26. Количественная оценка роста микроорганизмов. Чистые и смешанные культуры микроорганизмов.
Увеличение количества клеток устанавливают, определяя концентрацию бактерий в 1 мл, либо определяют увеличение клеточной массы в весовых единицах, отнесённых к единице объёма.
Подсчёт микроорганизмов можно проводить непосредственно под микроскопом (прямой метод) с использованием различных счётных камер (например, Петрова-Хаузера или Горяева).
Количество живых клеток определяют, подсчитывая выросшие на твёрдой питательной среде бактериальные колонии.
Фотометрические методы измерения мутности бактериальной суспензии основаны на её способности поглощать либо рассеивать свет пропорционально количеству бактерий.
Подсчёт с использованием автоматических счётчиков, регистрирующих отрицательный заряд поверхности каждой микробной клетки, основан на снижении проводимости раствора электролита при прохождении одной бактерии через узкое отверстие.
Биохимические методы определения биомассы основаны на определении общего азота в клетках (метод Кьельдаля), общего углерода (по ван Слайку-Фолчу), общего белка (по Лоури или Фолину), поскольку в бактериальной клетке элементный состав довольно стабилен.
Метод Роберта Коха (немецкий микробиолог). При этом способе исследования материал разводят в агар-агаре (при t⁰ 48-50), который затем разливают по чашкам Петри и дают застыть.
Метод Дригальского (немецкий исследователь). Пожалуй, самый распространенный вариант исследования. Метод состоит в том, что материал для анализа разводят в пробирке физраствором или бульоном, затем единственную каплю из пробирки переносят в чашку Петри (делают посев) и распределяют шпателем. Затем, не меняя и не стерилизуя шпатель, делают посевы поочередно в двух и более чашках. В последнем посеве на шпателе остается минимальное количество бактерий. Появляется высокая вероятность, что единичная клетка будет изолирована и на питательной среде разрастется в колонию бактерий одного вида.
Чистая культура - культура микроорганизмов, состоящая из клеток одного вида, являющихся потомками одной бактериальной клетки. Процедура начинается с отделения от клеточной популяции одной - единственной клетки, причем вырастающая из клетки колония тоже должна оставаться изолированной от других клеток и колоний. Аэробные бактерии выделяют по методу Коха - рассеивают суспензию по поверхности среды в чашках Петри или применяют менее трудоемкий метод - размазывают каплю платиновой петлей по агаризованной среде. Анаэробные бактерии суспендируют в расплавленном агаре (45°С) и проводят инкубацию без доступа воздуха. Тщательное отделение одной колонии, повторное суспендирование в жидкой среде и повторное нанесение штриха или разведение в агаре позволяют получать чистые культуры большинства микроорганизмов.
Чистая культура используется:
-
в научных исследованиях;
-
при диагностике инфекционных заболеваний
-
как исходный материал для производства вакцин, ферментов, антибиотиков, витаминов, гормонов и др.;
-
в промышленном производстве (молочнокислые закваски, пивные и обычные дрожжи и т.д.).
Смешанная культура - культура бактерий разных видов, первоначально взятое из естественных источников и культивированное в лабораторных условиях. Это позволяет делать выводы о синэргистических или антагонистических взаимоотношениях между различными организмами. Смешанные культуры могут быть приготовлены путем объединения чистых культур. Исследования, проводимые на смешанных культурах заданного состава, дают возможность понять, какими могут быть сложные формы взаимодействия микроорганизмов в местах их естественного обитания.
В отличие от математических законов в случае со смешанной культурой ее свойства не являются суммой свойств микробов, входящих в нее.