Окраска мазка простым методом с использованием метиленового синего:

1. После охлаждения предметного стекла нанесите 1-2 капли водного раствора метиленового синего на фиксированный мазок (чтобы он был полностью покрыт краской).

2. Окрашивайте в течение 2-3 минут.

3. Смойте краску водой.

4. Просушите препарат фильтровальной бумагой.

Занятие № 8

Основы учения об инфекции Биологический метод исследования

1. Приготовление мазков-отпечатков из органов трупа инфицированной мыши, окраска по Граму, микроскопия и зарисовка препаратов.

Для приготовления мазков-отпечатков вырезают из печени, селезенки, почек небольшие кусочки ткани, берут их пинцетом и прикасаются к предметному стеклу, прижимая кусочек ткани к поверхностью разреза.

Мазки-отпечатки фиксируют и окрашивают метиленовым синим или по Граму.

При микроскопии отмеча­ют присутствие микроба-возбудителя в различных органах и тканях.

Занятие № 9

Микробиологические основы химиотерапии бактериальных инфекций Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам

1. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.

2. Определение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков.

Качественный метод определения чувствительности бак­терий к антибиотикам (метод дисков).

Бумажные диски, про­питанные определенными антибиотиками, помещают на по­верхность мясо-пептонного агара в чашках Петри, предвари­тельно засеянных «газоном» исследуемой бактериальной культуры.

Посевы инкубируют в течение 16—24 ч, после чего учитывают результаты опыта по образованию светлых зон задержки роста бактерий вокруг дисков. По диаметру этих зон ориентиро­вочно судят о чувствительности бактерий к антибиотикам.

Так, зоны диаметром до 15 мм указывают на слабую, а с диаметром до 25 мм — на среднюю и более 25 мм — на сравнительно высо­кую чувствительность исследуемого микроорганизма к анти­биотику.

Количественный метод определения чувствительности бак­терий к антибиотикам (определение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков).

Данный метод считается наиболее точ­ным для количественного определения чувствительности бак­терий к антибиотикам.

Основной раствор антибиотика, содер­жащий, например, 100 ЕД/мл, готовят с помощью бу­ферного раствора или специального растворителя.

Серийные разведения препарата (двукратные – 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128) готовят в пробирках, содержащих 1 мл мясо-пептонного бульона: в 1-ю пробирку вносят 1 мл исход­ного раствора препарата, перемешивают и переносят в следующую, в которой уже содержится 1 мл МПБ, и т.д. – таким методом делают серию (ряд) последовательных разведений препарата от 50 до 0,39 ЕД/мл в равных объемах питательной среды.

В каждую про­бирку вносят 0,1 мл испытуемой бактериальной суспензии, густотой 1 млрд/мл по оптическому стандарту. Одновременно ставят контроли — бактерий (1 мл мясо-пептонного бульона+ +0,1 мл суспензии бактерий) и антибиотика (мясо-пептонный бульон + антибиотик).

Посевы инкубируют, после чего отмечают результаты. Отсутствие по­мутнения среды свидетельствует о задержке роста бактерий в присутствии данной концентрации препарата.

Бактериостатической дозой или минимальной ингибирующей концентрацией (МИК) называется наименьшая концентрация антибиотика, в присутствии которой угнетает­ся видимый рост бактерий.

Для определения бактерицидного действия препарата до­полнительно производят высевы из пробирок, в которых от­сутствует видимый рост бактерий, на чашки Петри с плотной питательной средой, не содержащей антибиотика.

Наимень­шая концентрация антибиотика, вызывающая полную гибель испытуемых бактерий, о чем свидетельствует отсутствие роста на агаре без антибиотинка, называется минимальной бактерицидной концентрацией (МБК).