1.3.3. Мониторинг сывороток крови кур на обнаружение антител к возбудителям бн, ибк и сся-76.

На Украине, как и во многих странах мира ИБК, НБ и аденовирусные инфекции наносят птицеводческим хозяйствам большой экономический ущерб, обусловленный снижением мясной и яичной продуктивности, повышение отхода молодняка, провоцированием и обострением течения респираторного микоплазмоза и кампилобактериоза [5].

Найболее важными условиями борьбы с данными заболеваниями является их птицы опытного хозяйства «Борки», а также при условии ее реализации во многие регионы Украины, был проведен тщательный эпизоотический анализ.

Таблица 3

Показатели титров и напряженности иммунитета по НБ, ИБК и ССЯ-76 птицы О/Х «Борки»

	30 дн	60 дн	90 дн	120 дн	150дн	180дн	210дн	240дн
БН напряженность иммунитета % Log2	100 10,7	100 8,6	100 8,1	100 8,1	100 8,1	100 8,1	100 7,9	100 7.7
ССЯ-76 напряженность иммунитета % Log2	100 9,5	100 9,5	100 9,3	100 9,2	100 9,1	100 8,9	100 8,9	100 9,4
ИБК (ИФА) напряженность иммунитета % Log2	100 11,3 1:9174	100 13,1 1:6001	100 12,5 1:6945	100 12,7 1:9989	100 13,2 1:6127	100 12,5 1:7244	100 13,2 1:9862	100 12,8 1:7244

В хозяйстве содержится птица трех видов: утки. Куры, индейки. Зоны куроводства, утководства и индейководства территориально разобщены.

Куры родительского стада и промышленые несушки содержится в клеточных батареях, а при напольном содержании распостранение инфекции по стаду происходит более интенсивно. Однако, плотность размещения промышленной птицы достаточно высока, а также клеточное обурудование устаревшее. Это может способствовать распостранению возбедителей инфекционных заболеваний.

Анализируя ситуацию по возможному распостранению ИБК, БН и ССЯ-76 в опытном хозяйстве «Борки», мы не могли опиратся на показатели сероконтроля, так как стада племенных кур постоянно вакцинируются, но необходимость контроля альтеративными способами очевидна.

1.3.4. Основные этапы технологии приготовления «Эмульсинвакцины ассоциированной инактивированной против нб, ибк и сся-76»

Для производства вакцины используют производственные штаммы Н-52 вируса ИБК, «Ла-Сота», вируса НБ и L-497 вируса ССЯ-76.

Для приготовления необходимы инкубационные яйца – куриные и утиные. Инкубационное яйцо получали из птицехозяйств, благополучных по острым инфекционным заболеваниям. Инкубационное яйцо должно быть чистым правильной формы с хорошей плотной скорлупой, при овоскопии желток должен размищатся в центре яйца. Воздушная камера (пуга) должна быть в тупом конце яйца, неподвижная. Перед закладкой в инкубатор все яйца подвергали дезинфекции парами формальдегида. Для этих целей имеется специальная камера.

Для создания необходимой концентрации паров формальдегида в расчете на 1,0 см³ в камере расходуется 30 мл формалина, 10 мл воды и 20 граммов марганцевокислого калия.

В процессе инкубации необходимо осуществлять биологический контроль за развитием зародышей и анализ причины гибели эмбрионов.

Из матровой расплодки штаммов Н-52 (ИБК), Ла-Сота (НБ) и L-497 (ССЯ-76) готовили разведение вирусов от 10^-1 до 10^-11. каждым разведением были заражены по 4 10-дневных куриных для вирусов ИБК и НБ и 4 11-дневных утиных для вируса ССЯ-76 эмбриона на каждое разведение.

Перед заражением эмбрионы овоскопировали и отбирали пригодные для работы, подвижные с хорошо развитой сосудистой системой. Скорлупу со стороны пуги в месте прокома обрабатывали фломбированием. В центре пуги и в месте введения вируса делали пробойником отверстие, затем через боковое – вводили на глубину 2 – 3 мм в аллантоисную полость 0,2 см³ последовательного разведения штамма вируы. После заражения эмбрионов отверстия в скорлупе заливали расплавленым парафином.

Зараженные эмбрионы инкубируют в течение 96 – 120 часов. В процессе инкубации овоскопировали 1 раз в сутки. Через 96 – 120 часов инкубации все эмбрионы охлаждали при температуре +4 - +6 ⁰С в течение 13 – 18 ч и вскрывали.

Перед вскрытием эмбрионов скорлупу над пугой фламбировали,вскривали и собирали экстраэмбриональную жидкость в стерильные стеклянные флаконы.

Матровая расплодка хранится в нативном состоянии при температуре –20 ⁰С…-25 ⁰С. Для использования в работе ее размораживают при комнатной температуре,разводят в соотношении 1:10 (вирус ССЯ-76), 1:100 (вирус НБ) и 1:1000 (вирус ИБК) стерильнм физиологическим раствором и используют для получения производственной расплодки.

В разведенную расплодку добавляем антибиотики (пенициллин,стрептомицин,нистатин) и выдерживаем 2 часа для контакта. Разведенный матровый материал готовим в объеме, необходимом для заражения данной партии куриных 10-дневных и утених 11-дневных эмбрионов. Ззаражение, инкубирование и вскрытие эмбрионов проводим как ранее.

Экстраэмбриональную вируссодержащую жидкость отсасываем пипеткой с резиновой грушей в стерильные флаконы емкостью 500 см³. При сборе ЭЭЖ следует избегать попадания в материал желтка и белка эмбрионов.

В собранную ЭЭЖ добавляем пенициллин,стрептомицин и нистатин. После контакта с антибиотиками из каждого флакона берем пробу жидкости в объеме 1 см³ для контроля на стерильность и гемагглютинирующую активность. Затем проводим инактивацию вирусов и контроль.

Инактивированные вирусы контролировали на полноту инактивации и безвредностьметодом трехкратных последовательных ( “слепых”) пассажей на 10-дневных куриных и 11-дневных утеных эмбрионах.

Собранную ЭЭЖ от эмбрионов 1-го пассажа использовали в качестве заражающего материала для проведения 2-го пассажа, жидкость от эмбрионов 2-го пассажа использовали для проведения заключительного 3-го пассажа.

Полноту инактивации инфекционных свойств вирусов НБ, ИБК и ССЯ-76 устанавливали в РГА с ЭЭЖ, полученной от зараженных эмбрионов после 3-го пассажа. При успешном проведении инактивации агглютинации эритроцитов быть не должно, т.е РГА должна быть отрецательной.

Инактивированные вирусы с известными титрами гемагглютинирующей активности соединяют с твином-80 и адъювантом «Монтанид-ISA-70».

Вакцину розфасовывают в стерильные флаконы, которые плотно закрывают стерильными резиновыми пробками и закатывают алюминиевими колпачками.

На флакон с вакциной наклеивают этикетку, на которой указывали: наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак, название препарата, объем его во флаконе, количество доз, номер серии, номер контроля, дату изготовления, срок годности, чсловия хранения.