Ход работы

Материалы и оборудование: пробирки; водяная баня; электроплитка; фильтровальная бумага; микроскоп и все необходимое для приготовления препаратов; спиртовки.

Для получения накопительной культуры аэробных целлюлозоразрушающих микроорганизмов используют питательную среду Гетчинсона, с добавлением фильтровальной бумаги в качестве источника целлюлозы.

В колбу наливают стерильную питательную среду слоем в 1 –1,5см, затем туда вносят почву (в качестве источника целлюлозоразрушающих микроорганизмов). Затем вносят в колбу источник целлюлозы – единственный источник углерода для данного опыта - складчатый фильтр конусом кверху, причем высота фильтра должна быть равной 2/3 высоты колбы. Колбу закрывают ватной пробкой. Инкубацию микроорганизмов производят в термостате при температуре 25-27⁰С в течение 12-20 суток.

Для изучения морфологических признаков студенты получают готовую культуру.

Микроскопирование аэробных целлюлозоразрушающих микроорганизмов.

О наличии разложения клетчатки микроорганизмами судят по ослизнению и изменению цвета клетчатки на границе соприкосновения с питательной средой, а также по появлению на ней цветных пятен всевозможных оттенков: от светло-желтого до ржаво-бурого.

Для изучения морфологии аэробных разрушителей клетчатки готовят фиксированный препарат. Для этого пинцетом или бактериальной петлей из колбы достают кусочек разлагающейся бумаги и размазывают на предметном стекле без добавления воды. Мазок сушат на воздухе, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают фуксином в течение 2 минут. Промывают водой. Сушат фильтровальной бумагой и микроскопируют. Зарисовать обнаруженные микроорганизмы. Отметить форму клеток.

Список рекомендуемой литературы

5. Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология:В 3-х т. / Под ред. Р. Сопера. М.: Мир, 1990. Т.1. 368 с.

6. Вилли К. Биология. М.: Мир, 1968.

7. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С. Лабораторный практикум по общей микробиологии.М., 1998.

Лабораторная работа № 13 изучение морфологии азотфиксирующих микроорганизмов

Цель работы: ознакомиться на практике с морфологией свободноживущих и симбиотических азотфиксирующих микроорганизмов.

1. Свободноживущие азотфиксаторы

Свободноживущие азотфиксирующие организмы распространены повсеместно и встречаются среди бактерий самых разных таксономических групп, относящихся как к хемотрофам, так и фототрофам, как к аэробам, так и анаэробам.

К свободноживущим в почве микроорганизмам, способным фиксировать молекулярный азот атмосферы, относят микроорганизмы рода Azotobacter, Clostridium, Beijewinkia, некоторые спириллы, аробактерии, дрожжи, синезеленые водоросли.

Хорошо изученным среди свободноживущих аэробных азотфиксирующих бактерий является азотобактер.

Микроорганизмы рода Azotobacter относятся к аэробам и лучше всего развиваются при свободном доступе воздуха. Оптимум рН лежит в пределах 7,2-8,0.

Azotobacter chroococcum - это соединенные в пары одиночные кокковидные клетки размером 3-7 мкм, в старой культуре клетки обычно окружены слизистой капсулой, а колонии темнеют до темно-серого и темно-коричневого цвета. Активность азотфиксации - 20 мг азота на 1 г потребленного органического вещества.

Наиболее изученными анаэробными свободноживущими азотфиксирующими организмами являются маслянокислые бактерии Clostridium pasteurianum. Это палочковидные подвижные клетки, одиночные или расположенные парами и короткими цепочками. Споры овальные, формируются центрально, при этом клетки-спороносцы принимают форму веретена или лимона. В клетках накапливается много гранулезы. Активность азотфиксации достигает 12 мг азота на 1 г потребленного органического вещества.

Для обнаружения азотфиксирующих организмов в природных средах используют метод получения накопительных культур на синтетических средах, в которых отсутствуют источники азота. В частности используется среда Эшби.