- •Методические указания
- •1. Приготовление препаратов микроорганизмов
- •1.1. Приготовление препаратов живых клеток
- •1.2. Приготовление препаратов фиксированных клеток
- •1.2.1. Приготовление мазка
- •1.2.2. Высушивание мазка.
- •1.2.3. Фиксация мазка.
- •1.2.4. Окраска мазка
- •Устройство микроскопа мбр-1
- •Микробиологическая лаборатория
- •2. Подготовка микробиологической лаборатории к работе
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Ведение лабораторных записей
- •Аппараты, приборы, посуда и инвентарь
- •Техника безопасности на биотехнологическом
- •Лабораторная работа № 3 приготовление питательных сред для культивирования микроорганизмов
- •1. Питательные среды
- •2. Уплотнители сред
- •3. Осветление сред
- •Список рекомендуемой литературы по теме занятия:
- •Лабораторная работа № 4 морфология бактерий
- •Ход работы
- •Культуральные и морфологичекие признаки
- •2. Окраска микроорганизмов по граму
- •Ход работы
- •Приготовление мазка
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Краткая характеристика молочнокислых бактерий
- •2. Практическое использование молочнокислых бактерий
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата молочнокислых бактерий
- •2. Определение кислотности молока
- •Вопросы для самопроверки
- •Список рекомендуемой литературы:
- •2.Теппер е.З., Шильникова в.К. Практикум по микробиологии. М.: Колос,- 1979.-216 с. Лабораторная работа № 7 изучение биологии возбудителей маслянокислого брожения
- •1. Понятие о маслянокислом брожении
- •Культуральные и морфологические признаки
- •3. Роль в природе
- •4. Использование клостридиев в биотехнологии
- •Ход работы
- •1. Выращивание маслянокислых микроорганизмов
- •2. Микроскопирование маслянокислых микроорганизмов
- •3. Качественные реакции на масляную кислоту.
- •3.1. Получение маслянокислого железа
- •3.2. Получение масляноэтилового эфира
- •Вопросы для самопроверки
- •Краткая характеристика морфологии актиномицетов
- •2. Практическое значение актиномицетов
- •2.1. Значение актиномицетов в обеспечении плодородия почв
- •2.2. Использование представителей актиномицетов в биотехнологии
- •2.3. Актиномицеты как возбудители заболеваний
- •Ход работы
- •1. Приготовление препарата
- •2. Фиксация мазка
- •3. Окрашивание препарата
- •Список рекомендуемой литературы:
- •Лабораторная работа № 9 изучение морфологии грибов как объекта биотехнологии
- •Краткая характеристика морфологии грибов
- •2.Практическое значение грибов
- •2.1. Использование плесневых грибов в биотехнологии
- •4 . Приготовление препаратов плесневых грибов
- •Ход работы
- •Приготовление препаратов дрожжей и их изучение ход работы
- •Морфология простейших
- •2. Простейшиекак возбудители заболеваний
- •Простейшие как объект биотехнологии
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Ход работы
- •Микроскопирование аэробных целлюлозоразрушающих микроорганизмов.
- •Список рекомендуемой литературы
- •Лабораторная работа № 13 изучение морфологии азотфиксирующих микроорганизмов
- •Свободноживущие азотфиксаторы
- •2.Симбиотические азотфиксаторы
- •Ход работы
- •Микроскопирование свободноживущих азотфиксирующих
- •Изучение морфологии симбиотических азотфиксирующих
- •Цель работы: ознакомиться с микробиологическими методами исследования почвы.
- •Ход работы
- •Отбор и подготовка почвенного образца для микробиологического анализа
- •2. Техника посева
- •Общие представления о микробиологических методах
- •2. Посев на плотные среды
- •3. Методы количественного учета микроорганизмов
- •3.1. Подсчет клеток в счетных камерах
- •3.2. Подсчет клеток в капиллярах Перфильева
- •Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках
- •3.4. Подсчет клеток на мембранных фильтрах
- •Определение количества клеток высевом на плотные
- •Определение количества клеток высевом в жидкие среды
- •4. Микробиологические методы исследования воды
- •4.1. Отбор проб воды
- •4.2. Методы определения микробного числа
- •Ход работы
- •Цель работы: ознакомиться с основными микробиологическими методами исследования воздуха.
- •Метод оседания
- •Аспирационные методы
- •Ход работы
Аспирационные методы
Простейшие аспирационные методы основаны на улавливании бактерий жидкостью.
Через сосуд с определенным объемом изотонического раствора NaCl или водопроводной воды просасывают (с помощью воздуходувки, пылесоса, насоса и др.) определенный объем воздуха.
Затем проводят высев на МПА по 0,1-0,2 мл улавливающей жидкости. В случае большего объема полученной суспензии всю или часть улавливающей жидкости профильтровывают через мембранные фильтры № 2 или № 3 с последующим посевом фильтров на поверхность плотных питательных сред.
Среди приборов для исследования воздуха помещений самым распространенным является прибор Кротова. Механизм улавливания микрофлоры основывается на ударно-прибивном действии струи воздуха, который проходит через узкую клиновидную щель и с большой скоростью ударяется о влажную поверхность питательной среды. В результате удара находящиеся в воздухе аэрозоли, в том числе содержащие бактерии пылевые частицы и капли, прибиваются к поверхности МПА или элективных сред. Во время отбора пробы воздуха чашка Петри вращается вместе со столиком, благодаря чему достигается равномерное обсеменение поверхности агара микрофлорой воздуха. Для отбора проб следует подбирать чашки Петри с плоским дном, а количество питательной среды в чашке не должно превышать 15 мл.
Прибор Кротова характеризуется эффективностью улавливания микрофлоры в пылевой фазе аэрозоля, дает четкие сопоставимые результаты, прост в работе, позволяет за короткое время произвести отбор проб воздуха непосредственно на чашки Петри с МПА или элективными средами. Производительность прибора - от 20 до 40 л/мин. Основной недостаток прибора состоит в том, что он нуждается для работы в электроэнергии; это ограничивает возможности его применения для исследования атмосферного воздуха.
Для исследования атмосферного воздуха используется ряд приборов, в которых аэрозоль улавливается в жидкую среду. Принцип устройства этих приборов прост. Они представляют собой стеклянные емкости, в которых через отверстия в пробке пропущены две трубки. Одна трубка кончается чуть ниже пробки и соединена с аспиратором, другая опущена на дно цилиндра, куда поступает исследуемый воздух. В цилиндр наливают стерильный изотонический раствор хлорида натрия или водопроводную воду (жидкости, не образующие пену) и через нее просасывают определенный объем воздуха. В качестве аспиратора могут быть использованы воздуходувки, пылесосы, насос. Посев жидкости производят на питательный агар или дифференциальные среды. На МПА засевают по 0,1-0,2 мл улавливающей жидкости, а на элективные среды - по 0,3-0,5 мл.
Для исследования атмосферного воздуха используются также приборы-бактериоуловители, т.е. трубки с размещенными в них плотными фильтрами (хлопчатобумажная или стеклянная вата). После окончания отбора пробы воздуха в количестве 100-300 л ватный тампон помещают в склянку с изотоническим раствором хлорида натрия и тщательно отмывают встряхиванием со стеклянными бусами. Полученную суспензию подвергают бактериологическому анализу посевом на поверхность плотных питательных сред.
Для бактериологического исследования воздуха могут быть использованы стерилизованные и высушенные мембранные фильтры №4. При помощи воздуходувки через фильтр просасывают воздух. Мембранные фильтры должны быть хорошо просушены, так как мокрые и даже влажные фильтры практически воздухонепроницаемы. Преимуществом метода мембранных фильтров является их портативность и возможность концентрировать на них микроорганизмы из относительно больших объемов воздуха. Мембранные фильтры могут быть использованы при исследованиях атмосферного воздуха в зимних условиях.
Для обнаружения вирусов в воздухе наиболее целесообразно использовать приборы, в которых улавливание вирусного аэрозоля осуществляется в жидкой улавливающей среде.
В зависимости от поставленной задачи исследования микрофлоры воздуха и условий отбора проб могут проводиться определения общей бактериальной обсемененности воздуха, содержания санитарно-показательных микроорганизмов и наличия патогенных или условно-патогенных микроорганизмов.
Пробы воздуха следует отбирать на уровне дыхания сидящего или стоящего человека.
Задание№ 1. Определить содержание микроорганизмов в воздухе лабораторных помещений методом седиментации.