Метод окраски жгутиков по Ляйфсону

Раствор 1:
Хлористый натрий	1,5 г
Дистиллированная вода	100 мл
Раствор 2:
Дубильная кислота	3,0 г
Дистиллированная вода	100 мл
Раствор 3:
Уксуснокислый n-розанилин	0,9 г
Солянокислый n-розанилин	0,3 г
Этанол 95%-ный (объем/объем)	100 мл

Смешивают равные объемы растворов 1 и 2; затем два объема получившейся смеси приливают к одному объему раствора 3. В охлажденном виде полученная смесь хранится 1—2 мес.

Методика:

1. Высушенный на воздухе образец готовят в соот­ветствии с 1-м и 2-м этапами метода Грэя.

2. Восковым стеклографом очерчивают вокруг мазка прямоугольник.

3. Наносят на предметное стекло 1 мл раствора кра­сителя, так чтобы нисколько не вытекло за пределы восковой линии. Оставляют краситель приблизительно на 7—15 минут; оптимальное время реакции следует определить экспериментально.

4. Как только на поверхности красителя образуется золотистая пленка и при освещении снизу будет видно, что вся пленка сплошь покрыта осадком, краситель уда­ляют, заставляя «плыть» эту пленку по поверхности пу­щенной из-под крана струи воды. Пленку высушивают на воздухе и смотрят в микроскоп.

Тела и жгутики бактерий окрашиваются в красный цвет.

Окраска жгутиков серебрением

Реактивы: I
40% формалин	1 мл
Дистиллированная вода	100 мл
II
Танин	5 г
Дистиллированная вода	100
Карболовая кислота (расплавленная)	1 мл

(Клемпарская предлагает применять, во избежание осадков, протраву в виде 2,5—3% раствора танина.)

Раствор аммиачного серебра (III) готовят по следующей методике: 4 г азотнокислого серебра растворяют в 80 мл дистиллированной воды; затем к нему по каплям добавляют крепкий (25%) аммиак, пока образующийся темно-коричневый, а затем буро-черный осадок не растворится и останется лишь легкая опалесценция. Раствор очень стоек. Хранить в темной склянке с притертой пробкой (защищать от пыли!). Перед окраской реактив разбавляется 1:10 дистиллированной водой.

Приготовление бактериальной взвеси. Как правило, жгутики в старых культурах теряются. Иногда необходимы частые систематические пересевы в течение долгого времени на жидкие среды (ежедневные пересевы на свежие среды), пока подвижность микробов не восстановится. Хорошей средой для пересевов является обыкновенный или кровяной агар, свежий, с влажной поверхностью.

На границе с конденсационной водой осторожно захватывают петлей немного бактериальной массы, переносят ее в пробирку, где налито 0,1—0,2 мл 1% формалина (реактив I), легкими движениями петли распределяют микробные тела в жидкости. До окраски приготовленную эмульсию держат при 37° в течение 2 часов и более (сохраняется годами).

Приготовление стекол. Рекомендуют готовить препарат только на новых, еще не бывших в употреблении, безукоризненно чистых предметных стеклах. Стекла обрабатывают (для очистки) концентрированной соляной кислотой в течение 15 минут; затем кислоту сливают, остатки ее нейтрализуют крепким аммиаком, стекла промывают дистиллированной водой и переносят в чистый винный спирт. Вынутые из спирта (пинцетом!) стекла тщательно протирают мягкой чистой тряпочкой. В чашечку или бюксу, где налито 3—4 мл дистиллированной воды, очень тонкой пипеткой вносят 1 каплю формалиновой бак­териальной взвеси. Отсюда маленькой петлей наносят 5—6 отдельных капель взвеси на центральную часть предметного стекла, не касаясь петлей его поверхности и не размазывая капли. Когда капли высохнут на воздухе, приступают к их окраске.