Ориентировочная основа действия при выполнении практической работы.

1. Рассмотреть под микроскопом демонстрационные препараты из бактерий - возбудителей пищевых токсикоинфекций и интоксикаций, отметить характерные морфологические признаки. Рисунки занести в протокол.

2. Рассмотреть характер роста разных возбудителей пищевых токсикоинфекций и интоксикаций на плотных питательных средах. Типичные колонии описать в протоколе.

3. При ускоренной диагностике холерного вибриона рассмотреть посевы патологического материала (фекалии, рвотные массы, вода и др.) из щелочной пептонной воды. Описать в протоколе особенности роста возбудителя на жидкой питательной среде.

Приготовить мазок из пленки, что образовалась на поверхности питательной среды и покрасить его по Граму. Препарат промикроскопировать, рисунок занести в протокол.

Приготовить препарат «висячая капля» или «раздавленная капля», пользуясь методом темнопольной микроскопии, оценить подвижность бактерий.

Поставить реакцию агглютинации на стекле суспензии бактерий, которые исследуются с О-холерной сывороткой. Учесть результат реакции.

.Поставить нитрозо-индолову пробу (реакция холера - рот). Холерные вибрионы образуют индол, восстанавливают значительное количество нитратов (КNO₃) среды в нитриты (КNО₂). При добавлении к 24-часовой культуре в пептонной воде концентрированной H₂SО₄ из расчета 2-3 капли на 1 мл культуры высвобождается НNО₂, которая связывается с индолом и образует нитрозо-индол (рубиново-красная окраска среды). Дать предварительный ответ о видовой принадлежности выделенного возбудителя.

4 Для развернутого бактериологического исследования при подозрении на холеру рассмотреть посевы патологического материала на щелочном агаре для получения изолированных колоний. Описать вид типичной колонии, отсеять ее на скошенный агар для накопления чистой культуры. Определение рода возбудителя совпадает с п. 2.

. Отличие выделенного возбудителя от холероподобных вибрионов установить с помощью следующих тестов:

развернутая реакция агглютинации культур, которые исследуются с О- холерной сывороткой (учет готовой реакции). Отметить, с какой культурой реакция позитивная по титру агглютинирующей сыворотки;

определение диастатической активности при посеве культуры на 1% пептонную воду с 0,5%-ми растворимого крахмала (среда Кодама) . После инкубации при 37^оС на протяжении 6 часов в пробиркудобавляют несколько капель раствора Люголя .

^{. При разложении крахмала синяя расцветка среды не наблюдается;}

^{сахаролитични свойства - исследуются при посеве на среды Хейберга, которые содержат в качестве источника углерода сахарозу, мальтозу или арабинозу. Ферментация того или другого сахара приводит к изменению рН среды, что регистрируется по изменению цвета индикатора.}

^{Поставить реакцию агглютинации на стекле с типичными сыворотками Огава и Инаба (для культуры, что дала позитивную реакцию с О-холерной сывороткой). Определить серотип выделенного возбудителя.}

^{По таблице ознакомиться с методами идентификации биовара холерного вибриона. Результаты тестов занести в таблицу, сравнить свойства выделенной культуры и известных биоваров холерного вибриона. Сделать окончательные выводы по идентификации возбудителя.}

После ознакомления с теоретическими вопросами и ходом проведения эксперимента вам предлагается выполнить следующие задания.

^{1. В инфекционное отделение поступил больной с профузным поносом и рвотой. В лабораторию особенно опасных инфекций направлен материал - рвотные массы, в которых обнаружены Гр- подвижные слегка изогнутые палочки. Какой метод диагностики был использован? Поставьте предыдущий диагноз, предложите схему последующего исследования.}

^{2. Из фекалиий больного гастроэнтеритом выделена культура, сходная с холерным вибрионом по морфологическим и биохимическим признакам, но она не агглютинируется О-холерной сывороткой. Какие дополнительные исследования нужно провести, чтобы доказать, что выделенная культура является холерным вибрионом?}

^{3. В местности, в эпидемическом отношении неблагополучной по холере, исследованы два колодца с питьевой водой. В одном из них обнаружен холерный бактериофаг Эль-тор 2, в другом холерные фаги не обнаружены. Дайте вывод о возможности использования воды из этих колодцев}

4. Среди студентов, которые живут в общежитии, зарегистрировано пищевое отравление после употребления в еду котлет, которые на протяжении суток сохранялись при комнатной температуре. При бактериологическом исследовании из котлет выделены протеи, а из патологического материала - нет. Как доказать, что заболевание вызвано все-таки протеями?

5. В инфекционное отделение на протяжении суток было доставлено несколько работников одного комбината с диагнозом: «Острый гастроэнтерит». У всех отмечено повышение температуры до 38^оС, рвота, боль в животе, понос. Из анамнеза выяснено, что все они в обеденный перерыв ели мясной салат, купленный в буфете предприятия. Какой материал следует отправить в бактериологическую лабораторию для выяснения этиологии данного заболевания? Какие микроорганизмы могли его вызывать? Как установить источник инфекции?

6. В детском садике после употребления в еду сыра у детей наблюдалось заболевание, которое характеризуется тошнотой, рвотой, поносом. При бактериоскопии мазков из сыра и рвотных масс обнаружены Гр+ кокки. Каким будет ориентировочный диагноз? С помощью каких исследований его можно подтвердить?

Приложение 2

Образец протокола к практическому занятию №2.5:

1. Морфология возбудителей пищевых токсикоинфекций и интоксикаций.

Рис. 1. Vibrio parahaemolyticus

Рис. 2. Staphylococcus aureus

Рис. 3. Proteus vulgaris

Рис. 4. Clostridium perfringens

Рис. 5. Klebsiella

Рис. 6. Pseudomonas aeruginosa

2. Культуральные свойства возбудителей пищевых токсикоинфекций и интоксикаций

V. parahaemolyticus на кровяном агаре _____________________________.

S. aureus на ЖСА ________________________________________________.

P. vulgaris (проба по Щукевичу) ___________________________________.

C. perfringens на среде Вильсон-Блера _________________________.

Klebsiella на МПА _______________________________________________.

P. aeruginosa на МПА ____________________________________________.

3. Ускоренная диагностика холеры:

Патологический материал _____________________________.

Питательная среда ________________________________

Рост на среде _____________________________.

Рис. 1. Вибрионы. Микроскопия пленки, образующейся на жидкой питательной среде

Подвижность _____________________________.

Агглютинация с О-холерной сывороткой _________________.

Нитрозо-индоловая проба _____________________________.

Предварительный ответ _____________________________.

4. Развернутий метод диагностики холеры:

Патологический материал _______________________________________________________.

Питательные среды __________________________________________________________,

Рост на средах _____________________________________________________________.

Отличие от холероподобных вибрионов:

а) реакция с О-холерной сывороткой ________________________.

б) диастатичная активность _____________________________.

в) биохимические свойства (ферментация углеводов):

сахароза _______, манноза _______, арабиноза ________.

РА с типовыми сыворотками: Огава ___________, Инаба _______________.

Тесты идентификации биоваров холерного вибриона.

Тесты	Vibrio cholerae asiatica	Vibrio cholerae el-tor	Исследуемая культура
РГА с куриными эритроцитами	-	+
Гемолиз эритроцитов барана	-	+
Рост на среде с полимиксином	-	+
Реакция Фогеса - Проскауэра	-	+
Лизис фагами: фаг С	+	-
Фаг Эль-тор2	-	+

Выводы: выделен холерный вибрион, биовар __________________, серотип ______________________.

Дата______________________ Подпись преподавателя __________________________

Приложение 1

Граф логическая структура темы:»Микробиологическая диагностика холеры, пищевых токсикоинфекций и интоксикаций».