1. Диагностика маститов.

В комплекс диагностических исследований входит:

1) сбор анамнестических данных;

2) клиническое исследование молочной железы;

3) лабораторные методы исследований молока;

4) бактериологические исследования секрета вымени.

У коров в период запуска и сухо­стоя обращают внимание на общее состояние коров и молочной железы. При этом пальпируют каждую четверть вымени. При осмотре выдоенного секрета учитывают изменение его цвета и консистенцию во время запуска и травостоя. Все показатели клинического обследования и ла­бораторного анализа секрета из отдельных четвертей вымени сравнивают между собой. У нетелей проводят осмотр вымени и анализ секрета за 2 месяца до отела. Согласно рекомендациям по борьбе с маститом при клинически выраженном мастите коров исследуют ежедневно при доении, а для диагностики скрыто протекающего воспале­ния вымени — 1 раз в месяц.

У овец, свиноматок и кобыл обычно исследуют лишь бакте­риологический секрет больных четвертей вымени, что позволяет дифференцированно подходить к выбору антибиотиков при ле­чении больных животных.

1) Собирая анамнестические данные, выясняют: когда заболело животное, как проходили последние роды, каким было состояние молочной железы в предыдущую лактацию и в сухостойный период, какой применялся метод доения и тип доильной установки (правильность ее работы).

2) Клинический осмотр начинают с исследования общего состояния животного (температура, пульс, дыхание), затем исследуют вымя путем его осмотра, пальпации, пробного доения, определения качества молока. Вымя осматривают сзади и сбоку, при этом обращают внимание на его форму, плотность, местную температуру тела, болезненность прикосновений к молочной железе, сохранность волосяного покрова, окраску кожи; выявляют травмы или их следы, заболевания кожи. При пальпации необходимо выявлять состояние надвыменных лимфатических узлов. При воспалительных процессах, особенно инфекцион­ной этиологии, надвыменные лимфатические узлы могут быть увеличены в размерах, болезненны, неподвижны, уплотнены.

При визуальном определении качества молока учитывают наличие в нем фибринозных сгустков гноя, крови и других примесей. Это значительно легче определить по фильтру после процеживания молока, но целесообразнее провести лабораторные исследования его.

3) Лабораторные методы исследования молока.

Биохимический анализ сыворотки крови проводят в ветеринарной лаборатории, а затем используют эти данные при составлении рациона кормления больных маститом. Лабораторный анализ секрета молочной железы предусмат­ривает определение цвета, консистенции, запаха, сгустков и хлопьев (проба отстаивания), щелочности (пробы с индикатор­ными карточками, бромтимоловым синим, мастидином и димастидином), примеси лейкоцитов (лейкоцитарная проба), крови. Кроме того, в секрете вымени можно выявить ферменты (каталаза, редуктаза), содержание лизоцима (мурамидазы) и др.

1. Определение примесей. Молоко для лабораторного исследова­ния берут следующим образом. Первые 2—3 мл секрета удаляют, а затем выдаивают молоко в пробирки, одинаковые по диаметру и цвету стекла, на пластмассовую пластинку с углуб­лениями (лунками). Порции секрета сравнивают между собой по цвету и консистенции; при этом можно уловить примесь крови, хлопьев и сгустков. Для опреде­ления примесей можно пропустить молоко через сеточку или марлю; примеси остаются на их поверхности. Пробы секрета в пробирке можно оставить в холодильнике на 1 сутки. Молоко из здорового вымени осадка не образует.

2. Определение щелочности секрета. Бромтимоловая проба. Ис­пользуют 0,25% раствор бромтимолсинего в 65% спирте. В углубления пластинки выдаивают по 2—5 капель молока и добавляют 2—5 капель реакти­ва. Молоко из здоровых окрашивается в желтоватый цвет, из больных — в зеленый с разными оттенками или синий.

Проба с индикаторными карточками. Индикаторные или маститные карточки представляют собой бумажные пластинки, на которые нанесен индикатор в виде 4х желтых пятен. На каждый кружок выдаивают 2-3 капли молока; цвет бумажных кружков изменяется в зависимости от щелочности молока — желтоватый, зеленоватый с разными оттенками или синий.

Проба с димастидином. Используют молочно-контрольные пластинки (МКП-1 и МКП-2). МКП-1 имеет четыре (по числу четвертей) полуша­ровые луночки с черно-белыми кольцевыми углублениями, которые соответствуют 1 и 2,5 мл молока. Контрастное окра­шивание дна луночек облегчает выявление хлопьев и крови. Для проведения пробы с димастидином готовят 5%-ный рас­твор димастидина на дистиллированной или кипяченой теплой воде. В каждое углубление пластинки надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приго­товленного раствора димастидина из бутылки с пипеткой-авто­матом. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой лунке поочередно, в течение 10—15 сек. При использовании пластинки МКП-2 молоко с реактивом смешивают одновременно во всех лунках путем горизонтального вращения пластинки. Реакцию учитывают по густоте желе и из­менению цвета. Образование желе — основной диагностический признак при исследовании молока по димастидиновой и мастидиновой про­бам, а изменение цвета — ориентирующий признак.

Проба с 2% раствором мастидина. Готовят 10% и 2% растворы мастидина. Ставят пробу и учитывают реакцию по образованию сгустка и измене­нию цвета, как при исследовании молока с 5% раствором димастидина. Показания проб с димастидином или мастидином в обязательном порядке нужно подтверждать пробой отстаивания.

Проба с маститдиагностом. В состав маститдиагноста вхо­дят дистиллированная вода — 100 мл, сульфанол — 30 г, трипо-лифосфот — 5 г, бромтимолсиний — 0,02 г, 1% рас­твор кислоты — 0,5 мл. Молоко для пробы берут в конце доения или из сборного молока. В луночках молочно-контрольной пластинки смешивают 1 мл молока с 1 мл реактива. Наличие плотного желеобразного сгустка тягучей массы или редко слизи свидетельствует о положительной реакции на скрытый мастит.

Проба отстаивания выполняется с молоком, давшим положительный результат на димастидин и мастидин. Берут в пробирку 10 мл молока и помещают на 16—18 ч в холодильник или другое холодное место, чтобы молоко не прокисло. На второй день пробы осмат­ривают и учитывают результаты. Лучше это делать при дневном свете. Обращают внимание на наличие осадка, количество и ха­рактер сливок, цвет молока.

3. Лейкоцитарная проба проводится в специальных пробирках с суженным концом. Пробирку заполняет молоком до метки 10 и центрифугируют в течение 5 мин при 2 тыс. об/мин. В случае заболевания маститом уровень осадка достигает 1 и более. Из осадка делают мазок, окрашивают по Граму и просматривают под микроскопом. В случае мастита в осадке секрета можно об­наружить микробы, лейкоциты, гнойные тельца.

4. Проба с бензидином для выявления в молоке пигментов крови. В пробирку наливают 5 мл 3% раствора перекиси водоро­да и 2 мл насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте. После тщательного взбалтывания в смесь прибавляют 2-10 капель молока. Положительная реакция — смесь окраши­вается сначала в зеленый, а через минуту в темно-синий цвет; отрицательная — смесь светлая с беловатым хлопьевидным осадком.

5. Определение каталазы с помощью бумажного диска. Из хроматографической бумаги фильтра Ф-1 готовят диски диаметром 12 мм и 3% раствор перекиси водорода на М/15 фосфатном буфере, рН 7,2 (готовят в день проведения пробы).

Анатомическим пинцетом захватывают бумажный диск и по­гружают его в тщательно смешанную пробу молока; для удаления излишка секрета диск поворачивают в вертикальное положение и, притрагиваясь к стенкам пробирки, как бы вытирают его. После этого диск погружают в раствор перекиси водорода, 5 мл которого наливают в пробирку. При малом содержании лейкоцитов время всплытия диска равно 1-5 мин, а иногда и более. При увеличении лейкоцитов диск всплывает за 30-35 сек., при заболевании маститом — за 3-5 сек. или моментально. В одной про­бирке с одним и тем же реактивом можно проводить до 10 ана­лизов.

6. Определение лизоцима (мурамидазы). Вымя обмывают, высу­шивают его полотенцем, кожу соков дезинфицируют 70%-ным спиртом и берут в сте­рильные пробирки молоко по 5 мл: на МПА в чашки Петри высеивают суточ­ную бульонную культуру золотистого стафилококка (молочная вена). Для этого культуру разводят физиологическим раствором 1:10 000 и 0,1 мл равномерно распределяют по чашке и оставляют на 1 ч. Затем в агаре каждой чашки делают 4—6 луночек диамет­ром 10 мм. В каждую лунку вносят стерильной микропипеткой по 0,1 мл молока. Чашки выдерживают при комнатной темпера­туре (18—22 °С) 18 ч, а затем помещают в термостат на 5—6 ч; ес­ли молоко содержит лизоцим М, то вокруг луночки происходит задержка роста стафилококков в виде кольца. Измерив диаметр кольца задержки роста микроба, определя­ют титр лизоцима молока.

Диагностика субклинического (скрытого) мастита. Вы­даивают секрет в лунки молочно-контрольной пластинки с последующим добавлением одного из реактивов (2% мастидин, 2% мастотест Воронежский, 5% димастин или 2,5% сульфанол). Густоватый в начале секрет при смешивании с реактивом становится жидким. О наличии скрытого мастита свидетельствует образование сгустка. Секрет здоровых животных сгустка не образует. Также диагностируют путем исследования мо­лока с одним из быстрых диагностических тестов (БМТ) - пробы с димаститом, мастидином, мастотестом Воронежским и др. Действие быстрых маститных тестов основано на выявлении увеличенного количества лейкоци­тов и изменения рН молока.

Диагностика мастита в запускной и сухостойный периоды. В по­следний день запуска всех коров исследуют клинически. При отсутствии кли­нических признаков (увеличение доли, болезненность, изменение секрета, по­вышение местной температуры) болезни исследуют секрет из каждой доли вымени по быстрому маститному тесту и пробой отстаивания. В сухостойный период коров исследуют на мастит дважды: первый раз через 10-15 дней от начала сухостоя, второй - за 10-15 дней до отела при пе­реводе животных в родильное отделение. При выявлении клинических при­знаков заболевания проводят пробное доение. В течение первых 20-30 дней сухостойного периода в вымени здоровых коров секрет жидкий, серовато-белого цвета однородной консистенции без каких-либо включений. Во второй половине периода секрета в вымени мало (3-5 см³), он вязкий, тягучий, клейкий (медообразный), желто-коричневого цвета (редко секрет серовато-белого цвета), иногда секрет выдоить не удается. Наличие клинических признаков или изменения количества и внешнего вида секрета свидетельствует о клинически выраженном мастите.