Фаготипирование бактерий.

Испытуемую суточную буль­онную культуру бактерий в количестве 0,5 мл вносят в про­бирку с расплавленным и охлажденным до 45° С 0,7% мясо-пептонным агаром, перемешивают и равномерно распреде­ляют по поверхности 2% мясо-пептонного агара в чашке Петри.

После застывания агара чашку слегка подсушивают в термостате, затем стеклянное дно чашки делят на квадраты, надписывают номера (или названия) фагов, которые будут использоваться для типирования. Переворачивают чашку, приоткрывают крышку и на обозначенные квадраты пастеров­ской пипеткой наносят по одной капле соответствующих надписи фагов.

После суточной инкубации просматривают чашку, отмечая те квадраты, в которых имеется лизис бактерий.

Фаготип бактериальной культуры определяется тем типом (типами) фага, который вызывает ее лизис.

Занятие № 6

Генетика бактерий Изучение бактерий в живом состоянии

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление препарата по методу “раздавленной” капли и его микроскопия.

Приготовление препаратов для изучения микроорганиз­мов в живом состоянии.

Метод «висячей» капли. Ис­пользуют стекла с лункой и покровные стекла. Края по­кровного стекла смазывают вазелином, а в центр наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло лункой вниз прижимают к покровному стеклу, так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движе­нием переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Используя малый сухой объектив 8х, находят край капли, затем устанавливают объектив 40х и микроскопируют.

Метод «раздавленной» капли.

На поверхность чистого предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покров­ным стеклом. Капля должна быть небольшой и не выходить за края покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом 40х или 100х (с иммерсией).

Прижизненная (витальная) окраска. Взвесь микро­бов вносят в каплю 0,001% раствора метиленового синего или нейтрального красного. Затем приготавливают препарат «висячей» или «раздавленной» капли и микроскопируют.

Этапы приготовления препарата «раздавленная капля»

1. На середину обезжиренного предметного стекла нанесите петлей 1-2 капли бульонной культуры.

2. Осторожно покройте каплю чистым покровным стеклом.

3. Микроскопируйте с приспущенным конденсором. Используйте объективы с увеличением 40 х.

4. Можно также использовать иммерсионный объектив 100х, нанося на покровное стекло одну каплю иммерсионного масла.

При исследовании живых бактерий следует отличать активную подвижность у отдельных микроорганизмов, свидетельствующую о наличии у них жгутиков, от пассивного броуновского движения (движение бактерий в одном направлении).

Занятие № 7

Экология микроорганизмов Изучение микрофлоры ротовой полости

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Приготовление мазка из зубного налета, окраска простым методом, микроскопия и зарисовка препарата.

Приготовление мазка из зубного налета

1. На обезжиренное предметное стекло нанесите петлей каплю физиологического раствора.

2. В правую руку возьмите деревянную палочку (зубочистку) и проведите ею между зубами и у основания зубов, снимая небольшое количество зубного налета.

3. Погрузите палочку в каплю физраствора, равномерно распределите зубной налет по стеклу и приготовьте мазок в виде небольшого круга (d2см).

4. Прожгите в пламени спиртовки конец палочки, потушите и выбросьте ее в урну.

5. После полного высушивания зафиксируйте мазок.