Окрашивание полифосфата

Включения, состоящие из неразветвленных структур с элементным составом М_n+2Р_nО_3n+1, выявляют следую­щим образом.

1. Мазок на предметном стекле фиксируют нагреванием.

2. Окрашивают его в течение 10—30 с в растворе метиленового синего по Леффлеру или в 1%-ном (вес/объ­ем) толуидиновом синем.

3. Отмывают краситель водопроводной водой, под­сушивают и смотрят в микроскоп.

При окраске метиленовым синим гранулы полифос­фата выглядят шариками, имеющими цвет от синего до фиолетового, а вся остальная цитоплазма окрашивается в светло-голубой цвет. Толуидиновый синий окрашивает метахроматически, и гранулы имеют красный цвет на фоне голубой цитоплазмы.

Окрашивание полисахаридов с использованием реак­тива Шиффа

Этим методом выявляют гликогеноподобные веще­ства.

1. Мазок суспензии на предметном стекле фиксиру­ют нагреванием.

2. На 5 минут на стекло наносят раствор перйодата [20 мл 4%-ной (вес/объем) йодной кислоты в воде, 10 мл 0,2М водного ацетата натрия и 70 мл 95%-ного этанола; защищать раствор от света!].

3. Отмывают стекло 70%-ным (объем/объем) этанолом.

4. На 5 минут наносят на предметное стекло восста­навливающий раствор, содержащий 300 мл этанола, 5 мл 2Н соляной кислоты, 10 г йодистого калия, 5 г тиосульфата натрия (пятиводного), 200 мл дистиллиро­ванной воды. Восстанавливающий раствор готовят следующим образом: к раствору йодистого калия и тио­сульфата натрия в дистиллированной воде сначала при­ливают этанол, а затем соляную кислоту. Смесь пере­мешивают и оставляют на некоторое время для выпаде­ния в осадок серы, после чего собирают надосадочную жидкость.

5. Отмывают стекло 70%-ным (вес/объем) этанолом.

6. Окрашивают препарат реактивом Шиффа в тече­ние 15—45 минут (точное время следует определить экспе­риментально). Реактив Шиффа готовят следующим об­разом: 2 г основного фуксина растворяют в 400 мл кипя­щей дистиллированной воды, охлаждают до 50°С и фильтруют через фильтровальную бумагу. Добавляют к фильтрату 10 мл 2Н соляной кислоты и 4 г метабисульфита калия. Сосуд плотно закупоривают и оставляют на 12 ч в холодном темном месте. Добавляют такое количе­ство 2Н соляной кислоты (10мл), чтобы при высыхании на предметном стекле реактив не давал розового налета. Реактив Шиффа хранят в темноте.

7. Несколько раз отмывают стекло раствором, со­стоящим из 2 г метабисульфита калия и 5 мл концент­рированной соляной кислоты в 500 мл дистиллирован­ной воды.

8. Отмывают препарат водопроводной водой и допол­нительно окрашивают 0,002%-ным (вес/объем) водным раствором малахитового зеленого в течение 2—5 с.

9. Отмывают препарат водопроводной водой, подсу­шивают и смотрят в микроскоп.

Полисахариды окрашиваются в красный цвет, все остальные компоненты цитоплазмы — в зеленый.

Метод окраски полисахаридов альциановым синим

Для выявления полисахаридов можно также исполь­зовать альциановый синий. Обычно применяют 1%-ный (вес/объем) раствор альцианового синего в 95%-ном (объем/объем) этаноле, а в качестве дополнительного красителя используют карболфуксин. Последователь­ность операций такова:

1. Мазок препарата на предметном стекле фиксиру­ют нагреванием.

2. Окрашивают мазок в течение 1 минуты разведенным в 9 раз (в воде) альциановым синим, приготовленным так, как описано выше.

3. Отмывают препарат водопроводной водой и высу­шивают.

4. Дополнительно очень быстро окрашивают (не сле­дует допускать перекрашивания!) препарат карболфуксином и сразу же отмывают водопроводной водой. Высушивают мазок на воздухе и смотрят в мик­роскоп.

Полисахариды окрашиваются в голубой цвет, а другие составляющие цитоплазму компоненты — в красный.