Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Граму

1. На зафиксированный мазок поместите сухую фильтровальную бумагу, пропитанную раствором генцианвиолета.

2. Нанесите на нее 2-3 капли воды так, чтобы бумага хорошо намокла и плотно прилегала к поверхности предметного стекла.

3. Через 2 мин снимите фильтровальную бумагу, слейте остатки красителя в кювету.

4. Нанесите раствор Люголя на 1 мин, слейте в кювету.

5. Обесцвечивание – нанесите на мазок несколько капель спирта на 20 сек.

6. Тщательно промойте препарат водой.

7. Нанесите водный раствор фуксина на 2 мин.

8. Промойте препарат водой.

9. Просушите фильтровальной бумагой.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет.

Грамотрицательные микроорганизмы окрашиваются в красный цвет.

Занятие № 3

Морфология и ультраструктура бактериальной клетки (продолжение). Особенности морфологии актиномицетов, спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм Окраска по Цилю-Нильсену

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из культуры бацилл.

2. Окраска мазка по Цилю-Нильсену, микроскопия и зарисовка препарата.

3. Микроскопия мазков из культуры клебсиелл, окрашенных по Бурри-Гинсу.

4. Микроскопия мазков из культуры стрептомицетов, окрашенных фуксином.

5. Микроскопия мазков из культуры микобактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену.

Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Цилю-Нильсену

1. На фиксированный мазок поместите сухую фильтровальную бумагу.

2. Нанесите на бумагу 3-4 капли карболового фуксина Циля.

3. Удерживая предметное стекло рукой за один из концов, нагрейте препарат над пламенем спиртовки до появления пара (повторите эту процедуру 3 раза).

4. После охлаждения стекла снимите фильтровальную бумагу и промойте мазок водой.

5. Погрузите препарат аккуратно в 1% раствор серной кислоты (для окраски спор) - три раза по 1 секунде.

6. Обильно промойте препарат водой.

7. Нанесите на мазок 2-3 капли водного раствора метиленового синего на 3 мин.

8. Промойте препарат водой. Просушите фильтровальной бумагой.

Вегетативная клетка бацилл окрашивается в синий цвет, споры - в красный.

Занятие № 4

Физиология прокариот Окраска по Нейссеру

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из культуры коринебактерий.

2. Окраска по Нейссеру, микроскопия и зарисовка препарата.

Сложные методы окраски

Алгоритм окраски по Нейссеру

1. На фиксированный мазок нанесите 2-3 капли ацетата метиленового синего Нейссера. Окрашивайте от 3 до 5 минут. Слейте краситель (можно промыть водой).

2. Нанесите раствор Люголя на мазок на 30 сек. Слейте краситель.

3. Промойте препарат водой.

4. Для докрашивания на мазок нанесите раствор везувина на 5 мин.

5. Промойте препарат водой. Просушите фильтровальной бумагой.

Зерна волютина окрашиваются в темно-синий цвет (выглядят коричневыми на фоне желтой цитоплазмы).

Цитоплазма бактерий окрашивается в желтый цвет.

Занятие № 5

Физиология прокариот (продолжение). Бактериофаги Культуральный метод исследования. Фаготипирование бактерий

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Освоить основные этапы, выполнения культурального метода исследования.

Первый этап культурального метода исследования – получение изолированного роста чистой культуры

1. Для засева берут чашку Петри (или несколько) с застывшим и подсушенным агаром (МПА, либо агаром Эндо, средой Левина или Плоскирева) и пробирку с патологическим материалом.

2. В правую руку возьмите бактериологическую петлю и стерилизуйте ее в пламени спиртовки.

3. В левую руку возьмите пробирку с патологическим материалом, откройте, пронесите открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края.

4. Введите петлю в пробирку, охладите ее, касаясь изнутри стенок пробирки.

5. Погрузите прокален­ную и охлажденную петлю в патологический материал, стряхните избыток жидкости (прикасаясь несколько раз к внутренней стенке пробирки), пронесите открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края, пробирку закройте проб­кой, поставьте в штатив.

6. Левой рукой приоткройте крышку чашки Петри. Внесите петлю с исследуемым материалом и сделайте параллельные штрихи по ¼ поверхности агара, скользя петлей от одного края до другого. Петлю держите плашмя, не царапая питатель­ной среды.

7. По окончании первой серии посева петлю обожгите, поверните чашку против часовой стрелки приблизительно на 90 градусов и сделайте следующую серию параллельных штрихов по незасеянной поверхности агара, начиная от конца предыдущего посева (серии штрихов), процедуру повторите еще два раза, каждый раз обжигая петлю после окончания нанесения серии штрихов.

8. По окончании посева петлю обожгите, поставьте в штатив, чашку переверните вверх дном, под­пишите и поставьте в термостат на 24 ч при темпера­туре 37 ⁰С.