Влияние стрессирующих воздействий на морфологический гомеостаз (раскрыть на конкретных примерах). Назвать типы, классы или виды живых организмов, используемых в данном подходе биотеситрования.
Последствия нарушений виндивидуальном развитии могут быть выявлены:
- по частоте встречаемости морфологических отклонений (фенодевиантов)
- по величине показателей флуктуирующей асимметрии (отклонение от совершенной билатеральной и радиальной симметрии),
- методом анализа сложно организованных комплексных структур (фрактал-анализ) Флуктуирующая асимметрия
-является мерой стабильности развития,
- результатом неспособности организмов развиваться по точно определенному плану в условиях антропогенной нагрузки.
-Различия между сторонами билатерального организма не являются генетически детерминированными и не имеют адаптивного значения.
-один из общих онтогенетических показателей,
- характеризует стабильность индивидуального развития,
- дает оценку состояния природных популяций,
-зависит от состояния среды.
Ячмень, овес и пшеница используются для оценки воздействия на агроценозы
Для анализа берут флаговые (самые верхние, одноколосовые) листья.
•Минимальный размер выборки – 25 растений.
•Анализируется ширина левой и правой половинки листа от главной жилки.
Оценка стабильности развития млекопитающих проводится Пj флуктуирующей асимметрии 10 признаков рыжей полевки (Clethrionomys glareolus) и обыкновенной бурозубки (Sorex araneus)
БИОТЕСТИРОВАНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ ВОДЫ С ПОМОЩЬЮ РЯСКИ МАЛОЙ
Представители семейства рясковых являются самыми маленькими цветковыми растениями в мире. В результате гидрофильной эволюции они достигли крайней степени редукции всех органов, поэтому по простоте строения занимают первое место среди цветковых растений. Это — водные, свободно плавающие, многолетние травянистые растения.
Вегетативное тело рясковых называется листецом. Листецы одиночные или собраны в небольшие группы с помощью гиалиновой нити — тонкого выроста мембраны. Листецы состоят из паренхимных клеток хлоренхимы, разделенных большими межклеточными полостями, заполненными воздухом. Проводящая система неразвита. Корни развиты слабо и не достают грунта, по строению простые, одинарные (у многокоренника их число составляет от 3 до 10), отходят от брюшной поверхности листеца, зеленые, поскольку содержат хлорофилл. Рясковые — растения космополиты, распространены по всему свету. Вегетативное тело по виду напоминает крошечный плавающий лист или слоевище низших растений, поэтому длительное время их считали водорослями.
Листецы рясковых либо одиночные, либо соединены в небольшие группы. Форма листецов может быть почковидной или шаровидной. Цветение у рясок наблюдается крайне редко. Плоды хорошо видны невооруженным глазом, они чуть больше макового зернышка. объектом для биологического тестирования. Семейство рясковых содержит более 40 видов, из них в России обитает только 5 видов
Ряска малая — растение, плавающее на воде. Размер листецов () 2—4 мм. Число жилок 3 . Листецы плоские, образуют группы из 3 — 6 растений. Встречается в стоячих водах. Корни длинные, но не достигают грунта, а выполняют главным образом функцию якоря, предотвращая переворачивание растений в воде. Встречается чаше всего в стоячих водах.
Рясковые размножаются преимущественно вегетативно, отдельный лист может пройти 10 делений за период 7—10 сут. Рясковые могут удваивать свою массу за время от 10 ч до 2 сут при оптимальных температуре, освещении и питании
Принцип метода основан на определении гибели и изменений в темпах роста ряски малой, учете морфологических изменений (хлороз, некроз поверхности листеца, расслоение листецов) при воздействии токсических веществ в исследуемой среде по сравнению с контролем
Острое токсическое действие исследуемой воды на ряску определяется по гибели ее за определенный период времени. Критерием острой токсичности служит гибель 50 % и более растений за 96 ч в исследуемой воде при условии, что в контроле погибло не менее 10 % растений
В экспериментах по определению острого токсического действия устанавливают: среднюю летальную концентрацию отдельных веществ (кратность разбавления вод, содержащих смеси веществ), вызывающую гибель 50 % и более тест-организмов; безвредную (не вызывающую эффекта острой токсичности) концентрацию отдельных веществ (кратность разбавления вод, содержащих смеси веществ), вызывающую гибель не более 10 % тест-организмов
Хроническое токсическое действие исследуемой воды на ряску малую оценивают по смертности и скорости роста за период до 24 сут в исследуемой воде по сравнению с контролем. Критерием хронической токсичности служит гибель 20 % и более тест-организмов и (или) достоверное отклонение в скорости роста из числа выживших растений по сравнению с контролем.
Биотестирование проводится в лабораторных условиях. Помещение не должно содержать токсичных паров и газов. Температура окружающего воздуха в лаборатории от + 18 до + 25 °С. Атмосферное давление 84—106 кПа (630 — 800 мм рт.ст.). Освещение помещения естественное или искусственное, не ограничено особыми требованиями. Освещенность для ряски 2 500 — 3 500 лк. Интенсивность света должна быть более чем на 15 % больше по сравнению с дневным светом.
Химически чистая посуда для биотестирования должна храниться с закрытыми стеклянными притертыми пробками или завинчивающимися крышками в защищенных от пыли ящиках лабораторного стола или на закрытых полках, стеллажах и т. п. Вся грязная посуда после проведения анализов должна подвергаться стерилизации кипячением в течение 1 ч
Культивационная вода используется для разведения маточной культуры, в качестве контрольной с добавлением питательного раствора для биотестирования, для разбавления исследуемых вод. Для подготовки культивационной воды питьевую воду отстаивают в течение 3 — 7 сут (до полного дехлорирования) в бутыли из бесцветного стекла. При отсутствии питьевой воды удовлетворительного качества допускается использование поверхностной пресной или грунтовой воды, отобранной вне зоны влияния источников загрязнения и профильтрованной через фильтр с размером пор 3,5 мкм
В культивационной воде должны отсутствовать органические загрязняющие вещества, хлор, токсические вещества и антагонистические для ряски организмы (синезеленые водоросли, простейшие, многоклеточные); рН быть в пределах 4,5 —7,0, температура (20 ±5) °С.
Для оценки воздействия загрязнителя существует показатель мгновенного отклика популяции — коэффициент роста (г), изменение которого отражает сопротивление среды, т. е. характеризует сумму всех лимитирующих факторов среды, препятствующих реализации репродуктивного потенциала (rmax), который рассчиты вается по контролю. По истечении времени экспозиции в контроле и в каждой концентрации просчитывается общее количество листецов, включая материнские особи и листецы, отделившиеся от них. В контроле и в каждой концентрации на основании полученных результатов рассчитывается коэффициент роста популяции
Проводят оценку токсичности среды по следующим критериям: LС50— летальная концентрация, которая убивает 50% тесторганизмов; ТС — минимальная, или пороговая, концентрация, обеспечивающая рост не более 50 % организмов. В биотестировании по рясковому тесту растения продолжают расти, в связи с чем чаще всего используется показатель ТС50.
НАРУШЕНИЕ ЭМБРИОНАЛЬНОГО МОРФОГЕНЕЗА АМФИБИЙ В УСЛОВИЯХ ТЕХНОГЕННОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ СРЕДЫ
В раннем эмбриогенезе имеются особо чувствительные к повреждающим воздействиям фазы («критические периоды» по П. Г. Светлову), которые коррелируют с инициацией экспрессии генов, определяющих цитодифференцировку, а также связанные с межклеточными взаимодействиями при морфогенезе. Эмбрионы амфибий в критических фазах развития могут служить в качестве биотестов для оценки токсичности, вызванной химическими, электромагнитными или радиоактивными загрязнениями водной среды. Оценка эмбриотоксичности водной среды позволяет заключить, что концентрации поллютантов, считающиеся допустимыми для взрослых животных, являются критическими (вызывающими аномалии развития и смертность) для эмбрионов. Таким образом, методы биомониторинга, основанные на изучении параметров гомеостаза лишь взрослых гидробионтов, недостаточно информативны для прогноза воспроизведения популяций. Возможно, нарушения именно гомеостаза развития являются причиной быстрого исчезновения некоторых внешне благополучных поселений водных животных
Принцип метода оценки эмбриотоксичности воды основан на определении физиологического состояния зародышей амфибий по морфологическим аномалиям и смертности (рис. 24.1). Применение эмбриональных моделей в экспериментах по выявлению действия повреждающих факторов позволяет сделать предположения о механизмах повреждения, используя в качестве биотестов эмбрионы на разных стадиях развития. Предлагаемый способ оценки каче ства воды с помощью амфибий может быть использован в водной токсикологии, при испытаниях побочного действия фармакологических препаратов, пищевых концентратов, кормовых добавок, при испытаниях экологической чистоты технологий, связанных со сбросом сточных вод, при составлении прогноза изменений в популяциях различных водных животных в трансформированных сбросом сточных вод экосистемах. Эмбрионы и молодь водных животных являются уникальной природной моделью для исследования механизмов повреждений, вызванных токсическими агентами. Нарушения субклеточных процессов, возникающие в момент воздействия, в результате развития эмбриона быстро визуализируются и могут быть зарегистрированы морфометрически (появление уродств, изменение скорости или остановка развития). Сочетание обнаружения первичных процессов поражения на субклеточном уровне с морфометрической регистрацией изменений хода развития позволяет получить сведения о механизмах повреждений.
В качестве тест-объекта используются эмбрионы лягушки на стадии закладки нервной системы (нейруляции). Эта фаза развития характеризуется резким повышением уровня окислительного метаболизма и инициацией экспрессии генов, связанных с начальными процессами дифференцировки. Нарушение этих процессов повреждающими воздействиями через двое суток определяется визуально по морфологическим аномалиям осевого зачатка.