или пунктатов из регионарных лимфатических узлов. Хотя этот метод позволяет поставить быстрый и точный диагноз, но он может быть малочувствительным, так как первичные повреждения могут содержать относительно немного бактерий. Кроме того, необходимо проводить дифференциацию между патогенными и комменсальными спирохетами, которые могут контаминировать исследуемый материал. Бледную трепонему необходимо дифференцировать с непатогенными представителями этого рода, обитающими на наружных половых органах (Tr. refringens, Tr. phagedenis) и в полости рта (Tr. macrodentium, Tr. denticola, Tr. orale), которые значительно грубее и отличаются по характеру движения и количеству завитков. Более чувствительные и специфичные результаты могут быть получены при использовании фиксированного материала реакции иммунофлюоресценции с антитрепонемными антителами.

Серологические реакции. Инфекция T. pallidum приводит к образованию двух типов антител:

1. Специфические антитела, направленные прежде всего на полипептидные антигены трепонем.

2. Неспецифические антитела, которые реагируют с нетрепонемным кардиолипиновым антигеном.

Неспецифические серологические тесты на сифилис. Механизм индукции неспецифических антител остается неясным. Кардиолипин - фосфолипид, извлеченный из сердца быка, и возможно, что подобное вещество, имеющееся в клетке трепонемы или высвобождающееся из клеток хозяина, пораженных микроорганизмом, может стимулировать выработку антител.

Реакции на неспецифические антитела из-за их дешевизны и технической простоты обычно используются в качестве скрининг-тестов для выявления сифилитической инфекции. Так как эти тесты имеют относительно низкую специфичность, положительные результаты подтверждают обнаружением специфических антитрепонемных антител.

Реакция связывания комплемента, реакция Вассермана, предложенная в 1906 г., была первой серологической реакцией для диагностики сифилиса.

Реакция Вассермана до сих пор имеет значение в диагностике серопозитивного сифилиса в Украине. Реакция Вассермана сходна с реакцией связывания комплемента Борде - Жангу.

Реакция Вассермана в первичном периоде сифилиса бывает положительной в половине случаев, но не ранее чем через 2 - 3 нед после появления шанкра или на 5 - 6-й неделе от момента заражения; во вторичном периоде реакция Вассермана становится положительной у 90% больных, в третичном периоде - в среднем у 75%, преимущественно нелеченых или плохо леченных, при прогрессивном параличе - у 95 - 98% и при спинной сухотке - у 50 - 70% больных. У новорожденных и грудных детей, больных сифилисом, реакция Вассермана бывает отрицательной; у детей с врожденным сифилисом она становится положительной только через 2 - 3 мес после рождения.

Реакция Вассермана (в совокупности с клиническими данными и осадочными реакциями) служит методом контроля за качеством лечения. После лечения больных с первичным и вторичным серопозитивным сифилисом она становится отрицательной через 1 '/2 - 2 мес. При третичном сифилисе она может длительно (1 – I,5 года и более) оставаться положительной. Необходимо помнить, что отрицательная реакция Вассермана - не единственный критерий излечения от сифилиса.

Реакция Вассермана может быть положительной (неспецифической) при беременности, начиная с 8 мес, и после родов, при малярии, туберкулезе, некоторых вирусных и протозойных заболеваниях, лепре, пемфигусе, лептоспирозе, новообразованиях, во время менструации, после наркоза, употребления накануне взятия крови спиртных напитков, жирной пищи, лекарств, введения чужеродных сывороток и др.

Неспецифические положительные реакции Вассермана при повторных исследованиях, которые производят дву- или троекратно через 10 - 15 дней, становятся отрицательными; методом титрования сывороток можно дифференцировать ложноположительные и положительные реакции Вассермана.

При диагностике сифилиса используют осадочные реакции Кана и цитохолевую. Сыворотку смешивают со специальным липидным антигеном (спиртовой экстракт различных животных органов + холестерин). Положительная реакция проявляется формированием мелких гранул или хлопьев и отрицательного появлением (внешним видом) однородной мути, при отрицательной появляется равномерная муть.

Несмотря на огромную ценность реакции Вассермана прошлом, теперь она имеет главным образом исторический интерес. Всемирная Организация Здравоохранения (1982 г.) рекомендовала прекратить использование этой реакции.

Предпочтительным методом обнаружения антител к кардиолипину является тест Контрольной лаборатории венерических заболеваний (КЛВЗ - VDRL) или одна из его модификаций, так как он легко стандартизируется, прост и обладает хорошей воспроизводимостью. Все другие тесты, включая реакцию связывания комплемента, дают менее надежные результаты и в большинстве лабораторий были прекращены.

Тест Контрольной лаборатории венерических заболеваний (КЛВЗ). В своей оригинальной форме тест выполняется реакция на предметном стекле, в которой сыворотка пациента (3 объема), предварительно прогретая для инактивации комплемента, смешивается на предметном стекле со свежеприготовленной суспензией кардиолипин-лецитин-холесторолового антигена (1 объем). Смесь вращают, обычно механически, в течение 4 минут, после чего определяют под малым увеличением микроскопа флоккуляцию (аггрегацию комплексов антиген-антитело). Тест легко может быть выполнен в количественном варианте с последовательными разведениями исследуемой сыворотки, наибольшее разведение, дающее положительную реакцию, определяется как титр реакции. Основные недостатки теста КЛВЗ на предметном стекле – необходимость готовить свежий антиген каждый день и использовать микроскоп, чтобы учитывать результаты. Термоинактивация сыворотки необходима для разрушения термолабильного ингибитора IgM, который может находиться в нормальной и сифилитической сыворотке. Хотя это и рассматривалось как недостаток, температурная обработка в настоящее время одобрена многими лабораториями, так как она инактивирует ВИЧ.

Тест КЛВЗ используется в качестве скрининг-теста и положительна примерно у 70 % больных первичным и 99 % - вторичным сифилисом, но отрицательна при позднем сифилисе. Нарастание титра при количественном тесте КЛВЗ может использоваться для подтверждения диагноза врожденного сифилиса.

Так как положительный результат теста КЛВЗ обычно указывает на активную инфекцию, он может также использоваться для контроля за эффективностью антибактериальной терапии.