Фаготипирование холерными диагностическими бактериофагами хдф холерных вибрионов Эль-Тор с одновременной дифференциацией их патогенности

Серотип	Вирулентность	Чувствительность к монофагам			Гемолиз эритроцитов барана
		ХДФ-3	ХДФ-4	ХДФ-5
Огава, Гикошима	Высокая	+ + - +	+ + + -	+ - + +	- - - -
	Слабая	+ + + -	+ + - -	+ - + +	+ + +(-) +(-)
	Авирулентные	- + -	- - +	- - -	+(-) +(-) +(-)
Инаба	Высокая	+ + - - +	+ + + - -	+ - + + -	- - - - -
	Слабая	+ + - + - +	+ + + - - -	+ - + + + -	+ + + + + +
	Авирулентные	- -	- +	- -	+(-) +(-)

Примечание: ХДФ – холерный диагностический фаг.

Приложение № 10

Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (наг) не 01 группы типовыми бактериями тэпв к энтеропатогенным вибрионам

Фаготипы вибрионов НАГ	Типирующие фаги
	ТЭПВ - 1	ТЭПВ - 2	ТЭПВ - 3	ТЭПВ - 4	ТЭПВ - 5	ТЭПВ - 6	ТЭПВ - 7
1	+
2		+
3			+
4				+
5					+
6						+
7							+

Примечание: ТЭПВ – типовые фаги к энтеропатогенным вибрионам НАГ. Типируют методом агаровых слоев.

Методика: испытыемую культуру засевают в пробирку с 4 мл МПБ, инкубируют при + 37^о С в течение 3 часов. Затем 0,3 мл бульонной культуры вносят в пробирку с 4 мл. 0,7% расплавленного и остуженного до + 45^оС МПА, перемешивают и выливают вторым тонким слоем в стерильную чашку с первым застывшим слоем 2% МПА, после этого на поверхность МПА петлей или каплей из пипетки наносят типовые бактериофаги в цельном виде, а при необходимости – в разведении от 10^-1 до 10^-4. Каплям фага дают подсохнуть, впитаться, после чего пробы помещают в термостат при +37^оС на 4-18 часов. Контроль – физ.раствор.

Учет результатов ведут при наличии стерильных пятен в связи с лизисом чувствительных к фагу культур. В контроле и при нечувствительности культуры лизиса нет.

Ускоренный метод. Из подготовленной бульонной культуры делают штриховой высев на 8 секторов МПА, а сверху наносят бактериофаг. Режим инкубации и учет результатов те же.

Приложение № 11

Характеристика генетической основы патогенности

Кассета генов патогенности в хромосоме холерных вибрионов 01	Реализация кассеты в тестах
Vct^+ ген патогенности	- токсигенность Vct (in vitro, in vivo)
TOX’T ген-код синтеза токсического белка	- гемотоксин “Haem-tox 01” к бараньим эритроцитам
CT^+синтез токсигена, реализует	- патогенность для крольчат в
TCP^+ токсиноиндуцирующие пили	изолированной клетке
адгезии для CTXф	- агглютинация куриных эритроцитов
CTXф - переносчик Vct^+
Кассета холерных свободно живущих вибрионов не 01
TOX R – передавемый код
tep A – кодирует и реализует TCP с помощью восприимчивого организма.

Приложение № 12