Методичка по иммунологическим препаратам

–Прямой метод фаготипирования основан на выделении из исследуемого штамма бактерий умеренного фага и его идентификации. Метод трудоемок, поэтому используется ограниченно.

–Непрямой метод фаготипирования основан на определении чувствительности микроба к узкоспецифическим (типовым) бактериофагам.

Типовые бактериофаги – это фаги, выделенные из лизогенных культур. При типировании бактерий используют умеренные фаги, обладающие литической активностью в критических тест-разведениях, то есть в максимальных десятикратных разведениях, которые дают сливной лизис гомологичного штамма бактерий на плотной питательной среде. Такие фаги позволяют дифференцировать возбудителей на большое количество фаготипов. Например, у возбудителей брюшного тифа выявлено более 70 фаготипов, у плазмокоагулирующих стафилококков – около 40 фаготипов.

Наборы типовых стафилококковых и брюшнотифозных фагов стандартизированы Международной ассоциацией микробиологов.

–Набор типовых фагов для стафилококка – включает 27 фагов.

Стафилофаги, полученные из лизогенных культур, обозначены цифрой (например, 29, 53, 80 и т. д.), адаптанты – номером и буквой (например, 3а, 53б и др.), стафилококки, как правило, лизируются несколькими типовыми фагами. Фаготип стафилококка обозначается названиями фагов, например: S. aureus, фаготип 29, 3а.

–Брюшнотифозные Vi-бактериофаги, лизирующие штаммы брюшнотифозных бактерий, содержащих Vi-антиген. Vi-I-фаг

лизирует все Vi-штаммы брюшнотифозных бактерий. Vi-II-фаг обладает избирательной активностью, лизируя только те штаммы, на которых пассировался. Из фагов Vi-II получен набор типовых бактериофагов для типирования штаммов сальмонеллы тифи. Типовые Vi-фаги обозначены буквами латинского алфавита и цифрами: А, В1–B3, Е1–Е10, К1, К2, О, М1–М3 и т. п.

Известны типовые фаги кишечных палочек, дизентерийных бактерий, протея, синегнойной палочки, холерного вибриона, сальмонелл, коринебактерий дифтерии, микобактерий.

89

Глава 9. Аллергены

Аллергены – биологические препараты, предназначенные для диагностики аллергических состояний инфекционной и неинфекционной природы (В- или Т-зависимых гиперчувствительных реакций).

Аллергены условно разделяют на:

–инфекционные (бактериальные, грибковые);

–неинфекционные (эпидермальные, инсектные, бытовые, пищевые, растительные, профессиональные и др.).

В зависимости от цели применения различают:

–аллергены для диагностики;

–аллергены для лечения аллергических состояний.

Диагностика и специфическая гипосенсибилизирующая терапия с помощью аллергенов основана на механизме возникновения гиперчувствительных реакций как результат специфического иммунного ответа макроорганизма.

Аллергены применяют для постановки кожных проб. С их помощью можно расшифровать этиологию аллергии, что имеет значение для лечения многих инфекционных и неинфекционных заболеваний, позволяет предупредить опасные аллергические осложнения от применения лекарств и сывороточных препаратов. Покраснение в месте введения аллергена в кожу свидетельствует о состоянии повышенной иммунологической чувствительности (сенсибилизации) организма.

Диагностические кожные пробы для выявления повышенной чувствительности организма к тому или к иному аллергену строго специфичны. Их осуществляют в двух модификациях: в виде прямых проб, когда введение аллергена производят непосредственно пациенту, и непрямых, когда аллерген вводят здоровому лицу, получившему предварительно сыворотку больного. При постановке прямых кожных проб введение аллергена проводят разными способами: путем скарификации, внутрикожной инъекции и аппликации. Обычно внутрикожный метод введения применяют для определения чувствительности к бактериальным аллергенам и аллергенам из грибов с целью диагностики. Методы скарификации, укола и аппликации используют для выявления специфической сенсибилизации к неинфекционным аллергенам.

90

Непрямая проба (реакция Праустница – Кюстнера). История: Праустниц ввел в собственную кожу сыворотку крови Кюстнера, страдающего аллергией к рыбе. Реакция использовалась для диагностики заболеваний, обусловленных ГНТ.

Сыворотку больного с аллергией вводят внутрикожно здоровому, затем туда же внутрикожно вводят аллерген. Сейчас данная реакция применяется редко.

С диагностической целью также используют и провокационные тесты (ингаляционный, конъюктивальный, интраназальный).

9.1. Аллергены для диагностики инфекционных заболеваний

Состояние повышенной чувствительности может развиваться к патогенным, условно-патогенным и непатогенным микроорганизмам. Сенсибилизация организма к патогенным микроорганизмам формируется после перенесенных инфекционных заболеваний или в результате иммунизации. Особенно хорошо выражена аллергическая перестройка после таких инфекций, как бруцеллез, туберкулез, туляремия, сибирская язва, сап, мелиоидоз, орнитоз, актиномикоз, дерматомикозы. В связи с этим для диагностики таких заболеваний применяют постановку кожных аллергических проб с аллергенами, носящими соответственно названия – бруцеллин, туберкулин, тулярин, антраксин и др.

–Бруцеллин – фильтрат трехнедельной убитой нагреванием бульонной культуры 3 видов бруцелл: овечьего, коровьего, свиного. Препарат применяют для диагностики (проба Бюрне) клинической и бессимптомной форм бруцеллеза в сочетании с серологическими реакциями. Бруцеллин (0,1 мл) вводят строго внутрикожно в ладонную поверхность предплечья. Реакцию считают диагностической, если через 24–48 часов в месте введения отмечают отечность и красноту диаметром не менее 2–3 см. В этой же области выражена болезненность. Аллергическая проба может быть положительной после вакцинации людей живой бруцеллезной вакциной, а также – в течение нескольких лет у переболевших бруцеллезом людей.

–Тулярин – взвесь убитых нагреванием при 70 в течение 1 часа туляремийных бактерий (вакцинного штамма) в физиологическом растворе с добавлением 3 %-ного глицерина. В зависимости от целей применения выпускают две разновидности препарата.

91

Тулярин для внутрикожной пробы – 1 мл препарата содержит 500 млн микробных тел. Предназначен для внутрикожного введения с целью ранней (проба положительная уже на 3–5-й день болезни) и ретроспективной диагностики туляремии.

Тулярин для накожной пробы – 1 мл препарата содержит 10 млрд микробных тел. Препарат применяют для определения иммунитета у привитых людей. Для нанесения препарата используют скарификационный метод. Одну каплю тулярина наносят на предварительно протертую спиртом кожу наружной поверхности плеча. Затем стерильным оспопрививателем делают 2 параллельные насечки длиной 8–10 мм на расстоянии 4–5 мм друг от друга и втирают аллерген плоской стороной оспопрививателя.

Учет результатов при постановке обеих кожных проб одинаков: реакцию считают положительной, если через 48 часов возникает гиперемия и отек диаметром более 0,5 см.

–Дизентерин – фракция антигена, извлекаемая путем кислотного гидролиза при 120 из дизентерийных шигелл Флекснера или Зонне.

Применяют для диагностики дизентерии, при которой у больных специфическая сенсибилизация развивается с 3–4-го дня острой формы заболевания. Специфичность кожной пробы проявляется у 75–80 % больных. У отдельных лиц (в 20–25 % случаев) положительные реакции на аллерген возникают при сальмонеллезных и других заболеваниях недизентерийной этиологии.

Удетей в возрасте до года реакция на дизентерин может быть отрицательной из-за низкой реактивности.

Препарат вводят строго внутрикожно. Оценку результата проводят через 24 часа. Пробу считают диагностической при наличии гиперемии и инфильтрата от 10 до 20 мм.

–Туберкулин (очищенный сухой) ППД – белковый дериват туберкулина, извлеченный из фильтрата культуры туберкулезной палочки путем осаждения. Стандарт очищенного туберкулина содержит в 1 мл 50 000 ТЕ (туберкулиновая единица) и рассчитан на

100–1 000 доз в	зависимости от		разведения. Разводят		перед
употреблением	в	стандартном	растворителе	–	1 мл
карболинизированного хлорида натрия.

– Очищенный туберкулин в стандартном разведении (ППД-Л) –

препарат выпускают в форме готовых к употреблению растворов туберкулина в растворителе, содержащем 0,005 % твина-80 для

92

стабилизации биологической активности и 0,01 % хинозола – для сохранения стерильности. Биологическая активность 0,1 мл препарата соответствует 2 ТЕ, то есть одной дозе. Туберкулин в стандартном разведении применяют только для постановки внутрикожной пробы Манту, которую ставят по назначению врача специально обученная медсестра, имеющая документ – допуск к проведению туберкулинодиагностики.

Пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л применяют для раннего выявления туберкулеза у детей с 1 года, подростков; выявления первичного инфицирования по «виражу» туберкулиновой пробы, а также для определения гиперергических реакций у давно вакцинированных лиц.

Пробу применяют для отбора взрослых и детей, подлежащих ревакцинации против туберкулеза, и для оценки эффективности вакцинации.

Если размер инфильтрата до 1 мм – то реакция Манту отрицательная. Гиперергическими реакциями у детей и подростков считают такие, при которых диаметр инфильтрата достигает 17 мм и более, у взрослых – 21 мм и более. Лица с гиперергической реакцией нуждаются в наблюдении фтизиатра.

–Антраксин – представляет собой белково-полисахаридно- нуклеиновый комплекс, полученный путем гидролиза из вегетативных форм вакцинного штамма сибиреязвенного микроба. Применяют для диагностики сибирской язвы и выявления сенсибилизации у лиц, иммунизированных или перенесших заболевание. Внутрикожно в ладонную поверхность предплечья вводят 0,5 мл препарата. Для контроля в кожу другой руки вводят такое же количество физиологического раствора. Положительной считают реакцию при наличии в месте введения аллергена гиперемии

иинфильтрата диаметром более 8 мм.

–Пестин – полипептидно-полисахаридный комплекс, извлеченный из вакцинного штамма (Е) чумного микроба путем кислотного гидролиза и последующего осаждения спиртом. Применяют для определения иммуноаллергической перестройки организма у вакцинированных лиц. Вводят внутрикожно.

93

9.2. Аллергены для диагностики и лечения аллергических заболеваний

Препараты этой группы предназначены для проведения десенсибилизации.

Десенсибилизация – один из методов лечения аллергических заболеваний, при котором подкожно вводят возрастающие дозы антигена, в результате чего уменьшается иммунологическая реактивность.

Механизм снижения иммунологической реактивности окончательно не изучен, возможно, образуются блокирующие антитела к антигену (связывают антиген, но не вызывают аллергии), снижается уровень IgE и другие механизмы.

9.2.1. Аллергены бактериальные

Аллергены условно-патогенных микробов являются важным, а иногда и ведущим звеном в патогенезе различных хронических заболеваний дыхательных путей, носоглотки, желудочно-кишечного тракта, почек, печени, кожи, суставов. Перед десенсибилизацией собирают анамнез (выявляют причинные аллергены). Для установления вида аллергизирующих микроорганизмов применяют постановку кожных или провокационных проб с аллергенами гемолитического стрептококка, стафилококков, пневмококка, кишечной палочки, протеев, синегнойной палочки и др. Пробы должны согласовываться с данными анамнеза, в противном случае десенсибилизацию не проводят. Положительный результат аллергодиагностики помогает начать этиотропное лечение. Одновременно десенсибилизацию проводят не более чем к 3–4 аллергенам.

– Бактериальные аллергены нативные из культур золотистого и эпидермального стафилококков и гемолитического стрептококка – гомогенная жидкость, содержащая в 1 мл 1 млрд инактивированных формалином микробных клеток с продуктами их метаболизма. Препараты применяют для лечения больных, аллергическому заболеванию которых предшествовали различные инфекционные и локальные воспалительные процессы с затянувшимся течением. Диагностические пробы ставят с этими же аллергенами. Препараты вводят внутрикожно в дозе 0,1 мл. Через 15–20 минут производят

94

учет местной реакции немедленного типа, а спустя 24 часа – реакции замедленного типа.

– Бактериальные аллергены очищенные выпускают двух видов:

из гемолитического стрептококка группы А и культуры золотистого стафилококка. Биологически активными компонентами этих препаратов служат извлеченные из микроорганизмов и осажденные трихлоруксусной кислотой и спиртом фракции преимущественно белкового состава (до 83 %), а также примеси углеводов (до 7 %) и нуклеиновых кислот (до 10 %). Дозировку производят по концентрации белка. Очищенные аллергены не содержат консерванта и поэтому должны быть использованы в течение первых четырех часов после вскрытия ампулы. Препараты вводят внутрикожно и применяют для диагностики аллергических заболеваний.

95

ЛИТЕРАТУРА

1.Биологические и иммунологические свойства штамма Chlamidia trachomatis МТ-2А (серовар D) и его использование для разработки экспериментальной инактивированной вакцины [Текст] / Н. Н. Полищук, Л. В. Рубаник, Н. Н. Капитулец и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. – № 3. – С. 39–44.

2.Влияние бесклеточной стафилококковой вакцины «Стафиловак» на некоторые показатели иммунной системы мышей [Текст] / О. М. Кузьменко, Н. К. Ахматова, И. М. Грубер и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2009. –

№3. – С. 32–37.

3.Влияние пробиотических энтерококков на рост Streptococcus

agalactiae [Текст] / Е. И. Ермоленко, А. Ю. Черныш, И. В. Марцинковская и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2007. – № 5. – С. 73–77.

4. Выбор пробиотика для рациональной терапии клебсиеллезной инфекции у детей [Текст] / Н. В. Гончар, Л. В. Березина, О. В. Тихомирова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2009. – № 2. – С. 85–89.

5. Выделение и изучение перспективного пробиотического штамма спорообразующих бактерий рода Bacillus [Текст] / О. М. Гринько, В. В. Зверев, А. А. Калошин и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2009. – № 3. – С. 85–89.

6.ДНК-вакцины: современное состояние и перспективы [Текст] / А. М. Савилова, Д. Ю. Трофимов, Л. П. Алексеев и др. // Иммунология. – 2007. – № 2. – С. 114–123.

7.Диагностическое значение Ig G, Ig A, Ig M к антигенам

Bordetella pertussis у больных коклюшем [Текст] / Е. М. Зайцев, И. Л. Мазурова, М. С. Петрова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. – № 6. – С. 23–26.

8. Гранулированная лечебная форма аллергена из клещей рода Dermatophacoides [Текст] / В. М. Бержец, Е. А. Коренева, Н. С. Петрова // Биопрепараты. – 2008. – № 3 (31). – С. 6–10.

9. Заплутанов, В. А. Цитофлафин [Текст] / В. А. Заплутанов. – СПб: Тактик-Студио, 2008. – 168 с.

96

10.Интерфероногенная активность вакцины «Гриппол» [Текст] / А. А. Иванов, А. А. Бабаянц, Ю. Б. Дешевой и др. // Иммунология. – 2008. – № 5. – С. 278–280.

11.Интраназальная форма иммуноглобулиновых препаратов –

перспективы использования в медицинской практике [Текст] / Л. И. Новикова, В. А. Алешкин, Н. В. Борисова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. – № 5. –

С. 29–35.
12. Иммунокоррегирующая	терапия	инфекционно-

воспалительных заболеваний женской половой сферы: практ. пособие [Текст] / Под ред. Э. К. Айламазяна. – СПб: Тактик-Студио, 2007. – 56 с.

13. Иммунопрофилактика-2007 [Текст] / Под ред. В. К. Таточенко, Н. А. Озерецковского. – М.: ИПК «Континентпресс», 2007. – 192 с.

14. Использование методов обратной генетики для получения рекомбинантных штаммов вируса гриппа, пригодных в качестве живых аттенуированных вакцин [Текст] / В. А. Меркулов, В. Н. Лебедев, Т. М. Плеханова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2009. – № 2. – С. 111–117.

15.Клиническое исследование новой инактивированной гриппозной вакцины «Грифор» [Текст] / В. В. Зверев, О. И. Киселев, С. А. Коровкин и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2009. – № 2. – С. 35–40.

16.Клинико-иммунологический эффект интерферона при гриппе [Текст] / Л. В. Волкова, Н. Н. Воробьева, А. Л. Бондаренко и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2007. – № 6. – С. 50–53.

17.Лазаренко, Л. Л. Линимент циклоферона (меглумина акридонацета) в клинической практике [Текст] / Л. Л. Лазаренко. – СПб: Тактик-Студио, 2007. – 80 с.

18.Лусс, Л. В., Костинов, М. П. Проблемы терапии и профилактики гриппа: мифы об опасностях поствакцинальных реакций, результаты анализа поствакцинальных осложнений после прививки против гриппа у детей Пермского края [Текст] / Л. В. Лусс, М. П. Костинов // Иммунология. – 2009. – № 1. – С. 13–21.

19.Марданич, С. Г., Асратян, А. А. Иммуноферментные тестсистемы для диагностики цитомегаловирусной инфекции [Текст] /

97

С. Г. Марданич,	А. А. Асратян		//	Журн.	микробиологии,
эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008.				– № 3. – С. 98–100.
20. Микробиологическая		характеристика			нового	штамма
Lactococcus lactis	subp. lactis		К-205 [Текст]		/ Л. Г. Стоянова,
Т. Д. Сультимова, А. Р. Строева и др. //				Журн. микробиологии,
эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008.				– № 1. – С. 60–63.
21. Медуницын, Н.В.		Вакцинация		и аллергия		[Текст] /

Н. В. Медуницын // Биопрепараты. – 2008. – № 3. – С. 11–14.

22.Отечественная бесклеточная коклюшная вакцина [Текст] / Н. С. Захарова, М. В. Брицина, Н. У. Мерцалова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. – № 1. – С. 35–41.

23.Оценка чувствительности коммерческих тест-систем для иммунодетекции HBs Ag по их способности выявлять HBs Ag –

мутанты вируса гепатита В / А. И. Баженов, М. В. Коноплева, А. А. Фельдшерова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. – № 3. – С. 48–53.

24.Оценка иммунитета и аллергии при вакцинации людей сухой комбинированной сибиреязвенной вакциной [Текст] / А. Н. Шевцов, И. В. Дармов, Г. А. Зайцева и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2007. – № 5. – С. 51–53.

25.Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления Mycoplasma pneumoniae [Текст] / Н. Н. Шершнева, Л. Г. Горина // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. –

№4. – С. 83–86.

26.Разработка профилактической и терапевтической вакцины против вируса папилломы человека. Сообщение 1. Синтез и иммунологическая активность рекомбинантных белков и пептидов из

вируса папилломы человека серотипов 16, 18 и 31 [Текст] / Р. В. Петров, М. Р. Хаитов, А. В. Некрасов и др. // Иммунология. – 2007. – № 6. – Т. 28. – С. 342–352.

27.Разработка экспериментальной тест-системы на основе иммуночипа для серодиагностики сифилиса [Текст] / М. А. Смердова, М. Л. Маркелов, А. Е. Гущин и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2008. – № 6. – С. 54–58.

28.Сравнительное изучение экспериментальной конъюгированной и комбинированной вакцин против стрептококков группы В [Текст] / М. А. Дитина, Л. Ф. Мерингова, Г. Ф. Леонтьева //

98