Метод Труантадля окрашивания на кислотоустойчивость.

Реактив для флуоресцентной окраски:
Аурамин О, С141000	1,5 г
Родамин В, С1 749	0,75 г
Глицерин	75 мл
Фенол (кристаллы, расплавлен­ные при нагревании)	10 мл
Дистиллированная вода	50 мл

Оба красителя тщательно перемешивают с 25 мл воды и фено­лом. Затем добавляют оставшуюся воду и глицерин и снова пере­мешивают. Получившийся реактив для флуоресцентной окраски фильтруют через стекловату и хранят при 4°С или при комнатной температуре.

Растворитель для обесцвечивания:
Этанол 70% (объем/объем)	99,5 мл
Соляная кислота (концентрированная)	0,5 мл
Дополнительный краситель:
Марганцевокислый калий	0,5 г
Дистиллированная вода	99,5 мл

Выполнение методики:

1. Погружают фиксированный нагреванием бактериальный мазок на 15 минут в реактив для флуо­ресцентной окраски при 20—37°С.

2. Промывают мазок под слабой, падающей под уг­лом струей дистиллированной воды, пока сток не станет бесцветным.

3. На 2—3 минуты погружают мазок в обесцвечиваю­щий растворитель, затем промывают дистиллированной водой, как описано выше.

4. Погружают мазок в дополнительный краситель на 2—4 минуты.

5. Отмывают дистиллированной водой, как описано выше, и подсушивают фильтровальной бумагой.

Просматривают образцы в люминесцентный микро­скоп с использованием возбуждающего светофильтра типа BG-12 и запирающего светофильтра типа OG-1. Клетки кис­лотоустойчивых бактерий флуоресцируют желто-оран­жевым светом на темном фоне.

Для микроскопической дифференциальной диагностики туберкулезных палочек от спиртоподатливых сапрофитов существует несколько методов.

Метод Гонзеля

1. Фиксированный мазок окрашивают карболовым рас­твором фуксина при нагревании до кипения в течение 2 минут.

2. Промывают водой и высушивают.

3. Обесцвечивают смесью соляной кислоты (3 части) и абсолютного или 95° алкоголя (97 частей) в течение 10 минут.

4. Докрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синь­ки, разбавленным водой в 2 раза.

5. Промывают водой, высушивают.

Микроскопическая картина: туберкулезные палочки—красные.

Метод Бунге и Траутенрота

1. Помещают препарат на 3 часа в абсолют­ный алкоголь (для извлечения жира).

2. Наносят на мазок 5% водный раствор хромовой кислоты на 15 минут.

3. Промывают водой.

4. Окрашивают при подогревании карболовым раствором фуксина.

5. Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение 3 минут.

6. Докрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки не менее 5 минут.

Микроскопическая картина: туберкулезные палочки—красные.

Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость)

Препарат окраши­вают карболовым фуксином при подогревании до появления паров, промывают водой, а затем окрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки в тече­ние 2—3 минут. Мазок обмывают водой, высушивают.

Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — красные на синем фоне, а кислотоустойчивые, но спиртоподатливые палочки — синие.

Если требуется проверить в уже окрашенном по Циль-Нильсену мазке обнаруженные кислотоустойчивые палочки на спиртоустойчивость, нужно: удалить с препарата кедровое масло бензином или ксилолом, докрасить мазок насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки в течение 2-5 минут, обмыть водой и высушить. Кислото- и спиртоустойчивые палочки сохраняют свой красный цвет, а спиртоподатливые окрасятся в синий цвет.