Занятие № 7 почвенные микробоценозы

Цель: Изучить видовой состав и распределение почвенных микроорганизмов.

Задачи

1.Изучить характер микрофлоры почвы и доминирующие виды.

2. Произвести количественный и качественный учет микрофлоры почвы.

Материалы и оборудование. Предметные стекла, стерильные чашки Петри с МПА, весы, разновесы, скальпель, ступка, резиновая перчатка, колба со стерильной дистиллированной водой 90 мл, стерильная колба объемом 250 мл, пробирки с 9 мл стерильной воды, пипетки на 10 мл и 1 мл, микропипетки на 0,1 мл, стеклянные шпатели.

Основные понятия. Симбиоз, метабиоз, антагонизм, паразитизм.

Ход работы

Задание № 1. Изучить характер почвенных и ризосферных микробоценозов методом обрастания стекол (по Холодному).

На ровной поверхности почвы делают ножом разрез, глубина которого зависит от исследуемого горизонта. Отмытые и обезжиренные стекла (одновременно берут несколько стекол) плотно прижимают к вертикальной стенке разреза и засыпают почвой. Стекла выдерживают в почве от недели до нескольких месяцев.

После истечения времени экспозиции убирают почву с тыльной стороны стекол, опытную поверхность стекол высушивают на воздухе и фиксируют трижды, проводя тыльной стороной над пламенем горелки. После фиксации стекло погружают в воду опытной поверхностью вниз, не доводя его до дна. После промывки препарат погружают в раствор карболового эритрозина на срок от 30 мин до 24 ч. Окрашенные препараты исследуют под микроскопом с иммерсионной системой. При микроскопировании отмечают характер микрофлоры, плотность обрастания стекол и доминирующие формы.

Задание № 2. Провести определение ОМЧ почвы.

Приготовление почвенной суспензии методом разведения. Соблюдая стерильность, отвешивают 10 г почвы и переносят ее в стерильную ступку. Навеску почвы в ступке увлажняют до пастообразного состояния, добавляя 2-3 мл воды из первой колбы, содержащей 90 мл стерильной воды, и растирают 5 мин пальцем в резиновой перчатке. После растирания почву из ступки переносят с помощью воды во вторую сухую колбу, получают первое разведение – 1/10. Почвенную суспензию в колбе встряхивают в течение 5 мин, дают отстояться 30 с и далее стерильной пипеткой переносят 1 мл почвенной суспензии из колбы в пробирку № 1 с 9 мл стерильной дистиллированной воды, получают второе разведение – 1/100. Подобным образом готовят ряд последующих разведений почвенной суспензии –1/1000, 1/10000, 1/100000 и более в зависимости от предполагаемой численности микроорганизмов (рис. № 1, занятие № 6).

Для выделения и количественного учета бактерий почвенную суспензию высевают на одну из питательных сред (МПА, КАА, почвенный агар, среду Эшби; для учета актиномицетов используют КАА или среду Чапека). Колонии бактерий на чашках Петри подсчитывают через 3 – 5 суток, грибов и дрожжей – через 5 – 7, актиномицетов – через 7 – 15. Содержание микроорганизмов в 1 г почвы определить по формуле: а=б*в, где а – количество микроорганизмов в 1 г почвы, б – среднее число колоний, в – разведение. Сравнивают видовой состав и разнообразие микрофлоры почвы, воды и воздуха и делают вывод.

Контрольные вопросы и задания см. занятие № 4.