7.4. Цитоморфологический метод.

Сущность метода заключается в обнаружении в периферической крови и кроветворных органах накопления морфологически изменённых, преимущественно незрелых или патологических клеток.

Мазки, приготовленные на предметных стёклах, а также препараты – отпечатки, приготовленные из материала, взятого при биопсии, или из кусочков органов при убое животного, фиксируют в спирте, окрашивают по Паппенгейму и исследуют под микроскопом с иммерсионным объективом при увеличении 90.

Результаты считают положительными на лейкоз, если в мазках крови более 3 %, а в кроветворных органах более 10 % родоначальных, слабодифференцированных (пролимфоциты, лимфобласты, миелобласты) или опухолевых клеток, которые отличаются от нормальных по форме, величине, структуре и тождественны клеткам, образующим опухоли.

7.5. Электронно-микроскопический метод.

Для прижизненной дифференциальной и экспресс – диагностики гемобластозов на начальных стадиях лейкозного процесса применяется трансмиссионная и сканирующая электронная микроскопия.

Сканирующая микроскопия позволяет оценить поверхностную архитектонику, а трансмиссионная – ультраструктуру инфицированных и «лейкозных» лимфоцитов. Метод электронной микроскопии включает в себя:

• выделение лимфоцитов или лейкоцитов из крови или лимфы;

• взятие кусочков лимфоузлов размером 0,5 * 1,0 см;

• фиксацию, обезвоживание и заливку материала в эпоксидную смолу;

• приготовление ультратонких срезов, их окраска солями тяжёлых металлов – цитратом свинца и уранилацетатом;

• исследование в электронном микроскопе и фотографирование полученных объектов на фотопластины.

Вирус лейкоза КРС обнаруживается только in vitro при культивировании лейкоцитов крови и лимфы в течение 24, 48, 72 часов. Зрелые вирионы имеют ультраструктуру, типичную для онкорнавируса типа С. Вирусные частицы образуются на поверхности клетки (лимфоцита) или в цитоплазматических вакуолях.

Лейкозные лимфоциты имеют чёткие отличия от нормальных клеток. У них находят: полиморфизм ядра, гипертрофию мембранного аппарата, дубликацию ядерных и поверхностных мембран митохондрий, появление ядерных аномалий – ядерных карманов (самый важный признак).

В одном лимфоците обнаруживают от одного до шести и более ядерных карманов. Эти аномалии являются потогномоничными (специфическими) для лейкозных лимфоцитов.

7.6. Клиническая диагностика.

Клинические признаки злокачественных заболеваний кроветворной ткани КРС – гемобластозов – складываются из наблюдений за больными животными. Они разнообразны и зависят от формы и стадии течения болезни. Выявляются чаще у животных 4 – 8 – летнего возраста и протекают в основном хронически (2 – 5 лет). Инфекционный процесс при лейкозе КРС характеризуется стадийностью. Различают 4 стадии болезни: инкубационную (онкорнавирусная инфекция), начальную, развёрнутую и терминальную. Болезнь протекает вначале бессимптомно, а затем проявляется лимфоцитозом и (или) образованием опухолевых разрастаний в кроветворных, лимфоидных органах и тканях.

При клинической диагностике применяют общие методы исследования: осмотр животного, пальпацию поверхностных лимфоузлов, термометрию, аускультацию, перкуссию, ректальное исследование лимфоузлов и органов тазовой полости.

Помимо поражения кровеносной и лимфоидной систем часто в патологический процесс вовлекаются внутренние органы, не имеющие отношения к кроветворению. Поэтому и клинические признаки могут быть неспецифические, отображающие функциональные нарушения той или иной системы органов вследствие опухолевых разрастаний, и специфические, характерные для отдельных форм лейкоза.

Неспецифические признаки выражаются расстройствами функций организма общего характера. У животных ухудшается общее состояние, наблюдается отсутствие аппетита, снижение удоя, быстрая утомляемость, исхудание. Нередко отмечают расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта (диарея, запоры, атония, тимпания преджелудков). Опухолевые разрастания в сердце обуславливают ослабление сердечной деятельности, провоцируют симптомы травматического перикардита, цианоз, желтушность слизистых оболочек, нарушения дыхания, отёки подкожной соединительной ткани в области подгрудка, живота, вымени, подчелюстного пространства. Наблюдают увеличение одной или нескольких долей вымени (вначале без нарушения лактации).

В патологический процесс нередко вовлекается печень, она увеличивается в объёме. При резком увеличении её задний край пальпируется через брюшную стенку.

Специфические (патогномонические) клинические признаки характеризуются увеличением поверхностных (предлопаточных, околоушных, нижнечелюстных, надколенных, надвыменных) и доступных ректальному исследованию внутренних лимфоузлов (глубокие паховые, крестцовые). Обнаруживается увеличение матки, мочевого пузыря, пучеглазие – экзофтальм за счёт опухолевых разрастаний. Характер и степень поражения лимфоузлов различны, зависят от формы болезни. Внутренние лимфоузлы поражаются чаще наружных. Увеличенные лимфоузлы без повышенной температуры, безболезненны, подвижны, эластичной или плотной консистенции. Они могут срастаться в конгломераты.

К специфическим признакам относится увеличение селезёнки. При лимфолейкозе её размеры возрастают в несколько раз, и селезёнка может достигать массы в 25 килограмм; в некоторых случаях капсула разрывается, и животное внезапно гибнет от внутреннего кровотечения.

Клинические признаки проявляются только у 10 – 30% больных лимфолейкозом животных. В результате непостоянного увеличения лимфоузлов при миелоидном, слабодифференцированном лейкозе, гематосаркомах поставить прижизненный диагноз по клиническим признакам даже в терминальной стадии болезни трудно. Необходимо проводить тщательное дифференциально-диагностическое исследование.