- •Львівський національний медичний університет
- •Модуль 2. Загальні закономірності метаболізму Тематичний план практичних занять з модуля 2
- •Завдання для самостійної роботи студентів (срс)
- •Модуль 2. Загальні закономірності метаболізму.
- •Теоретичні питання
- •Наукові напрямки роботи кафедри біохімії
- •Практична робота Визначення оптичної густини забарвлених розчинів у залежності від їх концентрації.
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів „Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Дослід 2. Дослідження термолабільності амілази слини.
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів „Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література Основна:
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •1/16 Мл сечі розщеплює 2 мл 0,1 %-го розчину крохмалю;
- •1Мл сечі розщеплює - х мл 0,1 %-го розчину крохмалю,
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •Література Основна:
- •Аналізувати зміни активності індикаторних ферментів плазми крові при патологіях певних органів та тканин. Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •А. Амілази, ліпази, фосфатази
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література Основна:
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література Основна:
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •А. Ацетил-КоА
- •Література Основна:
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •1. Дослідження дії якого з перерахованих ферментів базується на знебарвленні бензидину при його окисненні?
- •3. За яких умов відбувається забарвлення пірокатехіну при окисненні його молекулярним киснем в присутності фенолоксидази:
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •Література Основна:
- •Теоретичні питання
- •Практична робота Дослід 1.Вивчення окисного фосфорилування в мітохондріях та дії роз’єднувача – 2,4-динітрофенолу на цей процес.
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •2. Універсальність хеміоосмотичної теорії для живих систем. Література Основна:
- •Теоретичні питання
- •Приклади тестового контролю знань.
- •А. Аконітатгідратази
- •Приклади тестів та ситуаційних задач по засвоєнню практичних навичок
- •Література Основна:
- •Модуль 3. Метаболізм Вуглеводів, ліпідів, амінокислот та його регуляція
- •Тематичний план практичних занять з модуля 3 Завдання для самостійної роботи студентів (срс)
- •Змістовий модуль 9. Метаболізм вуглеводів та його регуляція
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок -1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів “Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів „Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •2. Реакція з феруму хлоридом (III) (проба Герхарда).
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів „Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів „Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Отримання калібрувальних розчинів
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів „Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Тема № 9. Дослідження процесів детоксикації аміаку та біосинтезу сечовини.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів „Крок-1”
- •Індивідуальна самостійна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Контроль виконання лабораторної роботи
- •Приклади тестів „Крок-1”
- •Самостійна індивідуальна робота студентів
- •Література
- •Теоретичні питання
- •Приклади тестового контролю знань „Крок 1”
- •Приклади тестів та ситуаційних задач по засвоєнню практичних навичок
- •Література
Теоретичні питання
Шляхи утворення та підтримання пулу вільних амінокислот в організмі людини. Загальні шляхи перетворення вільних амінокислот.
Трансамінування амінокислот, субстрати для реакцій транс амінування. Механізм реакції трансамінування. Трансамінази. Локалізація трансаміназ в органах і тканинах. Клініко-діагностичне значення визначення активності трансаміназ.
Типи реакцій дезамінування амінокислот і їх кінцеві продукти. Механізм окиснювального дезамінування амінокислот. Оксидази L- і D-амінокислот. Їх ферментативна активність, специфічність дії.
Декарбоксилування амінокислот. Декарбоксилази. Утворення біогенних амінів (g-аміномасляна кислота, гістамін, серотонін, дофамін). Декарбоксилування амінокислот у процесі гниття білків у кишківнику. Окиснення біогенних амінів.
Глутатіон, будова та роль в обміні органічних пероксидів.
Утворення креатину та креатиніну, клініко-біохімічне значення порушень їхнього обміну.
Практична робота
Дослід 1. Визначення активності аланінамінотрансферази (АлАТ) уніфікованим динітрофенілгідразиновим методом Райтмана-Френкеля
Принцип методу. В результаті реакції трансамінування під дією АлАТ утворюються піруват і глутамат. При додаванні 2,4-динітрофенілгідразину в лужному середовищі утворюється гідразон піровиноградної кислоти, інтенсивність забарвлення якого прямопропорційна кількості утвореної піровиноградної кислоти і є показником активності АлАТ.
Матеріальне забезпечення: 0,1 М розчин Na2HPO4; 0,1 М розчин КН2РО4; 0,1 М фосфатний буфер рН 7,4 (змішують 840 мл 0,1 М Na2HPO4 і 160 мл 0,1 М КН2РО4); 0,4 М розчин NаОН; 0,04 % розчин бромтимолового синього (100 мг індикатора розтирають у ступці з 3,2 мл 0,05 М NаОН, змивають водою в мірну колбу на 250 мл і доводять до мітки водою); субстратний розчин: 29,2 мг α-кетоглутарової кислоти і 1,78 мг D,L-аланіну розчиняють в 1 М NаОН до отримання рН 7,4, розчин переливають у мірну колбу на 100 мл і доводять 0,1 М фосфатним буфером до мітки); 1 М розчин соляної кислоти; 1 мМ розчин 2,4-динітрофенілгідразину (19,8 мг 2,4-динітрофенілгідразину розчиняють у невеликій кількості 1 М НСl при нагріванні на водяній лазні, після охолодження доводять до 100 мл, наступного дня реактив фільтрують); натрію піруват. Визначення проводяться за допомогою спектрофотометра або фотоелектроколориметра. Необхідні термостат або водяна лазня, холодильник.
Приготування калібрувального розчину: 11 мг натрію пірувату розчиняють у невеликій кількості води, переносять у мірну колбу на 100 мл і доводять водою до мітки – 1 мл калібрувального розчину містить 110 мкг натрію пірувату, що відповідає 88 мкг або 1 мкмоль піровиноградної кислоти.
Хід роботи: 1) Дослідна проба: В пробірку вносять 0,5 мл субстратного розчину і 0,1 мл досліджуваної сироватки. Пробірку ставлять у термостат при 370С на 30 хв. Додають 0,5 мл розчину 2,4-динітрофенілгідразину і витримують 20 хв. при кімнатній температурі. Потім додають 5 мл 0,4 М NaOН, перемішують і залишають на 10 хв при кімнатній температурі для розвитку забарвлення. Інтенсивність забарвлення визначають на фотоелектроколориметрі при λ = 546 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм проти контрольної проби.
2) Контрольна проба: В пробірку вносять 0,5 мл субстратного розчину, 0,1 мл сироватки і 0,5 мл розчину 2,4-динітрофенілгідразину. Контрольну пробу залишають на 10 хв при кімнатній температурі.
Розрахунок активності АлАТ в сироватці крові проводять за калібрувальним графіком, що показує залежність оптичної густини від вмісту піровиноградної кислоти.
Побудова калібрувального графіка: з калібрувального розчину готують низку розведень (див. табл.). Калібрувальні проби проводять так само як дослідні, але замість сироватки додають розведені калібрувальні розчини. Вимірюють проти холостої проби, в яку замість калібрувальних розчинів додають воду. Визначивши оптичні густини будують калібрувальний графік, відкладаючи на вісі абсцис активність ферменту, а на вісі ординат – значення оптичної густини. Калібрувальна крива лінійна до величини оптичної густини 0,3.