Как и какие клетки млекопитающих возможно использовать в цитогенетических тестах. В чем преимущества? Назовите известные Вам методы.
Клетки млекопитающих. Обычной тест-системой является культура клеток млекопитающих:
культура лимфоцитов человека
Они не способны к делению в культуре; могут быть стимулированы путем обработки митогеном (например, фитогемагглютиннином (ФГА); культуру получают из образца свежевзятой крови и проводят культивирование на протяжении нескольких циклов делений
клетки костного мозга лабораторных животных
Методы:
Методы оценки флуктуирующей асимметрии.
Флуктуирующая асимметрия — это один из общих онтогенетических показателей, характеризующий стабильность индивидуального развития, дающий оценку состояния природных популяций и зависящий от состояния среды. Ф. асим. является результатом неспособности организмов развиваться по точно определенному плану.
При работе с биологическими объектами в настоящее время используется классификация асимметрий (нарушения симметрии) по Л. Ван Валену, согласно которой они подразделяются на 3 типа:
1) направленная асимметрия, когда какая-то структура развита на одной стороне больше, чем на другой (сердце млекопитающих);
2) антиасимметрия — большее развитие структуры на одной из сторон (правша и левша в популяции человека)
3) флуктуирующая асимметрия - незначительные ненаправленные отклонения от строгой билатеральной симметрии.
Иммунологический подход.
Иммунологический подход при оценке состояния окружающей среды заключается в изучении изменений врожденного и приобретенного иммунитета у беспозвоночных и позвоночных животных.
Все иммунологические тесты по оценке иммунного статуса млекопитающих дают информацию о трех основных клеточных популяциях иммунной системы. К ним относятся:
1) фагоцитирующие клетки, обеспечивающие захват и переваривание чужеродных или измененных собственных клеточных структур;
2) Т-лимфоциты, регулирующие взаимодействие клеток внутри системы с помощью цитокинов; они осуществляют распознавание и уничтожение генетически чужеродных и измененных клеток организма, дают сигнал В-лимфоцитам к продукции антител;
3) В-лимфоциты, продуцирующие антитела иммуноглобулиновой природы, которые нейтрализуют действие чужеродных агентов и облегчают фагоцитоз.
Как реконструировать дозу ионизирующего излучения, полученную человеком с помощью микроядерного теста. В чем принцип метода?
Микроядерный тест - заключается в количественной регистрации микроядер в клетках, находящихся на стадии телофазы митоза. Как сравнительно простой метод выявления химических веществ, способных индуцировать хромосомные повреждения.
Принцип метода заключается в образовании микроядер вследствие нарушения распределения генетического материала между дочерними клетками (5%) или формирующихся из обломков хромосом (до 95%) при митотическом делении.
лимфоциты периферической крови сохраняют полученные повреждения в течение длительного времени.
Микроядра обнаруживаются в лимфоцитах сразу после первого митоза.
Для построения дозовой зависимости кровь облучают in vitro (или вносят в культуру мутаген) и спустя 72 ч от начала ФГА-стимуляции анализируют.
Подсчитывают обычно 500 бинуклеарных клеток, используя метод цитокинетического блока (цитохолазина-Б блокирует разделение цитоплазмы).
Возможность применения теста для биодозиметрии ограничена 2 – 4 годами после облучения.
Для проявления биологического эффекта в лимфоцитах крови необходимо, вероятно, несколько месяцев, т.ч. существует органические и «снизу».
Правила подсчета микроядер
Микроядра имеют округлую или овальную форму и обладают типичной ядерной окраской,
в цитоплазме одной бинуклеарной клетки может присутствовать одно микроядро и более,
микроядра меньше половины основного ядра,
регистрировать следует те микроядра, между которыми и основным ядром четко выявляется ядерная мембрана.
Реконструкция дозы γ-облучения по микроядерному тесту.
При дозах от 1 до 4 – 5 Гр увеличение количества микроядер в клетках линейно для всех видов излучений.
При дозах от 0.05 до 2 Гр выход микроядер описан линейно-квадратичной зависимостью.
В диапазоне доз 0.05 – 0.1 Гр имеется плато (дозонезависимый участок).
Возможным недостатком этих тестов является существенное различие метаболизма растений и млекопитающих.