21. Перечислить краткосрочные (экспресс) тесты для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ. Предложить тест-объекты, применяемые для этих целей.

Почти все краткосрочные методы, позволяющие получить результаты в течение максимум нескольких недель, основаны на демонстрации хромосомных повреждений, генных мутаций или повреждения ДНК, при этом многие из них являются тестами in vitro (т.е. проводятся на экспериментальных биологических системах без использования целостных живых организмов). Существуют также краткосрочные тесты, в которых лабораторные животные подвергаются воздействию изучаемого химического вещества на протяжении периодов от нескольких часов до недель.

Методы:

6. Метод учета соматических мутаций. Принцип метода оценки мутагенного воздействия факторов основан на учете соматических мутаций в клетках волосков тычинок традесканции.

Этапы работы.

1) После 7-дневного проращивания срезать цветки в чашку Петри и поместить их на 15 мин в холодильник.

2) Тычинки аккуратно отделить и поместить в смесь глицерина и воды на предметное стекло .(Изменение голубой окраски клеток волосков тычиночных нитей на розовую рассматривают как фенотипическое проявление мутации в гетерозиготных по окраске клетках)

7. Тест Эймса.

Для создания тест-системы Эймсом и его сотрудниками были сконструированы специальные штаммы бактерий Salmonella typhimurium, у которых были выделены ауксотрофные по гистидину (незаменимая аминокислота) мутанты his G-46 (мутация замены оснований в his G-гене) и his D-3052 (мутации типа сдвига рамки считывания в гене D).

На основе штаммов сальмонеллы были созданы полуколичественные и количественные тесты для оценки мутагенной активности.

Суть метода Эймса заключается в регистрации способности испытуемого соединения и (или) его метаболитов индуцировать генные мутации у индикаторных микроорганизмов в системе метаболической активности in vitro. Метаболитом выступает печень крысы

8. Анафазный метод

Заключается в подсчитывании нормальных и аномальных анафаз и телофаз в делящихся клетках.

• Вычисляют процент клеток с аберрациями от общего числа клеток, находящихся в этих же фазах деления.

• Метод удобен для анализа растений с большим числом хромосом и/или с плохо изученной морфологией.

9. Метафазный метод.

Учет аберраций хромосом в клетках апикальной меристемы растений

1. Изучение на стадии метафазы.

2.Хромосомы каждого кариотипа обладают постоянством числа, формы и внутренней структуры.

Принцип метода основан на учете образованных хромосомных аберраций в клетках апикальной меристемы растений после обработки семян мутагенами.

10. Микроядерный тест - заключается в количественной регистрации микроядер в клетках, находящихся на стадии телофазы митоза. Как сравнительно простой метод выявления химических веществ, способных индуцировать хромосомные повреждения.

Принцип метода заключается в образовании микроядер вследствие нарушения распределения генетического материала между дочерними клетками (5%) или формирующихся из обломков хромосом (до 95%) при митотическом делении.

• лимфоциты периферической крови сохраняют полученные повреждения в течение длительного времени.

• Микроядра обнаруживаются в лимфоцитах сразу после первого митоза.

• Для построения дозовой зависимости кровь облучают in vitro (или вносят в культуру мутаген) и спустя 72 ч от начала ФГА-стимуляции анализируют.

• Подсчитывают обычно 500 бинуклеарных клеток, используя метод цитокинетического блока (цитохолазина-Б блокирует разделение цитоплазмы).

• Возможность применения теста для биодозиметрии ограничена 2 – 4 годами после облучения.

• Для проявления биологического эффекта в лимфоцитах крови необходимо, вероятно, несколько месяцев, т.ч. существует органические и «снизу».

Тест-объекты:

• Растения (лук 16 n , конские бобы 12 n, кукуруза 20 n,, традесканция 12 n , ячмень 14 n , соя 12 n);