- •Методы общей бактериологии
- •Введение
- •Бактериологическая лаборатория
- •Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места
- •Правила работы и поведения в лаборатории
- •Уборка лабораторного помещения
- •Мытье и обработка лабораторной посуды
- •Дезинфекция
- •Стерилизация
- •Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования
- •Виды стерилизации
- •Микроскопические методы исследования
- •Приготовление препаратов для микроскопииживых микроорганизмов
- •Приготовление мазков
- •Окраска мазков
- •Простые методы окраски мазков
- •Окраска по Муромцеву
- •Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков
- •Окраска по Граму
- •Видоизменения метода окраски по Граму
- •Окраска по Граму в модификации Хукера.
- •Выполнение метода:
- •Окраска по Граму в модификации Берка.
- •Выполнение метода:
- •Модификация по Синеву.
- •Модификация по Эткинсу.
- •Техника окраски:
- •Окраска кислотоустойчивых микробов
- •Окраска по методу Циль-Нильсена
- •Окраска в модификации Синева.
- •Метод Труантадля окрашивания на кислотоустойчивость.
- •Выполнение методики:
- •Метод Гонзеля
- •Метод Бунге и Траутенрота
- •Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость)
- •Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)
- •Модификация окраски Грам—Муха
- •Способ Нейссера
- •Метод Пью (окраска метахроматических зерен)
- •Модификация Саватеева.
- •Окраска по Романовскому-Гимза
- •Окраска капсул
- •Метод окраски капсул по Дюгиду
- •Метод окраски капсул по Гиссу
- •Метод окраски капсул по Антони
- •Способ Михина
- •Способ Гисса
- •Способ Ольта
- •Модификация способа Ольта.
- •Способ Ребигера
- •Способ Гусельниковой
- •Способ Кауфмана
- •Способ Ионе
- •Окраска спор
- •Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру
- •Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону
- •Метод Виртца в модификации Саватеева
- •Модификация Шеффер и Фултона.
- •Способ Пешкова
- •Способ Мюллера
- •Способ Ауески
- •Способ Клейна
- •Окраска жгутиков
- •Метод окраски жгутиков по Грэю
- •Методика:
- •Метод окраски жгутиков по Ляйфсону
- •Методика:
- •Окраска жгутиков серебрением
- •Техника окраски.
- •Способ Уварова
- •Способ Леффлера
- •Способ Инуйе
- •Способ Бениньетти и Джино
- •Цитоплазматические включения
- •Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты
- •Окрашивание полифосфата
- •Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа
- •Метод окраски полисахаридов альциановым синим
- •Питательные среды
- •Техника посева микроорганизмов
- •Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды
- •Получение чистых культур
- •Посев штрихом
- •Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)
- •Выделение чистой культуры по способу Дригальского
- •Анаэростат для культивирования анаэробов
- •Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов
- •Рост микробов на плотной питательной среде
- •Особенности микробного роста на жидких питательных средах
- •Рост на полужидкой питательной среде
- •Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов
- •Сахаролитические свойства микроорганизмов
- •Протеолитические свойства микроорганизмов
- •Определение протеолитической активности микробов
- •Определение индола в культуре микроорганизмов
- •Определение сероводорода
- •Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов
- •Определение редуцирующей способности
- •Определение фермента каталазы
- •Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Лабораторные животные
- •Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных
- •Правила пополнения вивария новыми животными
- •Правила содержания экспериментальных животных в виварии
- •Уборка и дезинфекция вивария
- •Личная гигиена работников питомника (вивария)
- •Правила кормления лабораторных животных
- •Заболевания лабораторных животных
- •Подготовка животных к заражению
- •Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных
- •Способы заражения
- •Наркоз лабораторных животных
- •Внутрикожный метод
- •Подкожный способ заражения
- •Внутримышечный способ заражения
- •Внутрибрюшинный способ заражения
- •Внутривенное заражение кроликов
- •Внутривенное заражение крыс и мышей
- •Заражение через пищеварительный тракт
- •Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение)
- •Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод)
- •Внутримозговой метод (интрацеребральный)
- •Внутриплевральный метод
- •Содержание животных под опытом
- •Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка
- •Умерщвление и вскрытие лабораторных животных
- •Вскрытие животных
- •Определение вирулентности микробов
- •Определение токсигенности микробов
- •Литература
- •Оглавление
- •Методы общей бактериологии
Протеолитические свойства микроорганизмов
Некоторые виды микроорганизмов продуцируют и выделяют во внешнюю среду протеолитические ферменты — протеазы, катализирующие расщепление белков. В результате расщепления молекулы белка образуются высокомолекулярные промежуточные продукты распада — пептоны, альбумозы и полипептиды. Под действием других протеолитических ферментов пептоны в свою очередь расщепляются на полипептиды (соединения двух или нескольких аминокислот) и отдельные аминокислоты.
Для выявления протеолитических ферментов исследуемую культуру микроба засевают в питательную среду, содержащую тот или иной белок. Чаще всего для этой цели применяют желатин, реже — свернутую лошадиную сыворотку, коагулированный яичный белок, молоко или кусочки вареного мяса.
Протеолитическая активность одного и того же микроба при определении ее на разных питательных средах будет проявляться неодинаково, что обусловлено специфичностью ферментов. Поэтому для разных видов микробов рекомендуют питательные среды различного состава.
Определение протеолитической активности микробов
а) На желатине. Мясо-пептонный желатин разливают в пробирки столбиком по 5— 6 мл. Посев производят уколом, погружая петлю с исследуемой культурой в глубь питательной среды до дна пробирки. Микробы, способные расти при низкой температуре, оставляют стоять в комнате при 20—22°С. Остальные посевы инкубируют в термостате при 37°С. Вместе с опытными пробирками в термостат ставят одну или две пробирки с незасеянным желатином для контроля. При температуре 37°С желатин плавится, поэтому после инкубации пробирки, вынутые из термостата, опускают в холодную воду или ставят в холодильник. После застудневания желатина в контрольных пробирках приступают к просмотру роста и учету изменений в питательной среде опытных пробирок. Там, где под действием фермента желатиназы произошло расщепление белков желатина, отмечается разжижение питательной среды. Пробирки, в которых после суточного инкубирования среда остается без изменения, оставляют в термостате. Наблюдение за изменением среды ведется в течение 20 суток. В протоколе исследования обязательно отмечают день появления признаков разжижения среды, степень и характер ее разжижения.
б) На молочном агаре Эйкмана. Молочный агар Эйкмана, разлитый и остуженный в чашках Петри, засевают исследуемой культурой микробов. Посев делают петлей или шпателем так, чтобы получить изолированные колонии. Через 24—48 ч инкубации в термостате культуры, продуцирующие протеолитический фермент, обусловливают пептонизацию молочного белка — казеина, в результате чего вокруг таких колоний образуются прозрачные зоны, четко выделяющиеся на общем молочно-мутном фоне среды.
в) На свернутой кровяной сыворотке. Культуру исследуемых аэробных микробов засевают на чашки, анаэробных — уколом в столбик свернутой лошадиной сыворотки, инкубируют в термостате при 37°С. Штаммы, продуцирующие протеолитические ферменты, разжижая питательную среду, образуют углубления вокруг колоний или на поверхности столбика среды.
г) В бульоне с куриным яичным белком. В пробирку с мясо-пептонным бульоном или бульоном Хоттингера, содержащим кусочек свернутого куриного белка, вносят одну петлю исследуемой культуры микроба. Посевы просматривают ежедневно в течение 5 дней. Протеолитически активные культуры микробов расщепляют коагулированный яичный белок; кусочки белка, содержавшиеся в среде, заметно уменьшаются в размере, превращаясь в крошкообразную массу, или полностью растворяются.
Аналогичным образом проявляются протеолитические свойства микробов в средах с кусочком вареного мяса.
Некоторые виды патогенных микробов с выраженной протеолитической активностью обладают способностью расщеплять белок и пептон до продуктов глубокого распада: индола, сероводорода, мочевины и аммиака.
При определении видов и дифференциации разновидностей патогенных микробов наибольшее значение имеет выявление двух первых продуктов: индола и сероводорода.