Второй этап культурального метода исследования – накопление чистой культуры

1. Берут чашку с изолированными колониями (чистой культурой), набира­ют петлей посевной материал (снимают приблизительно 1/3 колонии).

2. В левую руку берут пробирку со скошенным МПА (либо со средой Рассела, Клиглера, Олькеницкого), вынимают из нее ватную пробку, проносят открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края.

3. В пробирку вносят петлю с посевным материалом, делают посев уколом в столбик агара, а затем делают посев штрихом – распределяя материал зигзагообразным движением по скошенной по­верхности агара.

4. Проносят открытую часть пробирки через пламя спиртовки, прожигая края, пробирку закрывают проб­кой, ставят в штатив.

5. Петлю стерилизуют в пламени го­релки и тоже ставят в штатив.

6. Пробирки с посевами надписывают, указывая дату посева и характер посевного материала (номер исследования или название культуры) и ставят в термостат.

Третий этап культурального метода исследования – окончательная идентификация чистой культуры

Изучение ферментативных признаков.

Для определения способности микроорганизмов ферментировать углеводы используют короткий и длинный «пестрый» ряд. Первый включает в себя среды Гисса с моно- и дисахаридами: глю­козой, лактозой, сахарозой, мальтозой и с шестиатомным спиртом — маннитом. В длинный «пестрый» ряд вводят до­полнительно среды с моносахаридами (арабинозой, ксило­зой, рамнозой, галактозой и др.), а также с полисахаридами (инули­ном, крахмалом, гликогеном и др.) и спиртами (глицерином, дульцитом, инозитом и др.). В качестве индикатора во все среды добавляют реактив Андреде или другой индикатор.

1. Для посева используют пробирки со средой Гисса.

2. Стерильной петлей делается забор небольшого количества материала чистой культуры, выращенной (накопленной) на скошенном агаре и делается посев уколом в пробирку со средой Гиса.

3. При этом нужно помнить о необходимости стерилизовать петлю перед забором материала и после посева, а также края обеих пробирок перед забором материала и посевом и после забора материала и посева.

Колонии, выращенные на пластинчатом МПА, описывают с использованием следующих характеристик для S- или R- формы:

• морщинистая, гладкая;

• блестящая, матовая;

• сухая, влажная;

• гомогенная, гетерогенная;

• круглая, неправильная форма;

• неровные края, ровные края;

• врастает в среду, находится на поверхности среды.

Изучение культуральных признаков

Колонию характе­ризуют по величине, форме, цвету, консистенции, контуру края, структуре и характеру поверхности.

По величине колонии могут быть крупного (диаметр более 4—5 мм), среднего (диаметр 2—4 мм) и малого (диа­метр 1—2 мм) размера.

По форме — круглые, розетко-образные, многолопастные, в форме листа и т. д.

Цвет колонии зависит от выработки определенного пигмента: белого, желтого, красного и др. Колонии беспигментных бактерий бесцветны.

По консистенции различают су­хие, влажные, сочные или слизистые колонии.

Поверх­ность колонии бывает гладкой, морщинистой, исчерчен­ной, плоской, плоско-выпуклой, вдавленной.

Край колонии может быть ровным, волнистым, бахромчатым или волно­образным. Колонии могут иметь аморфную, зернистую, во­локнистую внутреннюю структуру.

Определение титра бактериофага в исследуемом препарате по методу Грациа