За одиницю амілолітичної активності взято таку кількість ферменту, яка каталізує розщеплення 1 г розчинного крохмалю до продуктів, не забарвлених йодом, за 1 год при температурі 30 ºС у строго визначених умовах.

АС визначається числом одиниць у1 г препарату, культури або 1 мл розчину. АС показує , скільки грамів крохмалю може бути прогідролізовано до не забарвлених йодом продуктів 1 г препарату, культури або 1 мл розчину за 1 год (в умовах, аналогічних умовам визначення).

Методика визначення АС залежить від гідролізу1 %-го забуференого розчину крохмалю; кінець реакції контролюють візуально за йодною пробою.

Чутливість методу визначається мінімальною кількістю часу, за який можна візуально визначити зміну забарвлення йоду.

Допускають, що швидкість ферментативної реакції прямо пропорційна кількості застосованого ферменту і залишається сталою від5 хв до 1 год, тобто реакція підпорядковується закону реакції нульового порядку.

Встановлено вплив величини рН і хімічної природи буфера на величину

АС.

З ацетатним буфером рН4,7 величина АС у грибних препаратів у середньому у 1,5 разу вища, ніж при визначенні з фосфатним(рН 4,9), тому рекомендується брати ацетатний буфер.

Прилади, посуд, реактиви:

Пробірки великі; скляні палички; циліндр; ультратермостат; секундомір; біла фарфорова пластинка;

ацетатний буфер. Для його приготування1 н. розчин оцтової кислоти (57,25 мл або 60,12 г льодяної оцтової кислоти у1 л дистильованої води) і 1 н. розчин оцтовокислого натрію (136,0 на 1л води) змішати у співвідношенні 1:1 для одержання буфера рН 4,7.

Для одержання буферного розчину рН6,0 на одну частину розчину оцтової кислоти необхідно взяти 16 частин 1 н. розчину оцтовокислого натрію;

1 %-й розчин розчинного крохмалю. Для його одержання наважку крохмалю, яка містить 1 г сухих речовин, потрібно помістити у мірну колбу на

100 мл, додати 25 мл буфера (для грибних препаратів рН4,7,	для	аналізу
бактеріальних препаратів рН 6,0) і довести до мітки дистильованою водою;
розчин йоду. Для приготування основного розчину	у	тарованому

стаканчику з притертою кришкою зважують4,4 г йодистого калію 1,4і г металевого йоду і додають2 мл дистильованої води. Після розчинення йоду вміст переносять кількісно у мірну колбу місткістю100 мл і доводять до мітки дистильованою водою. Розчин зберігають у темному місці. Основним розчином йоду можна користуватися протягом 30 діб;

Для приготування робочого розчину йоду до20 мл основного розчину йоду у мірній колбі на100 мл додають 4,4 г йодистого калію і доводять об’єм до мітки дистильованою водою. Робочий розчин можна використовувати протягом 6 діб.

48