3. Приготовление препаратов

3.1. Приготовление препарата «раздавленная капля»

1 - краситель; 2- окрашенная часть; 3- неокрашенная часть.

Для приготовления препарата «раздавленная капля» (рис.2) на середину предметного стекла предварительно прокаленной бактериологической петлей наносят каплю из водной суспензии, осторожно накрывают ее и «раздавливают» ее покровным стеклом. Если исследуемый объект «твердый» (например, Mucor), то вначале на предметное стекло помещают каплю воды, а затем в нее помещают объект.

Капля должна тонким слоем заполнить пространство между покровным и предметным стеклами, но не выступать за края покровного стекла.

Излишек выступившей жид­кости удаляют фильтровальной бумагой, если жидкости, мало, ее добавляют. Далее препарат помещают на предметный столик микроскопа и рассматривают с объ­ективом 40^х. Окрашивают препарат фуксином или метиленовой синью.

Капля красителя помешается рядом с покровным стеклом, затем метиленовая синь или фуксин попадают под покровное стекло (см. рис 2.)

3.2. Приготовление препарата «висячая капля»

Рис. 3

1 - предметное стекло с лункой; 2 - покровное стекло; 3 - слой вазелина 4 - крышка чашки Петри; 5 - дно чашки Петри; 6 - препарат (капля); 7 - вид сверху. Прим. Чашка Петри используется для хранения препарата.

Посредством этого препарата (рис.3) исследуют микроорганизмы в живом виде, изучая их рост, развитие. Для этого на покровное стекло наносят каплю жидкости с исследуемыми микроорганизмами. Взять специальное предметное стекло с лункой в центре и смазать ее края вазелином. Лункой предметного стекла накрыть каплю исследуемого материала так, чтобы капля находилась в центре лунки. Предметное стекло слегка прижать и быстро перевернуть его. При правильном приготовлении препарата капля свисает в лунку.

3.3. Приготовление фиксированного препарата

Рис. 4

1 - предметное стекло; 2 - препарат.

1. Подготовка предметного стекла (обезжирить).

2. Нанесение мазка. Растягиваем либо петлей, либо краем предметного стекла.

3. Высушивание мазка высоко над пламенем спиртовки.

4. Фиксация мазка тепловым способом (над пламенем) 3-4 раза.

5. Окрашивание. Если окрашиваем метиленовой синью, то залить препарат красителем на 4 -5 мин. Если фуксином, то предварительно на препарат поместить фильтровальную бумагу, смоченную водой, а затем нанести краситель на 1 -2 мин. После окрашивания необходимо снять фильтровальную бумагу.

6. Промывание мазка водой.

7. Высушивание мазка.

3.4. Техника окраски по Граму

Заключается она в следующем. На фиксированный мазок наносят 2-3 капли раствора генцианвиолета и через 2-3 мин. окрашивания раствор сливают. На препарат наносят 2-3 капли раствора Люголя и спустя 2-3 мин сливают. Препарат на 30-40 с. погружают в ста­канчик с 96 %-ным раствором спирта и быстро промывают во­дой. Затем препарат в течение 1-2 мин. докрашивают разведен­ным фуксином, промывают водой и просушивают фильтроваль­ной бумагой. Грамположителъные бактерии будут фиолетовыми, грамотрицательные - розоватые, так как обесцвеченные спиртом, они воспринимают дополнительную окраску фуксином.