а) осуществляют посев в глубину плотных питательных сред (кровяной или сахарный агар): посев уколом в высокий столбик агара(анаэробы вырастают в глубине посева); посев в глубину агара в пробирках или трубках Виньяля-Вейона: берут стеклянную трубку (длиной 30 см, d = 3-6 мм), один конец трубки вытягивают в капилляр в виде пастеровской пипетки, а у другого делают перетяжку и вставляют ватную пробку; исследуемый материал засевают в пробирки с расплавленным и охлажденным агаром, а затем засеянный агар насасывают в стерильные трубки Виньяля-Вейона; капиллярный конец трубки запаивают в пламени горелки, и трубки помещают в термостат;

б) выращивают анаэробные бактерии в специальных средах, содержащих редуцирующие вещества – глюкозу, муравьинокислый натрий, а также кусочки (около 0,5 г) животных или растительных тканей (печени, селезенки, мозга, картофеля и др.).

Универсальной средой является среда Китта-Тароцци - это жидкая питательная среда, состоящая из сахарного бульона(0,5 % глюкозы) и кусочков животных тканей (например, печени, обладающей высокой способностью связывать кислород). Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения в течение10-30 минут и быстро охлаждают, а после посева заливают слоем стерильного вазелинового масла. Эта среда используется для накопления анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выделенной чистой культуры.

в) выращивают анаэробные микроорганизмы в сосудах, из которых удаляют воздух или заменяют его индифферентным газом(азотом, водородом, СО2); такими сосудами могут быть анаэростат или эксикатор, куда помещают посевы на чашках Петри с кровяным или сахарным агаром.

Анаэростат – толстостенный металлический цилиндр с хорошо притертой крышкой с резиновой прокладкой, снабженный отводящим краном и вакуумметром. После размещения в анаэростате засеянных чашек Петри (крышкой вверх) из него удаляют воздух при помощи масляного насоса или вытесняют его газом из баллона(или аппарата Киппа).

3.Химические методы основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (аппарате Аристовского) химическими веществами (такими как щелочной пирогаллол или гидросульфит натрия).

4.Биологические методы (метод Фортнера) основаны на совместном культивировании анаэробов с аэробами(S. aureus, S. marcescens). Для этого из застывшей агаровой пластинки по диаметру чашки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной 1см, получается два агаровых полудиска в одной чашке. На один из них засевают аэроб, а на другой – анаэроб. После посева чашки Петри герметически закрывают, используя пластилин или парафин (среду в чашки Петри наливают толстым слоем для сокращения воздушного пространства). Вначале в чашке Петри размножаются аэробы, а когда весь кислород в пространстве чашки будет использован, начинается рост анаэробов. Различные метод создания анаэробиоза могут комбинироваться.

Вопросы и упражнения для самоподготовки.

1.Что такое размножение? Перечислите способы размножения бактерий.

2.Какой способ размножения наиболее распространен у бактерий?

3.Как происходит деление клетки у грамотрицательных и грамположительных бактерий?

21

4.Что такое аутолиз?

5.Почему у дифтерийной палочки клетки располагаются под углом друг к другу?

6.С какой скоростью размножаются разные виды бактерий?

7.От чего зависит скорость размножения бактерий?

8.Каков характер роста бактерий в жидкой питательной среде?

9.У каких микроорганизмов наблюдается поверхностный рост в жидкой среде?

10.У каких микроорганизмов наблюдается диффузный рост в жидкой среде?

11.У каких микроорганизмов наблюдается придонный рост в жидкой среде?

12.Почему прекращается рост у бактерий, если не обновлять питательную среду?

13.Что такое периодическая культура?

14.Что такое непрерывная культура?

15.Перечислите фазы роста периодической культуры в жидкой питательной среде.

16.Что такое лаг-фаза?

17.Что происходит во время логарифмической фазы роста?

18.Охарактеризуйте фазу стационарного роста.

19.Какие процессы развиваются после фазы стационарного роста?

20.Между какими клетками наблюдается равновесие в фазе стационарного роста?

21.Что такое М-концентрация, и от чего она зависит?

22.В какой фазе роста бактерии наиболее чувствительны к действию различных факторов?

23.В какой фазе роста бактериальные клетки переходят в состояние покоя?

24.Что показывает М-концентрация?

25.Каков характер роста бактерий на плотных питательных средах?

26.Что такое колония?

27.Перечислите признаки, по которым производится описание колоний?

28.Для каких бактерий внешний вид колоний является важным дифференциально-диагностическим признаком?

29.Как различаются колонии по размеру и форме?

30.Как различаются колонии по цвету и характеру поверхности?

31.Как различаются колонии по форме края, консистенции и структуре?

32.Чем обусловлена различная окраска колоний?

33.Что такое пигменты, и какие они выполняют функции в микробной клетке?

34.Какие бактерии способны к люминесценции?

35.Приведите примеры различной окраски колоний.

36.Какой внешний вид имеют колонии микоплазм?

37.Что такое дыхание?

38.Какую функцию выполняет АТФ?

39.Что такое окисление и восстановление?

40.Назовите субстраты дыхания.

41.Какие соединения могут быть акцепторами водорода?

42.Что такое анаэробное дыхание?

43.Что такое аэробное дыхание?

44.Как называется процесс, в котором органические вещества являются и донорами, и акцепторами водорода?

45.Что такое брожение?

46.Какие вещества могут сбраживаться микроорганизмами?

47.Какие продукты образуются в результате брожения?

48.Какие вы знаете виды брожения?

49.Что такое молочнокислое брожение? У каких микроорганизмов оно встречается?

50.Что такое маслянокислое брожение? У каких микроорганизмов оно встречается?

51.Какое дыхание является энергетически более выгодным?

22