Окраска по Граму в модификации Берка.

Раствор А:
Кристаллический фиолетовый (с 90% содержанием сухого вещества)	1,0 г
Дистиллированная вода	100 мл
Раствор Б:
Двууглекислый натрий	1,0 г
Дистиллированная вода	100 мл
Йодная протрава:
Йод	1,0 г
Йодистый калий	2,0 г
Дистиллированная вода	100 мл

Протраву готовят так же, как для модификации Хукера.

Растворитель для обесцвечивания: ( осторожно, легко воспламеняется!)
Этиловый эфир	1 объем
Ацетон	3 объема
Дополнительный краситель:
Сафранин О (с 85% содержанием сухого вещества)	2,0 г
Дистиллированная вода	100 мл

Выполнение метода:

1. Высушенный на воздухе фиксированный нагрева­нием мазок погружают в раствор А, добавляют 2—3 капли раствора Б и выдерживают в те­чение 2 минут.

2. Отмывают мазок йодной протравой, после чего покрывают его на 2 минуты свежей протравой.

3. Мазок промывают в слабой, идущей под углом струе воды из-под крана в течение 2 с. Поверхность вокруг мазка подсушивают промокательной бумагой, но сам мазок предохраняют от высыхания.

4. На мазок при наклонном положении предметного стекла по каплям наносят обесцвечивающий раствори­тель до тех пор, пока в стекающем со стекла раство­рителе не исчезнет окраска. После этого мазок подсу­шивают на воздухе.

5. На 5—10 с мазок погружают в дополнительный краситель.

6. Мазок промывают в слабой, идущей под углом струе водопроводной воды до исчезновения окраски в стоке и подсушивают фильтровальной бумагой.

При использовании любой методики грамположительные бактерии окрашиваются в голубой или фиолето­вый цвет, а грамотрицательные—в красный.

Грамотрицательные бактерии могут выглядеть как грамположительные, если бактериальный мазок слиш­ком толст, а обесцвечивание не проведено до конца. В то же время грамположительные микроорганизмы мо­гут выглядеть как грамотрицательные, если мазок че­ресчур обесцвечен; это особенно характерно для культур, очень долго находившихся в стационарной фазе роста. Некоторые виды рода Bacillus грамположительны лишь в течение нескольких делений после прорастания спор. Грамположительные организмы могут окраситься как грамотрицательные, если механически нарушена це­лостность их клеточных стенок в результате гибели кле­ток, автолиза, действия ферментов (например, лизоцима), высушивания на стекле и последующего увлажне­ния. Для получения хороших результатов лучше всего готовить относительно прозрачные мазки (со слабой замутненностью) из молодых, активно растущих куль­тур, так как более старые культуры могут показывать неустойчивые реакции. Целесообразно в качестве контроля использовать известные грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы.