Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру

1. Образец, фиксированный нагреванием на предмет­ном стекле, высушивают на воздухе и покрывают квадратным кусочком фильтровальной бумаги или сал­фетки, подогнанным по размеру стекла.

2. Насыщают бумагу раствором карболового фуксина и выпаривают его 5-10 минут, как описано выше, поддерживая влажное состояние добавлением красителя по мере испарения. Выпаривать можно и по-другому, помещая стекла на штатив, находящийся над емкостью с кипящей водой.

3. Удаляют промокательную бумагу и обесцвечивают мазок смесью кислоты и спирта в течение 1 минуты. Промы­вают водопроводной водой и подсушивают промокатель­ной бумагой.

4. Высушивают тонкий, нанесенный на предметное стекло слой водного насыщенного раствора нигрозина и просматривают стекло в микроскоп (раствор нигрозина готовят следующим образом: смесь 10 г нигрозина и 100 мл дистиллированной воды погружают на 30 минут в кипящую воду, охлаждают и для лучшего хранения до­бавляют 0,5 мл формалина; перед использованием смесь фильтруют).

Вегетативные клетки бесцветны, эндоспоры окраше­ны в красный цвет, а фон — в черный.

В модифицированном методе Дорнера смешивают в пробирке водную суспензию бактерий с равным объ­емом карболфуксина. Пробирки опускают на 10 минут в кипящую водяную баню. Затем набранный петлей 7%-ный водный нигрозин смешивают на покровном стекле с небольшим количеством (одна петля) подверг­шейся нагреванию суспензии бактерий; после подсушивания на воздухе образуется тонкий мазок. Результаты получают те же, что указаны выше, но методика менее трудоемкая.

Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону

В этом методе вместо карболового фуксина применяется 0,5%-ный (вес/объем) водный малахитовый зеленый. Образец высушивают на воздухе на предметном стекле, фиксируют нагреванием, покрывают промокательной бу­магой или бумажной салфеткой, пропитанной до насы­щения красителем, и помещают на 5 минут над кипящей водой. Стекло промывают водопроводной водой, и мазок дополнительно окрашивают 30 секунд саф­ранином, как при окраске по Граму. Затем вновь промывают и подсушивают мазок промокательной бу­магой. Эндоспоры окрашиваются в ярко-зеленый цвет, а вегетативные клетки — в красно-коричневый.

Метод Виртца в модификации Саватеева

К насыщенному водному раствору (около 5%) малахитовой зелени добавляют 5% глицерина, пропитывают смесью полоски фильтровальной бумаги и высушивают их (лучше при 50°С). Затем готовят 0,5% водный раствор сафранина, которым смачивают другие полоски фильтровальной бумаги, и высушивают. Сохраняют окрашенные бумажки в закрытых банках в защищенном от солнечного света месте.

Техника окраски. На фиксированный над пламенем мазок наносят 2—3 капли дистиллированной воды и накладывают полоску бумаги, окрашен­ной малахитовой зеленью. Препарат нагревают над пламенем до появления паров (3—4 раза), приблизительно в течение минуты. При испарении добавляется вода. После остывания препарата смывают краску с бумажкой струей водопроводной воды (30 секунд), и тотчас же на мокрую поверхность пре­парата кладут бумажку, окрашенную сафранином. Если необходимо, добавляют несколько капель воды. Через 30—40 секунд мазок промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Микроскопическая картина: свободно лежащие споры — зеленовато-голубого цвета, споры внутри микробных клеток — темно-зеленые, вегетативные формы микробов — красные.

Для окраски лучше брать малахитовую зелень в виде двойной соли ZnCl₂ (медно-желтые кристаллы), хуже — щавелевокислая соль (фиолетово-зеленые или ярко-зеленые кристаллы с бронзовым блеском).