4.1. Отбор проб воды

В зависимости от задачи исследования определяют место и время отбора пробы.

Для исследования воды открытых водоемов, а также колодцев отбирают пробы воды на глубине 10-15 см от поверхности в стерильные флаконы.

Для отбора проб водопроводной воды используют стерильные склянки вместимостью 500 мл с ватно-марлевыми пробками. Бактериологическое исследование отобранных проб должно производиться не позднее 2 ч с момента отбора или не позднее

6 ч при хранении пробы при 1-5⁰С.

4.2. Методы определения микробного числа

В 1 мл исследуемой воды определяют содержание мезофильных аэробов и факультативных анаэробов, способных при 37⁰С в течение суток на МПА образовывать колонии, видимые невооруженным глазом или при увеличении в 2-5 раз. Из каждой пробы делают посев не менее двух различных объемов, выбранных с таким расчетом, чтобы число выросших колоний на чашке колебалось от 30 до 300.

При исследовании водопроводной воды в каждую из двух чашек вносят по

1-0,1 мл чистых вод и по 0,1 и 0,001 мл более загрязненных. При определении микробного чила сильно загрязненных вод и сточных жидкостей исследуют по 0,0001 и по 0,00001мл.

Для посева 0.1 мл и меньших объемов исследуемую воду разводят стерильной дистиллированной водой. Готовят последовательно 10-кратные разведения.

По 1 мл каждого разведения вносят в 2 чашки Петри и заливают тонким слоем предварительно растопленного и остуженного до 45⁰С питательного агара (10-12 мл агара). После интенсивного перемешивания среде дают застыть на строго горизонтальной поверхности. Посевы выращивают в течение суток при 37⁰С. С лупой при увеличении в 2 – 5 раз подсчитывают все выросшие колонии. Учитывают результаты только на тех чашках, где число колоний колеблется в пределах от 30 до 300, и производят перерасчет содержания бактерий в 1 мл исследуемой воды.

Общепринятым показателем санитарно-микробиологического исследования воды является показатель коли-индекс, т.е. количество бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды, или коли-титр – наименьшее количество или наибольшее разведение воды, в котором еще обнаруживается кишечная палочка.

Задание. Определить количество микроорганизмов (микробное число) в водопроводной воде.

Ход работы

Оборудование и материалы: стерильные чашки Петри, колбы, пипетки, пробирки, питательная среда, спиртовка.

Исследование водопроводной воды проводят следующим образом:

1. В течение 10-15 минут воду спускают из водопроводной трубы, после чего пламенем горелки (спиртовки) обжигают кран.

2. Воду набирают в стерильную колбу.

3. В две стерильные пробирки наливают по 9 мл стерильной воды стерильной пипеткой.

4. Из колбы, в которую отобрана вода для исследования, пипеткой берут 1 мл и вносят в первую пробирку с 9 мл стерильной воды. Получается разведение 1:10. Второй пипеткой воду перемешивают в первой пробирке. Затем этой же пипеткой 1 мл разведения переносят в чашку Петри и 1 мл - во вторую пробирку с 9 мл стерильной воды, но не перемешивают. Третьей пипеткой перемешивают воду во второй пробирке (разведение 1:100) и 1 мл переносят в третью чашку Петри.

5. После внесения в каждую чашку по 1мл воды в разведениях 1:100, 1:10 и неразведенной выливают по 10-12 мл расплавленной и охлажденной до 45⁰С питательной среды. Чашку быстро закрывают и вращательными движениями перемешивают расплавленную среду с водой.

6. На крышке чашки Петри карандашом или специальными чернилами делают надписи с указанием даты посева, разведения, фамилии студента, подгруппы.

7. Чашки переворачивают вверх дном и ставят в термостат при температуре

35-37⁰С. По количеству выросших колоний, с учетом разведения, судят о содержании микробов в засеянном объеме воды. Подсчет, как правило, проводят, не открывая чашек Петри. Для удобства чернилами или карандашом по стеклу отмечают просчитанную колонию точкой на наружной стороне дна чашки. При большом количестве колоний дно чашки Петри делят на секторы, подсчитывают число колоний в каждом секторе и суммируют.

8. Количество клеток в 1мл исследуемого субстрата вычисляют по формуле

M= ,

где М- количество клеток в 1 мл;

а - среднее число колоний при высеве данного разведения;

10 - коэффициент разведения;

n - порядковый номер разведения, из которого сделан высев;

V - объем суспензии, взятый для посева, мл.

Качество воды оценивают по содержанию микробов в 1 мл:

хорошая вода - количество микробов от 100

сомнительная вода от 100 до 500

плохая вода от 500 и выше.

СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1.Асонов Н.Р. Практикум по микробиологии. М.: Колос, 1975. 160 с.

2.Практикум по микробиологии /Под ред. Н.С. Егорова. М.: Изд-во Моск.ун-та, 1976. 307 с.

3. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С.Лабораторный практикум по общей микробиологии. М.: Изд-во РХТУ им.Менделеева, 1998. 116 с.

Лабораторная работа № 16

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ОБЪЕКТОВ

ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЯ ВОЗДУХА