Окраска по Романовскому-Гимза

Лучше применять краску фабричного изготовления. Перед самой окраской готовят рабочий раствор из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды нейтральной реакции (определение рН воды см. ниже).

Разведенную краску наливают в чашку, на дно которой положены кусоч­ки предметного стекла (подставка). Мазок, фиксированный химически чистым метиловым спиртом, кладут намазанной стороной вниз на поверхность слоя краски, опирая концы препарата на кусочки стекла (подставки), и остав­ляют в таком положении от 30 минут до 2 часов, в зависимости от каче­ства краски, затем промывают водой и высушивают на воздухе в вертикаль­ном положении.

Указанный способ особенно хорош для окраски спирохет, биполяров и мазков крови.

Простой способ нейтрализации дистиллированной воды. В два химических стакана (колбы) наливают по 200 мл исследуемой воды и добавляют в каждый по 1—2 капли 1% раствора нейтральрота в дистиллированной воде (индикатор). При рН воды 5,4—5,5 (кислая реакция) получается свекловично-красная (рубиновая) окраска. Тогда в один из стаканов, тщательно размешивая, прибавляют по каплям 1% раствор угле­кислой соды до получения ясной разницы в окраске по сравнению с водой в другом (контрольном) стакане. Моментом нейтрализации считается появле­ние заметного оранжевого оттенка; если через 10—30 секунд цвет не изменится до первоначального —нейтрализация считается достигнутой. Нельзя добавлять соду до получения ясно оранжевого или, тем более, желтого цвета; в таких случаях вода окажется сильно щелочной. Зная, сколько капель раствора соды пошло на усреднение 200 мл исследуемой пробы, легко подсчитать, сколько надо взять капель для нейтрализации любого количества той же порции воды. Для окраски лучше применять воду с рН 6,8 – 7,0.

Окраска капсул

Капсулы микробов состоят главным образом из полисахаридов и гликопротеидов. Капсульными можно считать те микробы, у которых капсула обнаруживается при окраске каким-либо методом на капсулы. Капсулы и слои слизи образуются некоторыми бактериями в специфических культуральных условиях. Луч­ше всего они видны во влажных препаратах, поскольку составляющие их сильно гидратированные коллоидные полимеры легко разрушаются и сокращаются в разме­рах при высушивании и фиксации. Самым простым и наиболее эффективным из трех методов окраски капсул, описанных ниже, является ме­тод Дюгида.

Метод окраски капсул по Дюгиду

1. На чистое предметное стекло петлей наносят тушь и смешивают ее с культурой. Покровное стекло помеща­ют таким образом, чтобы была накрыта лишь часть смеси.

2. Сложенной в несколько раз фильтровальной бумагой сильно прижимают покровное стекло к предметному стеклу до появления тонкого коричневатого слоя жид­кости между ними. Препарат смотрят под большим уве­личением, применяя безиммерсионные и иммерсионные объективы.

Капсулы выглядят прозрачными зонами вокруг преломляющих свет микроорганизмов на коричневато-чер­ном фоне.

Метод окраски капсул по Гиссу

1. Взятую петлей бактериальную суспензию смеши­вают с каплей нормальной лошадиной сыворотки или снятого молока на предметном стекле.

2. Высушивают мазок на воздухе и мягко фиксиру­ют его нагреванием.

3. Покрывают мазок красящим реактивом кристал­лического фиолетового (кристалический фиолетовый 0,1 г, дистиллированная вода 100 мл) и нагревают до появления пара.

4. Отмывают кристаллический фиолетовый 20%-ным (вес/объем) водным раствором сульфата меди (CuSO₄  5H₂O). Подсушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.

Капсулы выглядят бледно-голубыми, а сами микро­организмы — темно-фиолетовыми.