Ход работы

Материалы и оборудование: стерильные чашки Петри, пробирки, колба; шпатель; весы.

1. Отбор и подготовка почвенного образца для микробиологического анализа

При отборе образцов из почвы учитывают чрезвычайную макро-, мезо- и микрогетерогенность как микробиологических показателей почвы. Так и других ее свойств. С пробной площадки отбирают 3-10 образцов и анализируют их отдельно. Это позволяет получить статистически достоверные результаты о среднем количестве микроорганизмов, а также дает возможность судить о разнообразии и степени разброса полученных данных.

Образцы почв для проведения микробиологических исследований отбирают в стерильные пергаментные пакеты, полиэтиленовые пакеты или стеклянную посуду с ватными пробками и др.

При отсутствии возможности анализировать образцы непосредственно после сбора, их в течение нескольких часов высушивают на воздухе, предохраняя от прямых солнечных лучей.

При подготовке почв к микробиологическому анализу необходимо провести следующие операции: разрушить почвенные агрегаты; десорбировать микроорганизмы с поверхности почвенных частиц и из органоминерального геля и дезагрегировать микроколонии микроорганизмов.

Для разрушения почвенных агрегатов чаще всего используют метод растирания почвы, увлажненной до пастообразного состояния в течение 5 минут в стерильной фарфоровой чашечке резиновым пестиком или пальцем в резиновой перчатке.

Используется также метод обработки почвенной суспензии на электрической мешалке или на ультразвуковой установке.

Перед посевом влажную или сухую почву высыпают на часовое стекло, протертое спиртом, и освобождают от посторонних включений.

2. Техника посева

Навеску подготовленной почвы (1г) переносят в колбу со 100 мл стерильной водопроводной воды. Готовят разведение почвенной суспензии, для чего 1 мл суспензии из колбы последовательно переносят в ряд пробирок с 10 мл стерильной водопроводной воды.

Посев на плотные среды производится из разных разведений. Разведение для высева подбирают таким образом, чтобы на чашке развивалось 50-200 колоний. Из каждого образца берут не менее 3-х повторных навесок и каждую высевают не менее чем на 3 чашках.

На поверхность застывшей и подсушенной среды наносят каплю почвенной суспензии определенного разведения и с помощью стеклянного шпателя распределяют ее по всему агару. Засеянные чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат. Сроки учета микроорганизмов зависят от состава питательной среды и группы учитываемых микроорганизмов.

На МПА обычно на 2-3 сутки учитывают споровые и неспоровые формы бактерий. На среде Чапека на 5-7-е сутки учитывают колонии актиномицетов, на сусло-агаре на 5-7-е сутки – колонии грибов и дрожжей.

Подсчет количество колоний на чашке проводят обычно со дна чашки в проходящем свете. На месте подсчитанной колонии чернилами по стеклу или маркером ставится точка.

Подсчитав количества колоний на всех параллельных чашках, выставляют их среднее число на одной чашке и затем делают пересчет и определение содержания микроорганизмов в 1 г почвы по формуле

а=бвг,

где а - количество клеток в 1 г почвы;

б- среднее количество колоний на чашке;

в- разведение, из которого сделан посев;

г – количество капель в 1 мл суспензии.

Результаты обрабатывают статистически, рассчитывают ошибку среднего арифметического, среднее квадратичное отклонение, коэффициент вариации.

СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1.Асонов Н.Р. Практикум по микробиологии. М.: Колос, 1975. 160 с.

2.Практикум по микробиологии /Под ред. Н.С. Егорова. М.: Изд-во Моск.ун-та, 1976. 307 с.

3. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С.Лабораторный практикум по общей микробиологии. М.: Изд-во РХТУ им.Менделеева, 1998. 116 с.

Лабораторная работа № 15

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ТЕХНОГЕННЫХ ПОТОКОВ, ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ВОДЫ

Цель работы: ознакомиться с методами посева и количественного учета микроорганизмов воды.