4. Лабораторная диагностика эшерихиозов и дизентерии

Лабораторная диагностика эшерихиозов. Материалом для лабораторной диагностики эшерихиозов и других коли-инфекций. служат испражнения больных, отделяемое из зева и носа, трупный материал (кровь, желчь, печень, селезенка, легкие, содержимое тонкого и толстого кишечника, гной).

Посев исследуемого материала производят на плотные питательные среды (Эндо, Левина, Мак Конки и др.), параллельно делают посевы для выделения тифозно-паратифозной и дизентерийной групп бактерий на среды Плоскирева и висмут-сульфитагар. При подозрении на септический процесс сеют кровь для обогащения в бульон, а затем высевают на плотную среду. Выделенные чистые культуры идентифицируют по морфологическим, куль туральным, биохимическим, серологическим и биологическим свойствам

Принадлежность выделенных эшерихий к патогенным сероварам соответствующих О-групп устанавливают в реакции агглютинации после разрушения кипячением К-антигена исследуемой культуры. Реакция агглютинации ставится с ОК и О-сыворотками.

Для ускоренной идентификации выделенных культур или исследуемого материала применяют метод иммунофлюоресценции с использованием группоспецифических меченых сывороток. Он позволяет получить предварительный ответ через 1 - 2 ч.

Для серологической диагностики коли-энтеритов начиная с третьего-пятого дня заболевания применяют реакцию непрямой гемагглютинации. Положительным ответом считают нарастание титра антител в динамике заболевания.

Для обнаружения фактора адгезии ЭПКП можно проводить изучение прикрепления культур микроорганизмов к клеткам линии HEp-2 и исследования с помощью ДНК-зондов, но они доступны лишь некоторым лабораториям.

При лабораторной диагностике инфекций ЭТКП проводят обнаружение энтеротоксинов. В качестве стандартных методов обнаружения термолабильного энтеротоксина (ТЛТ) приняты исследования на культуре клеток надпочечников мыши и яичников китайских хомячков, но к токсину чувствительны и другие линии клеток, в том числе и клетки почек обезьян Vero. Добавление клеток к надосадку культуры, содержащей ТЛТ или холерный токсин, приводит к морфологической реакции, которая может быть выявлена при микроскопии. Реакция может быть расценена как стимулирующая или «цитотоническая», в отличие от цитотоксического эффекта надосадка ВТКП на клетки Vero. Для обнаружения ТЛТ доступен также широкий набор иммунологических методов, включая иммуноферментный анализ и твердофазный радиоиммунный анализ.

Многие энтеротоксигенные штаммы Esch. coli продуцируют только термостабильный энтеротоксин, и важно включать исследования на образование ТСТ при любом исследовании на энтеротоксигенность. К сожалению, обычные тесты трудоемки и требуют длительного времени. Впоследствии стал доступным ИФА с моноклональными антителами, специфичными к ТСТ.

Были разработаны методы генных радиоизотопных или биотиновых зондов для выявления ТСТ и ТЛТ в пробах испражнений, пищевых продуктов или воды, содержащих ЭТКП.

Оригинальный тест на энтероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП) – глазной тест на морских свинках. Микроорганизмы вводят в коньюнктивальный мешок морских свинок и наблюдают в течение 7 дней развитие коньюнктивита. Можно использовать также метод культуры клеток, в котором к монослою клеток HEp-2 или HeLa добавляют суспензии микроорганизмов. После соответствующего времени клетки тщательно исследуются на присутствие внутриклеточных организмов.

Содержание ВТКП в микрофлоре фекалий может быть незначительным, часто – менее 1 %, так, что выбор и исследование отдельных колоний не всегда могут обнаружить присутствие ВТКП. Были разработаны ДНК-зонды на гены ВТ1 и ВТ2, и при использовании таких зондов в тестах гибридизации, проверяют несколько сотен колоний из каждой пробы фекалий, что дает значительное увеличение в чувствительности.

В то время как 95 % Esch. coli ферментируют сорбит, ВТКП О157 не расщепляют сорбит через 24 ч, и это свойство используется для их выявления, например, применением например сорбитол-МакКонки агара для первичного культивирования с последующей реакцией агглютинации иммунной сывороткой против О157. Образование Веро-токсина подтверждают, исследуя цитотоксический эффект штаммов на клетках Vero. Подтверждение инфекции ВТКП может быть также получено выявлением нарастания титров ВТ-нейтрализующих антител или или антител против липополисахарида О157 в сыворотках больных

Лабораторная диагностика дизентерии. Успех лабораторного исследования во многом зависит от правильности взятия испражнений и посева их на элективно-дифференциальную среду у постели больного с последующей отправкой чашек в лабораторию.

В условиях стационара испражнения собирают на поверхности бумажной тарелки или салфетки, которые вкладывают в судно, предварительно промытое проточной водой или, лучше, кипятком, высушенное и не содержащее дезинфицирующих веществ. Наилучшим способом является взятие фекалий тампоном непосредственно из прямой кишки. Посев производят немедленно после получения испражнений. Отбирают частицы кала, содержащие гной и слизь, и засевают тампоном на чашки со средой Плоскирева, которые помещают в термостат при 37°С на сутки. Выделенную чистую культуру идентифицируют по биохимическим и серологическим данным.