2009.-Byelorussian Pharmacopoeia_Volume 3

2.4.8. Тяжелые металлы

31

каждой аминокислоты делят на рассчитанное

среднее содержание белка.

Относительную ошибку определения ами-

нокислотного состава рассчитывают в процентах по формуле:

100 m , ms

где:

m — экспериментально установленное количество аминокислот, в наномоль на аминокис-

лотный остаток;

ms — известное значение остатков для этой аминокислоты.

Средняя величина относительной ошибки

определения аминокислотного состава является средним значением абсолютных величин отно-

сительных ошибок определения каждой амино-

кислоты, обычно кроме триптофана и цистеина.

Средняя величина относительной ошибки определения аминокислотного состава может дать

важную информацию об устойчивости анализа во времени. Соответствие найденного аминокислотного состава образца белка и известного состава может служить подтверждением подлинности и чистоты белка в испытуемом образце.

2.4. ИСПЫТАНИЯ НА ПРЕДЕЛЬНОЕ

СОДЕРЖАНИЕ ПРИМЕСЕЙ

2.4.8. ТЯЖЕЛЫЕ МЕТАЛЛЫ

Все описанные ниже методы требуют ис-

пользования тиоацетамидного реактива Р. Допускается использование раствора натрия сульфида Р1 вместо тиоацетамидного реактива Р. Если предписанная в частной статье

методика испытания разработана с использова-

нием тиоацетамидного реактива Р, но вместо него используется раствор натрия сульфида Р1

(0,1 мл), то для методов А и В необходимо вве-

дение проверочного раствора, приготовленно-

го из такого же количества испытуемого образ-

ца, что используется при приготовлении испы-

туемого раствора, к которому прибавляют такой же объем эталонного раствора свинца, что и при

приготовлении раствора сравнения. Испытание

считают недействительным, если окраска прове-

рочного раствора менее интенсивная, чем окра-

ска раствора сравнения.

МЕТОД А

Испытуемый раствор. 12 мл указанного в частной статье водного раствора испытуемого образца.

Раствор сравнения (эталон). Смесь из 10 мл эталонного раствора свинца (1 ppm Pb)

Р или эталонного раствора свинца (2 ppm Pb) Р, указанного в частной статье, и 2 мл указанно-

го в частной статье водного раствора испытуемого образца.

Контрольный раствор. Смесь из 10 мл

воды Р и 2 мл указанного в частной статье вод-

ного раствора испытуемого образца.

К каждому раствору прибавляют по 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают.

Полученные растворы прибавляют к порциям

по 1,2 мл тиоацетамидного реактива Р и не-

медленно перемешивают. Сравнение растворов проводят через 2 мин.

Испытание считают недействительным,

если раствор сравнения не имеет светло-

коричневой окраски в сравнении с контрольным

раствором.

Испытуемый образец выдерживает испытание, если окраска испытуемого раствора не ин-

тенсивнее окраски эталона.

Если невозможно дать однозначную оценку

результату испытания, растворы фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 3 мкм; рисунок 2.4.8.-1, без использования предфильтра). Давление поршня шприца должно быть умеренным и постоянным для обеспечения медленного и равномерного фильтрования. Сравнивают окраски мембранных фильтров, полученные в опытах с разными растворами.

МЕТОД В

Испытуемый раствор. 12 мл указанного в частной статье раствора, приготовленного с использованием органического растворителя, содержащего минимальное количество воды (например, диоксан или ацетон, содержащие по 15% воды).

Раствор сравнения (эталон). Смесь из 10 мл эталонного раствора свинца (1 ppm или 2 ppm Pb), указанного в частной статье, и 2 мл указанного в частной статье раствора испытуемого образца в органическом растворителе. Эталонный раствор свинца (1 ppm или 2 ppm Pb) готовят путем разведения эталонного раствора свинца (100 ppm Pb) органическим растворителем, применяемым для растворения испытуемого образца.

Контрольный раствор. Смесь из 10 мл растворителя, применяемого для растворения испытуемого образца, и 2 мл указанного в частной статье раствора испытуемого образца в органическом растворителе.

К каждому раствору прибавляют по 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают. Полученные растворы прибавляют к порциям по 1,2 мл тиоацетамидного реактива Р и не-

медленно перемешивают. Сравнение растворов проводят через 2 мин.

Испытание считают недействительным, если раствор сравнения не имеет светлокоричневой окраски в сравнении с контрольным раствором.

32	Государственная фармакопея Республики Беларусь

Испытуемый образец выдерживает испыта-

ние, если окраска испытуемого раствора не интенсивнее окраски эталона.

Если невозможно дать однозначную оценку результату испытания, растворы фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 3 мкм; рисунок 2.4.8.-1, без использования предфиль-

тра). Давление поршня шприца должно быть умеренным и постоянным для обеспечения медленного и равномерного фильтрования. Сравни-

вают окраски мембранных фильтров, полученные в опытах с разными растворами.

МЕТОД С

Испытуемый раствор. В кварцевый тигель

помещают 4 мл раствора 250 г/л магния сульфата Р в кислоте серной разведенной Р и прибавляют количество испытуемого образца, указанное в частной статье (не более 2 г). Перемешивают тонкой стеклянной палочкой и осторожно нагревают. Если смесь жидкая, осторожно выпаривают на водяной бане до сухого остатка, затем постепенно нагревают до обугливания

и продолжают нагревание до получения почти белого или, в крайнем случае, сероватого остатка. Сжигание проводят при температуре не более 800°С. Оставляют до охлаждения, затем остаток в тигле смачивают несколькими каплями кислоты серной разведенной Р. Выпаривают до сухого

остатка, вновь сжигают и оставляют до охлаждения. Общее время сжигания не должно превышать 2 ч. Остаток из тигля количественно перено-

сят в пробирку двумя порциями кислоты хлористоводородной разведенной Р, по 5 мл каждая. Прибавляют 0,1 мл раствора фенолфталеина Р, затем нейтрализуют раствором аммиака концентрированным Р до появления розовой окра-

ски. Охлаждают, прибавляют кислоту уксусную ледяную Р до обесцвечивания раствора и прибавляют еще 0,5 мл кислоты уксусной ледяной Р. При необходимости фильтруют и промывают фильтр водой Р. Доводят объем раствора водой Р до 20 мл и перемешивают.

Раствор сравнения (эталон). Готовят аналогично испытуемому раствору, используя указанное в частной статье количество эталонного раствора свинца (10 ррт Рb) Р вместо испы-

туемого образца. К 10 мл полученного раствора

прибавляют 2 мл испытуемого раствора.

Проверочный раствор. Готовят аналогично испытуемому раствору, прибавляя к испытуемому образцу указанный в частной статье объем

эталонного раствора свинца (10 ррт Рb) Р для приготовления раствора сравнения. К 10 мл полученного раствора прибавляют 2 мл испытуе-

мого раствора.

Контрольный раствор. Смесь из 10 мл

воды Р и 2 мл испытуемого раствора.

К 12 мл каждого раствора прибавляют по 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают. Полученные растворы прибавляют к порциям по 1,2 мл тиоацетамидного реактива Р и

немедленно перемешивают. Сравнение раство-

ров проводят через 2 мин.

Испытание считают недействительным, если раствор сравнения не имеет светлокоричневой окраски в сравнении с контрольным раствором или если окраска проверочного раствора менее интенсивная, чем окраска раствора

сравнения.

Испытуемый образец выдерживает испыта-

ние, если коричневая окраска испытуемого раствора не интенсивнее окраски эталона.

Если невозможно дать однозначную оценку

результату испытания, растворы фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 3 мкм;

рисунок 2.4.8.-1, без использования предфиль-

тра). Давление поршня шприца должно быть умеренным и постоянным для обеспечения мед-

ленного и равномерного фильтрования. Сравни-

вают окраски мембранных фильтров, полученные в опытах с разными растворами.

МЕТОД D

Испытуемый раствор. Количество испыту-

емого образца, указанное в частной статье, помещают в кварцевый тигель и тщательно смешивают с 0,5 г магния оксида Р1. Сжигают при

слабом красном калении (# около 600°С) до

образования однородного остатка белого или серовато-белого цвета. Если после 30 мин сжигания смесь остается окрашенной, тигель остав-

ляют до охлаждения, содержимое перемеши-

вают тонкой стеклянной палочкой и повторяют сжигание. При необходимости операцию повторяют. Нагревают при температуре 800°С около

1 ч. Остаток из тигля количественно переносят в

пробирку двумя порциями по 5 мл смеси равных объемов раствора кислоты хлористоводородной Р1 и воды Р. Прибавляют 0,1 мл раствора фенолфталеина Р, затем подщелачивают раствором аммиака концентрированным Р до появления розовой окраски. Охлаждают, подкисляют кислотой уксусной ледяной Р до обесцвечивания раствора и прибавляют еще 0,5 мл кислоты уксусной ледяной Р. При необходимости

фильтруют и промывают фильтр водой Р. Дово-

дят объем раствора водой Р до 20 мл и переме-

шивают.

Раствор сравнения (эталон). Готовят ана-

логично испытуемому раствору, используя ука-

занное в частной статье количество эталонного раствора свинца (10 ррт Рb) Р вместо испы-

туемого образца, и нагревая при температуре от

100°С до 105°С. К 10 мл полученного раствора

прибавляют 2 мл испытуемого раствора.

Проверочный раствор. Готовят аналогично

испытуемому раствору, прибавляя к испытуемо-

му образцу указанный в частной статье объем

эталонного раствора свинца (10 ррт Рb) Р для приготовления раствора сравнения и нагревая при температуре от 100°С до 105°С. К 10 мл полученного раствора прибавляют 2 мл испытуе-

мого раствора.

2.4.8. Тяжелые металлы

33

Контрольный раствор. Смесь из 10 мл

воды Р и 2 мл испытуемого раствора.

К 12 мл каждого раствора прибавляют по

2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают. Полученные растворы прибавляют к порциям по 1,2 мл тиоацетамидного реактива Р и

немедленно перемешивают. Сравнение раство-

ров проводят через 2 мин.

Испытание считают недействительным, если раствор сравнения не имеет светло-

коричневой окраски в сравнении с контрольным

раствором или если окраска проверочного раст-

вора менее интенсивная, чем окраска раствора сравнения.

Испытуемый образец выдерживает испыта-

ние, если коричневая окраска испытуемого раст-

вора не интенсивнее окраски эталона.

Если невозможно дать однозначную оценку результату испытания, растворы фильтруют

через мембранный фильтр (размер пор 3 мкм;

рисунок 2.4.8.-1, без использования предфиль-

тра). Давление поршня шприца должно быть умеренным и постоянным для обеспечения мед-

ленного и равномерного фильтрования. Сравнивают окраски мембранных фильтров, полученные в опытах с разными растворами.

МЕТОД Е

Испытуемый раствор. Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, растворяют в 30 мл или в указанном объеме воды Р.

Раствор сравнения (эталон). Количество эталонного раствора свинца (1 ррт Рb) Р, указанное в частной статье, разводят водой Р до объема испытуемого раствора.

В держатель устройства для стерильного фильтрования, на подложку которого помещен

мембранный фильтр (размер пор 3 мкм), а над

ним — предфильтр (рисунок 2.4.8.-1), устанавли-

вают шприц вместимостью 50 мл без поршня.

Испытуемый раствор помещают в шприц и вводят поршень, развивая такое давление,

чтобы профильтровался весь раствор. Откры-

вают держатель, вынимают предфильтр и проверяют отсутствие примесей на мембранном

фильтре. В случае обнаружения примесей его

заменяют другим мембранным фильтром и опе-

рацию повторяют в тех же условиях.

К фильтрату или к указанному в частной

статье объему фильтрата прибавляют 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р и перемешивают.

Полученные растворы прибавляют к порциям

по 1,2 мл реактива тиоацетамида Р и перемешивают, оставляют на 10 мин и вновь фильтру-

ют, как описано выше, но расположение филь-

тров изменяют таким образом, чтобы жидкость

проходила вначале через мембранный фильтр,

а затем — через предфильтр (рисунок 2.4.8.-1).

Давление поршня шприца должно быть умерен-

ным и постоянным для обеспечения медленно-

го и равномерного фильтрования. После окончания фильтрования держатель открывают, мембранный фильтр вынимают и высушивают при

помощи фильтровальной бумаги.

Параллельно проводят аналогичное испытание с раствором сравнения.

Окраска мембранного фильтра, полученная в опыте с испытуемым раствором, должна быть

не интенсивнее окраски мембранного фильтра,

полученной в опыте с раствором сравнения.

Рисунок 2.4.8.-1. Прибор для испытания на соли тяжелых металлов. (Размеры указаны в миллиметрах)

34	Государственная фармакопея Республики Беларусь
МЕТОД F		ремешивают. Доводят объем раствора водой
Испытуемый раствор. Количество испы-		Р до 50 мл и перемешивают.
туемого образца, указанное в частной статье,		Раствор сравнения (эталон). Готовят па-
помещают в чистую сухую колбу Кьельдаля		раллельно с теми же количествами реактивов и
вместимостью 100 мл (в случае интенсивного		в тех же условиях, используя вместо испытуе-
пенообразования следует использовать колбу		мого образца указанный в частной статье объем
вместимостью 300 мл). Колбу закрепляют под		эталонного раствора свинца (10 ррт Рb) Р.
углом 45° и, если испытуемый образец пред-		Проверочный раствор. Готовят аналогич-
ставляет собой твердое вещество, прибавля-		но испытуемому раствору, прибавляя к испы-
ют смесь из 8 мл кислоты серной Р и 10 мл		туемому образцу указанный в частной статье
кислоты азотной Р в количестве, достаточ-		объем эталонного раствора свинца (10 ррт
ном для полного смачивания испытуемого об-		Рb) Р для приготовления раствора сравнения.
разца; если испытуемый образец представ-		Контрольный раствор. Готовят аналогич-
ляет собой жидкость, прибавляют несколько		но испытуемому раствору, но без прибавления
миллилитров смеси из 8 мл кислоты серной		испытуемого образца.
Р и 10 мл кислоты азотной Р. Осторожно на-		Просматривают растворы вертикально на-
гревают до начала реакции. После прекра-		против белого фона.
щения реакции прибавляют дополнительные		Через 2 мин коричневая окраска испыту-
порции этой же смеси кислот, нагревая после		емого раствора должна быть не интенсивнее
каждого	прибавления. Операцию повторяют	окраски эталона.
до тех пор, пока объем прибавленной смеси		Испытание		считают	недействительным,
кислот не достигнет 18 мл. Увеличивают тем-		если раствор сравнения не имеет светло-
пературу нагревания и осторожно кипятят до		коричневой окраски в сравнении с контроль-
потемнения раствора. Охлаждают, прибавля-		ным раствором или если окраска проверочно-
ют 2 мл кислоты азотной Р и вновь нагре-		го раствора менее интенсивная, чем окраска
вают до потемнения раствора. Продолжают		раствора сравнения.
прибавление кислоты азотной Р с последую-		Если	невозможно		дать	однозначную
щим нагреванием до тех пор, пока раствор не		оценку результату испытания, растворы филь-
перестанет темнеть, затем сильно нагревают		труют через мембранный фильтр (размер
до появления плотных белых паров. Охлаж-		пор 3 мкм; рисунок 2.4.8.-1, без использова-
дают, осторожно прибавляют 5 мл воды Р, ки-		ния предфильтра). Давление поршня шприца
пятят с предосторожностями до появления		должно быть умеренным и постоянным для
плотных белых паров и продолжают нагрева-		обеспечения медленного и				равномерного
ние до получения остатка объемом от 2 мл до		фильтрования. Сравнивают окраски мембран-
3 мл. Охлаждают, осторожно прибавляют 5 мл		ных фильтров, полученные в опытах с разны-
воды Р и определяют окраску раствора. Если		ми растворами.
раствор имеет желтую окраску, прибавляют по		МЕТОД G
каплям 1 мл раствора водорода пероксида
концентрированного Р, вновь нагревают до		ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ: при				использовании
появления плотных белых паров и продолжа-		сосудов для сжигания при высоком давлении не-
ют нагревание до получения остатка объемом		обходимо соблюдать требования по технике
от 2 мл до 3 мл. Если окраска раствора все		безопасности, указанные производителем обо-
еще остается желтой, повторно прибавляют		рудования. Циклы сжигания должны соответ-
5 мл воды Р и 1 мл раствора водорода перок-		ствовать	типу	используемой		микроволновой
сида концентрированного Р до обесцвечива-		печи (например, микроволновые печи с контро-
ния раствора. Охлаждают и осторожно разво-		лем мощности, печи с контролем температу-
дят водой Р. Ополаскивая колбу водой Р, по-		ры или печи с контролем давления). Кроме того,
лученный раствор переносят в пробирку вме-		циклы сжигания должны соответствовать ин-
стимостью 50 мл и доводят до объема 25 мл		струкции по эксплуатации используемого обо-
этим же растворителем.		рудования. Циклы сжигания применяют в случае
Доводят рН раствора до 3,0—4,0 рас-		образования прозрачных растворов.
твором	аммиака концентрированным Р1	Испытуемый раствор. Количество испыту-
(при приближении к указанному значению		емого образца, указанное в частной статье (не
рН можно применять раствор аммиака раз-		более 0,5 г), помещают в подходящий чистый
веденный Р1), используя в качестве внешне-		лабораторный стакан с магнитной мешалкой,
го индикатора индикаторную бумагу, действу-		прибавляют последовательно 2,7 мл кислоты
ющую в узком интервале рН, затем доводят		серной Р, 3,3 мл кислоты азотной Р и 2,0 мл
объем раствора водой Р до 40 мл и перемеши-		раствора водорода пероксида концентрирован-
вают. Прибавляют 2 мл буферного раствора		ного Р, прибавляя каждый реактив после завер-
рН 3,5 Р и перемешивают. Полученные рас-		шения реакции между испытуемым образцом и
творы прибавляют к порциям по 1,2 мл тио-		предыдущим реактивом. Полученную смесь ко-
ацетамидного реактива Р и немедленно пе-		личественно переносят в сухой, устойчивый к

2.4.30. Этиленгликоль и диэтиленгликоль в этоксилированных субстанциях

35

высокому давлению сосуд для сжигания (фтор-

содержащий полимер или кварцевое стекло). Раствор сравнения. Готовят аналогично ис-

пытуемому раствору, используя вместо испытуемого образца указанный в частной статье объем

эталонного раствора свинца (10 ррт Рb) Р. Проверочный раствор. Готовят аналогично

испытуемому раствору, прибавляя к испытуемому образцу указанный в частной статье объем

эталонного раствора свинца (10 ррт Рb) Р для приготовления раствора сравнения.

Контрольный раствор. Готовят аналогично

испытуемому раствору, но без прибавления испытуемого образца.

Сосуды укупоривают и помещают в лабораторную микроволновую печь. Процедуру сжига-

ния проводят, последовательно используя две

подходящие программы. В зависимости от типа

используемой микроволновой печи (следят за давлением, температурой или мощностью) раз-

рабатывают многоступенчатые программы сжи-

гания для адекватного контроля над протеканием реакции. После завершения первой программы оставляют сосуды до охлаждения перед их вскрытием. Затем в каждый сосуд прибавляют по 2,0 мл раствора водорода пероксида концентрированного Р и сжигают, используя вторую программу. После завершения второй программы оставляют сосуды до охлаждения перед их вскрытием. При необходимости для получения прозрачного раствора повторно прибавляют

раствор водорода пероксида концентрированного Р и проводят вторую программу сжигания.

Охлаждают и осторожно разводят водой Р. Ополаскивая сосуд водой Р, полученный раст-

вор переносят в колбу и доводят до объема

25 мл этим же растворителем.

Доводят рН растворов до 3,0—4,0 раствором аммиака концентрированным Р1 (при приближе-

нии к указанному значению рН можно применять

раствор аммиака разведенный Р1), используя

в качестве внешнего индикатора индикаторную бумагу, действующую в узком интервале рН. Для предотвращения нагревания растворов использу-

ют ледяную баню и магнитную мешалку. Доводят объем растворов до 40 мл водой Р и перемешива-

ют. Прибавляют 2 мл буферного раствора рН 3,5 Р перемешивают. Полученные растворы прибав-

ляют к порциям по 1,2 мл тиоацетамидного реактива Р и немедленно перемешивают. Доводят объем растворов водой Р до 50 мл, перемешива-

ют и выдерживают в течение 2 мин.

Растворы фильтруют через мембранный

фильтр (размер пор 3 мкм; рисунок 2.4.8.-1, без

использования предфильтра). Давление поршня

шприца должно быть умеренным и постоянным

для обеспечения медленного и равномерного фильтрования. Сравнивают окраски мембранных фильтров, полученные в опытах с разными растворами.

Коричневая окраска мембранного фильтра,

полученная в опыте с испытуемым раствором,

должна быть не интенсивнее окраски мембран-

ного фильтра, полученной в опыте с раствором

сравнения.

Испытание считают недействительным, если на фильтре, полученном в опыте с раствором сравнения, отсутствует коричневая окраска в сравнении с фильтром, полученным в опыте с

контрольным раствором, или если окраска фильтра, полученного в опыте с проверочным раствором, менее интенсивная, чем окраска фильтра,

полученного в опыте с раствором сравнения.

2.4.30. ЭТИЛЕНГЛИКОЛЬ И ДИЭТИЛЕНГЛИКОЛЬ В ЭТОКСИЛИРОВАННЫХ СУБСТАНЦИЯХ

В зависимости от процесса производства этоксилированые субстанции могут содержать различные количества этиленгликоля и диэтиленгликоля. Этот метод может быть использован для количественного определения данных примесей, в том числе и в следующих поверхностно-активных веществах: макроголглицерина рицинолеате, макроголглицерина гидроксистеарате, макрогол 15 гидроксистеарате, ноноксиноле 9 и макрогола цетостеариловом эфире.

Газовая хроматография (2.2.28).

Раствор внутреннего стандарта. 30,0 мг 1,2-пентандиола Р растворяют в ацетоне Р и

доводят до объема 30,0 мл этим же растворителем. 1,0 мл полученного раствора доводят ацетоном Р до объема 20,0 мл.

Испытуемый раствор. 0,500 г испытуемо-

го образца растворяют в растворе внутреннего стандарта и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 30,0 мг этиленгликоля Р смешивают с ацетоном Р и доводят до

объема 100,0 мл этим же растворителем. 1,0 мл полученного раствора доводят раствором внутреннего стандарта до объема 10,0 мл.

Раствор сравнения (b). Раствор диэтиленгликоля Р с концентрацией, соответствующей

предписанному предельному содержанию, го-

товят с использованием тех же растворителей,

которые использовали при приготовлении раствора сравнения (а).

Условия хроматографирования:

–колонка капиллярная кварцевая длиной

30 м и внутренним диаметром 0,53 мм;

–неподвижная фаза: макрогол 20 000 Р

(толщина слоя 1 мкм);

–детектор: пламенно-ионизационный;

–газ-носитель: гелий для хроматографии Р;

–скорость газа-носителя: 10 мл/мин;

–деление потока: 1:3;

–объем вводимой пробы: 2 мкл;

–температура:

36	Государственная фармакопея Республики Беларусь

	Время (мин)	Температура (°С)
Колонка	0—40	80 → 200
	40—45	200 → 230
	45—65	230
Блок
ввода		250
проб
Детектор		250

Относительное удерживание (по отношению к 1,2-пентандиолу; время удержива-

ния — около 19 мин): этиленгликоль — около

0,7; диэтиленгликоль — около 1,3.

2.5. МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Раствор сравнения. К 5,0 мл триметилпентана Р прибавляют 1,0 мл раствора 2,5 г/л

п-анизидина Р в кислоте уксусной ледяной Р, встряхивают и хранят в защищенном от света месте.

Измеряют оптическую плотность (2.2.25)

испытуемого раствора (а) при 350 нм, ис-

пользуя триметилпентан Р в качестве компенсационного раствора. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора (b) при 350 нм ровно через 10 мин после его приго-

товления, используя раствор сравнения в ка-

честве компенсационного раствора. Анизидиновое число рассчитывают по

формуле:

25 (1,2A1 − A2 ),

m

где:

А1 — оптическая плотность испытуемого раствора (b) при 350 нм;

А2 — оптическая плотность испытуемого раствора (а) при 350 нм;

m — масса навески испытуемого образца, в граммах.

2.5.36. АНИЗИДИНОВОЕ ЧИСЛО

Анизидиновое число представляет собой	2.6. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
100-кратную оптическую плотность раст-
вора, содержащего 1 г испытуемого образ-	ИСПЫТАНИЯ
ца в 100 мл смеси из реактивов, измеренную
в кювете с толщиной слоя 1 см.	2.6.27. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ
Все приготовления и измерения не-
обходимо проводить насколько возможно	КОНТРОЛЬ КЛЕТОЧНЫХ

быстро, избегая воздействия света, спо-		ПРОДУКТОВ
собного вызывать фотохимические превра-		Данное испытание для определенных кле-
щения.
Испытуемый раствор (а). 0,500 г испы-		точных продуктов имеет преимущества по срав-
туемого образца растворяют в триметилпен-		нению с испытанием на стерильность (2.6.1), по-
тане Р и доводят до объема 25,0 мл этим же		скольку имеет большую чувствительность, более
растворителем.		широкий спектр определения и требует меньше-
Испытуемый раствор (b). К 5,0 мл испы-		го времени на проведение. В случае если это ого-
туемого раствора (а) прибавляют 1,0 мл раст-		ворено в частной статье, оно может быть исполь-
вора 2,5 г/л п-анизидина Р в кислоте уксусной		зовано вместо испытания на стерильность (2.6.1).
ледяной Р, встряхивают и хранят в защищен-		Испытание может проводиться вручную либо с
ном от света месте.		использованием автоматизированной системы.
		Таблица 2.6.27.-1
Микроорганизмы, используемые для определения свойства усиления роста
Аэробная среда
Staphylococcus aureus	например, ATCC 6538, CIP 4.83, NCTC 10788, NCIMB 9518
Bacillus subtilis	например, ATCC 6633, CIP 52.62, NCIMB 8054
Pseudomonas aeruginosa	например, ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118
Candida albicans	например, ATCC 10231, IP 48.72, NCPF 3179
Aspergillus niger	например, ATCC 16404, IP 1431.83, IMI 149007
Анаэробная среда
Clostridium sporogenes	например, ATCC 19404, CIP 79.3, NCTC 532 или ATCC 11437
Bacteroides fragilis	например, ATCC 25285, CIP 77.16, NCTC 9343

2.6.27. Микробиологический контроль клеточных продуктов

37

ОБЩИЕ ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЯ

Испытание проводят в асептических условиях в соответствии с требованиями действу-

ющего законодательства для потенциально

инфекционных агентов.

Данное предостережение при проведении

испытания необходимо для предотвращения контаминации, которая может оказать влияние

на микроорганизмы, наличие которых должно

быть определено в данном испытании. Испытание проводится при рабочих условиях, кото-

рые регулярно контролируются путем отбора

проб рабочей среды и проведения соответствующих испытаний.

ТЕСТ УСИЛЕНИЯ РОСТА

Используются как минимум 2 подходящие обогащенные культуральные среды (например, культуральная среда с добавлением крови), предназначенные для выявления грибов и аэробных и анаэробных бактерий.

Стерильность каждой серии среды подтверждается ее инкубированием при температуре 35—37°С в достаточных по объему контейнерах в течение не менее 7 дней.

Каждая серия проверяется поставщиком и/или пользователем на ее свойство усиливать рост путем высевания на каждую из сред 10—100 жизнеспособных микроорганизмов каждого из штаммов, перечисленных в таблице 2.6.27.-1, в двух повторностях. Инкубирование сред производится при температуре 35— 37°С в течение 7 дней с автоматической детекцией либо на протяжении 14 дней с визуальным контролем микробного роста. Испытание свойств среды считается удовлетворительным, если имеются очевидные признаки микробного роста во всех контейнерах со средами за указанный период времени.

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДА

В зависимости от типа продукта, его

метода приготовления, используемого ино-

кулируемого объема и типа тестируемой системы следует рассмотреть необходимость проведения валидации в присутствии

такого же типа препарата, как тестируемый.

В случае если не подтверждено или установ-

лено иное, тестируемая система подвергает-

ся валидации на специфичность (отсутствие ложноположительных результатов), чувстви-

тельность (предел обнаружения) и воспро-

изводимость. При проведении валидации, в

особенности определении предела обнару-

жения, испытание проводится с использова-

нием препаратов, умышленно загрязненных в различной степени следующими микроорганизмами, выбираемыми в зависимости от вероятности загрязнения ими и требования

ких росту:

–Aspergillus niger, например, ATCC 16404,

IP 1431.83, IMI 149007;

–Bacillus subtilis, например, ATCC 6633, CIP

52.62, NCIMB 8054;

–Candida albicans, например, ATCC 10231,

IP 48.72, NCPF 3179;

–Clostridium sporogenes, например, ATCC 19404, CIP 79.3, NCTC 532 или ATCC 11437;

–Propionibacterium acnes, например, ATCC

11827;

–Pseudomonas aeruginosa, например, ATCC

9027, NCIMB 8626, CIP 82.118;

–Staphylococcus aureus, например, ATCC

6538, CIP 4.83, NCTC 10788, NCIMB 9518;

–Streptococcus pyogenes, например, ATCC 19615, CIP 1042.26, NCIMB 13285;

–Yersinia enterocolitica, например, ATCC

9610, CIP 80.27, NCTC 12982.

Перечень микроорганизмов может быть изменен в зависимости от происхождения клеток и ранее выявляемых либо непосредственно связанных с определенным типом клеток микроорганизмов.

Могут быть использованы иные подходы к проведению валидации, например, межлабораторное сличение.

ТЕСТИРОВАНИЕ ИСПЫТУЕМОГО

ПРОДУКТА

Образец. Испытанию подвергается репрезентативный образец, включающий клетки и/или культуральную среду. Образец добав-

ляется к культуральной среде как можно бы-

стрее после его отбора. Если образец не добавляется сразу после его отбора, он хранится при температуре (5±3)°С с целью предупре-

ждения фагоцитоза микроорганизмов клетка-

ми, присутствующими в определенных типах продуктов (например, нейтрофилами).

Для гематопоэтических продуктов мини-

мальное количество испытуемого образца за-

висит от общего объема продукта (V, мл) согласно нижеуказанной закономерности.

Общий объем	Инокулируемый
препарата (мл)	объем
V ≥ 10	1% от общего
	объема
1 ≤ V < 10	100 мкл
V < 1	Неприменимо

Для гематопоэтических продуктов, кото-

рые требуют разведения до замораживания,

инокулируемый объем должен быть увели-

чен на фактор разведения. Для других клеточ-

ных продуктов требуемое минимальное коли-

чество определяется с учетом объема или количества доз.

Анализ. Образцы высевают в контейнеры на клеточную среду как можно быстрее после их отбора и инкубируют при температуре 35—37°С на протяжении 7 дней или 14

дней в зависимости от используемой систе-

38	Государственная фармакопея Республики Беларусь

мы детектирования. Часть инокулята в соот-

ветствующей пропорции прибавляют к среде, инкубируемой в аэробных условиях, и остав-

шуюся часть инокулята — к среде, инкубиру-

емой при анаэробных условиях.

НАБЛЮДЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

РЕЗУЛЬТАТОВ

Осмотр культуральных сред на наличие

признаков микробного роста осуществляют визуально либо с использованием авто-

матизированных систем как минимум один

раз в день и в конце периода наблюдения. В случае если микробный рост не наблюдается, продукт считается «культуронегатив-

ным» при имеющемся пределе определе-

ния. В случае если в испытании, прошедшем

валидацию, определяется рост, продукт счи-

тается «культуропозитивным»; выявленный микроорганизм идентифицируют по соответ-

ствующему таксономическому уровню (вид,

семейство) и составляют антибиограмму.

2.9. ФАРМАЦЕВТИКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ

2.9.3. ТЕСТ «РАСТВОРЕНИЕ» ДЛЯ ТВЕРДЫХ ДОЗИРОВАННЫХ ФОРМ (ДОПОЛНЕНИЕ)

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Твердые дозированные лекарственные формы со стандартным высвобождением.

Если нет других указаний в частной статье, испытуемое лекарственное средство

выдерживает требования теста «Растворе-

ние», когда количество высвободившейся/ растворившейся активной субстанции соот-

ветствует таблице 2.9.3.-1, где Q — нормиру-

емое количество растворившейся активной

субстанции, выраженное в процентах от но-

минального содержания (содержания, указан-

ного в разделе «Состав»); кроме этого, значения 5 %, 15 % и 25 % выражены в процентах от

номинального содержания и имеют ту же раз-

мерность, что и Q. Если результат не соответ-

ствует уровню S1, то продолжают испытание в

соответствии с уровнем S2; если результат не соответствует уровню S2, то продолжают ис-

пытание в соответствии с уровнем S3.

Твердые дозированные лекарственные формы с пролонгированным действием.

Если нет других указаний в частной статье, испытуемое лекарственное средство выдер-

живает требования теста «Растворение»,

когда количество высвободившейся/раство-

рившейся активной субстанции соответствует

таблице 2.9.3.-2. Если результат не соответствует уровню L1, то продолжают испытание в соответствии с уровнем L2; если результат не

соответствует уровню L2, то продолжают испытание в соответствии с уровнем L3. Предельные значения количества растворившейся активной субстанции выражают в процентах от номинального содержания. Предельные зна-

чения включают каждое значение Qi — нормируемое количество растворившейся активной субстанции в каждый заданный момент времени. В случае если нормируется более чем 1 интервал значений, критерии приемлемости применяются отдельно к каждому интервалу.

Твердые дозированные лекарственные формы с замедленным действием.

Кислотная стадия. Если нет других указаний в частной статье, испытуемое лекарственное средство выдерживает требования этой части теста «Растворение», когда

количество высвободившейся/растворившейся активной субстанции в процентах от номинальногосодержаниясоответствуеттаб-

лице 2.9.3.-3. Если результат обеих стадий (кислотной и буферной) не соответствует первым двум уровням (А1, А2 и В1, В2), то продолжают испытание в соответствии с тре-

тьим уровнем (А3 и В3).

Таблица 2.9.3.-1

	Уровень	Количество испы-	Критерий приемлемости
		туемых единиц
	S1	6	Каждая единица не менее Q+5%
	S2	6	Среднее значение из 12 единиц (S1+S2) равно или более Q, и ни
			одной единицы менее Q-15%
	S3	12	Среднее значение из 24 единиц (S1+S2+S3) равно или более Q,
			не более 2 единиц менее Q-15%, и не более 1 единицы менее
			Q-25%

2.9.3. Тест «растворение» для твердых дозированных форм (дополнение)						39
					Таблица 2.9.3.-2
			Количество
Уровень			испытуемых		Критерий приемлемости
			единиц
L1	6			Ни одно индивидуальное значение не лежит за пределами каждого за-
				данного интервала значений, и ни одно индивидуальное значение не
				должно быть меньше нормируемого значения на момент завершения
				испытания
L2	6			Среднее значение из 12 единиц (L1+L2) не лежит за пределами каждо-
				го заданного интервала значений; среднее значение не должно быть
				меньше нормируемого значения на момент завершения испытания; ни
				одно индивидуальное значение не выходит за пределы заданного ин-
				тервала значений более чем на 10 % от номинального содержания; ни
				одно индивидуальное значение не должно быть меньше нормируемо-
				го значения на момент завершения испытания более чем на 10 % от
				номинального содержания
L3	12			Среднее значение из 24 единиц (L1+L2+L3) не лежит за пределами каж-
				дого заданного интервала значений; среднее значение не должно
				быть меньше нормируемого значения на момент завершения испы-
				тания; не более 2 из 24 единиц могут выходить за пределы заданно-
				го интервала значений более чем на 10 % от номинального содержа-
				ния; не более 2 из 24 единиц могут выходить за пределы заданного
				интервала значений более чем на 10 % от номинального содержания
				на момент завершения испытания; ни одно индивидуальное значение
				не выходит за пределы заданного интервала значений более чем на
				20 % от номинального содержания или не должно быть меньше нор-
				мируемого значения на момент завершения испытания более чем на
				20 % от номинального содержания
					Таблица 2.9.3.-3
Уровень			Количество испы-		Критерий приемлемости
			туемых единиц
A1		6			Ни одно индивидуальное значение степени растворения не
					превышает 10 %
A2		6			Среднее значение степени растворения из 12 единиц (А1+А2)
					не превышает 10 %, и ни одно индивидуальное значение сте-
					пени растворения не превышает 25 %
A3		12			Среднее значение степени растворения из 24 единиц
					(А1+А2+А3) не превышает 10 %, и ни одно индивидуальное зна-
					чение степени растворения не превышает 25 %
					Таблица 2.9.3.-4
Уровень			Количество испы-		Критерий приемлемости
			туемых единиц
В1			6		Каждая единица не менее Q+5 %
В2			6		Среднее значение из 12 единиц (В1+В2) равно или больше Q,
					и ни одной единицы менее Q-15 %
В3			12		Среднее значение из 24 единиц (В1+В2+В3) равно или больше
					Q, не более 2 единиц меньше Q-15 %, и не более 1 единицы
					меньше Q-25 %

40	Государственная фармакопея Республики Беларусь

Буферная стадия. Если нет других указа-

ний в частной статье, испытуемое лекарственное средство выдерживает требования теста

«Растворение», когда количество высвободив-

шейся/растворившейся активной субстанции со-

ответствует таблице 2.9.3.-4, где Q — нормиру-

емое общее количество растворившейся активной субстанции в ходе обеих стадий (кислотной

и буферной), выраженное в процентах от но-

минального содержания (кроме этого, значения

5%, 15% и 25% выражены в процентах от но-

минального содержания и имеют ту же размер-

ность, что и Q). Если нет других указаний в частной статье, то значение Q принимают равным

75%. Если результат обеих стадий (кислотной и буферной) не соответствует первым двум уров-

ням (А1, А2 и В1, В2), то продолжают испытание в соответствии с третьим уровнем (А3 и В3).