Ускоренный метод диагностики холеры

Вид: Микроскопическое изучение Кал, рвотные массы, желчь,

(рисового отвара)

I этап:

Грам «- » вибрионы Раздавленная капля Иммунофлюоресценция

Подвижность РИФ, РНИФ

Посев на комплект сред:

Б/фаг

МукарджиIV

Пептон 1% пепт. 1% пепт. 5% кров. Щелочной МПА с

1% вода вода + вода + МПА с дисками антибиотиков

01 сывор. 0,5% эритроцитами (полимиксин) и б/фагом

крахмала барана

II этап: Учет по принципу I этапа каждые 4-6 часов в течение суток.

Пленчатый рост Агглютинат 01 При добавлении Гемолиз Индивид. рез-ты

Грам «-» вибрион вибриона йода: V.eltor Х.в. – чувств к

Подвижны Нет его – при Нет синевы при Нет его - полимиксину и

не 01 вибрионах х.в. 01 холерный б/фагу;

Синева – при вибрион Эль-Тор – нет

вибр. Эль-Тор.

За сутки этим методом можно получить окончательные результаты

Приложение № 7

Экспресс-методы диагностики вибрионов

1. Люминесцентно-серологический (РИФ, РНИФ).

2. Иммобилизация вибрионов типовыми сыворотками.

3. Иммобилизация вибрионов типовыми бактериофагами.

4. Развернутая реакция агглютинации в бульоне.

5. Метод микроагглютинации материала.

6. Выявление вибрионов в воде реакцией агглютинации.

7. Исследование воды путем подращивания на мембранных фильтрах с помощью люминесцентной микроскопии.

Особенности иммуно-люминисцентной диагностики холеры – риф и рниф

РИФ – реакция прямой иммуно-флюоресценции при холере ставится по классической методике путем микроскопического выявления возбудителя в зафиксированном и обработанном ФИТЦ – препаратом мазке. Эта особенность (обязательная фиксация) связана с эпидемической опасностью работы с ООИ.

РНИФ – непрямая реакция иммунофлюоресценции ставится в случае отсутствия меченой ФИТЦ противохолерной иммунной сыворотки, но при наличии специфической не меченой и меченой противоиммуноглобулиновой видовой к белкам того вида животного, который использован для получения иммунных противохолерных антител. Эта реакция разработана Кунсом. Она выявляет антитела к Ig в иммунной сыворотке, среагировавшие в мазке с возбудителем.

Приложение № 8

Питательные среды

1. Жидкие среды обогащения:

1. 1% пептонная вода.

2. Пептонная вода с теллуритом калия.

2. Плотные среды:

1. Щелочной агар (рН = 8-8,2).

2. Щелочной агар с теллуритом калия.

3. Желточно-солевой агар (ЖАС).

4. Среда Дьедонне (щелочной МПА с дефибринированной кровью быка или барана).

5. Среда Монсура (таурохолат-теллуритовая).

6. Среда Аронсона (щелочной агар с сахарозой, сернокислым натрием, фуксином). Холерные вибрионы дают розовые колонии.

7. Среда Оттоленги (щелочной МПБ с бычьей желчью).

8. Теллурит-калиевая среда.

9. Висмут-сульфитная среда Рида.

10. Висмут-сульфитная среда с маннозой Вильсона и Рейли, рН-8,8.

3. Косервирующие среды:

1. Среда Венкатрамена и Рамакришнона (щелочной бульон с морской солью).

2. 2% раствор поваренной соли (морская соль).

3. 1% пептонная вода.

Приложение № 9