- •Методические указания
- •1. Приготовление препаратов микроорганизмов
- •1.1. Приготовление препаратов живых клеток
- •1.2. Приготовление препаратов фиксированных клеток
- •1.2.1. Приготовление мазка
- •1.2.2. Высушивание мазка.
- •1.2.3. Фиксация мазка.
- •1.2.4. Окраска мазка
- •Устройство микроскопа мбр-1
- •Микробиологическая лаборатория
- •2. Подготовка микробиологической лаборатории к работе
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Ведение лабораторных записей
- •Аппараты, приборы, посуда и инвентарь
- •Техника безопасности на биотехнологическом
- •Лабораторная работа № 3 приготовление питательных сред для культивирования микроорганизмов
- •1. Питательные среды
- •2. Уплотнители сред
- •3. Осветление сред
- •Список рекомендуемой литературы по теме занятия:
- •Лабораторная работа № 4 морфология бактерий
- •Ход работы
- •Культуральные и морфологичекие признаки
- •2. Окраска микроорганизмов по граму
- •Ход работы
- •Приготовление мазка
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Краткая характеристика молочнокислых бактерий
- •2. Практическое использование молочнокислых бактерий
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата молочнокислых бактерий
- •2. Определение кислотности молока
- •Вопросы для самопроверки
- •Список рекомендуемой литературы:
- •2.Теппер е.З., Шильникова в.К. Практикум по микробиологии. М.: Колос,- 1979.-216 с. Лабораторная работа № 7 изучение биологии возбудителей маслянокислого брожения
- •1. Понятие о маслянокислом брожении
- •Культуральные и морфологические признаки
- •3. Роль в природе
- •4. Использование клостридиев в биотехнологии
- •Ход работы
- •1. Выращивание маслянокислых микроорганизмов
- •2. Микроскопирование маслянокислых микроорганизмов
- •3. Качественные реакции на масляную кислоту.
- •3.1. Получение маслянокислого железа
- •3.2. Получение масляноэтилового эфира
- •Вопросы для самопроверки
- •Краткая характеристика морфологии актиномицетов
- •2. Практическое значение актиномицетов
- •2.1. Значение актиномицетов в обеспечении плодородия почв
- •2.2. Использование представителей актиномицетов в биотехнологии
- •2.3. Актиномицеты как возбудители заболеваний
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Список рекомендуемой литературы:
- •Лабораторная работа № 9 изучение морфологии грибов как объекта биотехнологии
- •Краткая характеристика морфологии грибов
- •2.Практическое значение грибов
- •2.1. Использование плесневых грибов в биотехнологии
- •4 . Приготовление препаратов плесневых грибов
- •Ход работы
- •Приготовление препаратов дрожжей и их изучение ход работы
- •Морфология простейших
- •2. Простейшиекак возбудители заболеваний
- •Простейшие как объект биотехнологии
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Микроскопирование аэробных целлюлозоразрушающих микроорганизмов.
- •Список рекомендуемой литературы
- •Лабораторная работа № 13 изучение морфологии азотфиксирующих микроорганизмов
- •Свободноживущие азотфиксаторы
- •2.Симбиотические азотфиксаторы
- •Ход работы
- •Микроскопирование свободноживущих азотфиксирующих
- •Изучение морфологии симбиотических азотфиксирующих
- •Цель работы: ознакомиться с микробиологическими методами исследования почвы.
- •Ход работы
- •Отбор и подготовка почвенного образца для микробиологического анализа
- •2. Техника посева
- •Общие представления о микробиологических методах
- •2. Посев на плотные среды
- •3. Методы количественного учета микроорганизмов
- •3.1. Подсчет клеток в счетных камерах
- •3.2. Подсчет клеток в капиллярах Перфильева
- •Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках
- •3.4. Подсчет клеток на мембранных фильтрах
- •Определение количества клеток высевом на плотные
- •Определение количества клеток высевом в жидкие среды
- •4. Микробиологические методы исследования воды
- •4.1. Отбор проб воды
- •4.2. Методы определения микробного числа
- •Ход работы
- •Цель работы: ознакомиться с основными микробиологическими методами исследования воздуха.
- •Метод оседания
- •Аспирационные методы
- •Ход работы
2. Уплотнители сред
Для уплотнения сред применяют агар-агар, желатину и кремнекислый гель.
Агар-агар используют особенно часто. Это сложный полисахарид, получаемый из некоторых морских водорослей. Его выпускают в виде пластин, "стебельков" или порошка. Агар-агар удобен тем, что большинство микроорганизмов не используют его в качестве питательного субстрата. В воде агар-агар образует гели, плавящиеся при 1000С, а затвердевающие при температуре около 400С. Поэтому на агаризованных средах можно культивировать микроорганизмы практически при любой подходящей для их роста температуре. При остывании агар выделяет "конденсационную" воду. Чем меньше концентрация агара, тем больше выделяется воды.
Чаще всего агар-агар добавляют к средам в количестве 2%. Следует отметить, что в слабокислых, нейтральных и слабощелочных средах агар-агар сохраняет способность образовывать гель после нескольких циклов плавления и затвердевания, а также после повторной стерилизации. Однако в кислой среде при рН ниже 5,5, агар-агар при стерилизации часто не образует гель. В этом случае агар-агар следует стерилизовать отдельно от среды в определенном объеме воды и добавлять в среду после стерилизации. Для этого стерильный водный агар-агар расплавляют на водяной бане и приливают при постоянном перемешивании к стерильной, предварительно подогретой среде.
Желатина - это белок, получаемый путем вываривания костей и хрящей животных. Образуемый желатиной гель плавится при температуре 23-260, которая ниже обычной температуры инкубации многих микроорганизмов (30-370). Кроме того, желатина разжижается протеолитическими ферментами, выделяющимися некоторыми микроорганизмами в среду. Эти свойства желатины сильно ограничивают ее применение в качестве уплотняющего средства. Желатину используют главным образом для выявления протеолитической активности микроорганизмов, а также получения "гигантских" и глубинных колоний дрожжей с целью их идентификации. В первом случае употребляют мясо-пептонную, а во втором - сусловую желатину. Желатину добавляют к жидким средам в количестве 10-15%.
Кремнекислый гель (силикагель) используют как твердую основу для синтетических сред строго определенного состава, поскольку он является веществом неорганической природы.
3. Осветление сред
Осветленные агаризованные или желатиновые среды необходимы в диагностических исследованиях и для получения хорошо видимых изолированных колоний анаэробных микроорганизмов.
В ряде случаев прозрачную среду можно получить, отфильтровав ее от осадка через вату. Когда этого бывает недостаточно, среды осветляют с помощью белков куриных яиц.
Синтетические агаризованные среды, внесение белка в которые нежелательно, осветляют следующим образом. Среду наливают в химический стакан, автоклавируют и оставляют после стерилизации в закрытом автоклаве на 10-12 ч. При таком медленном остывании среды все взвешенные частицы оседают на дно. Застывшую агаризованную среду извлекают из стакана. Верхнюю прозрачную часть среды срезают, помещают в колбу и вновь стерилизуют.
Оформите лабораторную работу, ответив письменно на вопросы:
Для чего необходимы питательные среды?
Чем определяется специфичность сред?
Что является определяющим принципом при составлении питательных сред?
На какие группы делятся среды по составу?
В каком случае применяются натуральные среды и почему? Отметьте особенности натуральных сред.
Кратко опишите принципы приготовления натуральных сред.
Какие среды называются синтетическими? В каких случаях используют именно эти среды?
Какие среды используются для получения аминокислот, витаминов, продуктов жизнедеятельности микроорганизмов? Отметьте их главные особенности.
Какие среды различают по назначению и физическому состоянию? С какой целью они используются (отметьте кратко)?
Какую культуру называют накопительной?
В чем заключается сущность метода накопительных культур и как называются среды для их выращивания?
Отметьте главные особенности применения агар-агара, желатины и кремнекислого геля.
С какой целью осветляются среды?
В чем принципиальное отличие автотрофных и гетеротрофных микроорганизмов?
Что имеется в виду под конструктивным обменом? Энергетическим обменом?