2. Определение мест присоединения моносахаридных остатков друг к другу

Осуществляется исчерпывающим метилированием олигосахарида с последующим гидролизом и анализом образующихся продуктов.

• ДМСО, 30% NaOH (м-д Хеуорса)

• CH₃I, Ag₂O (мягкий)

• CH₃I, NaH, ДМСО (метод Хакомори)

Олигосахарид подвергается далее кислотному гидролизу или, лучше, метанолизу, в результате получается набор метилированных моносахаридов со свободными гидроксильным группами, участвующими в образовании гликозидных связей.

Обнаружение в метилированных продуктах после метанолиза моносахаридов с более чем одной свободной гидроксильной группой свидетельствует о наличии в цепи разветвлений. Остаток, локализованный на невосстанавливающем конце олигосахаридной цепи, не содержит свободных гидроксильных групп, а моносахарид, находившийся на восстанавливающем конце, легко идентифицировать в вид метилированного полиола в продуктах гидролиза метилированного восстановленного олигосахарида.

1. Последовательность звеньев в молекуле гетероолигосахарида.

• Определяется главным образом с помощью экзогликозидаз — ферментов, отщепляющих по одному моносахаридному остатку с невосстанавливающего конца молекулы.

Важным свойством гликозидаз является стереоспецифичность действия: α-гликозидаза не расщепляет β-гликозидную связь. Это свойство позволяет однозначно установить конфигурацию гликозидной связи расщепляемого олигосахарида.

• Периодатное окисление. Модификацией метода является деградация п Ф. Смиту, заключающаяся в последовательном окислении сахарида периодатом, восстановлении боргидридом и последующего мягкого кислотного гидролиза образующегося продукта; сохранившиеся гликозидные связи при этом не затрагиваются.

6. Методы синтеза олигосахаридов (методы Кенигса-Кнорра, ортоэфирный, оксазолиновый, трихлорацетимидатный, гликозилфторидный), стереохимия гликозидной связи, основные проблемы синтеза олигосахаридов: особенности и способы синтеза 1,2-цис- и 1,2-транс-гликозидов.

   1. Введение защиты на не участвующие в создание связи группы

Условие выбора: легко вводится, устойчива, не разрушает вещество при снятии

Защиты:

Защита	Снятие
Bn (бензильный)	H2/Pd
Tr (по первичному CH2OH)	H^+
TBDMS (третбутилдиметилсилильная)	Bu4NF
TBDPS (третбутилдифинилсилильная)	Bu4NF
Ac (ацетильная)	OH^-
Bz (бензоильная)	OH^-
Изопропилидиновая	H^+
Бензилиденова	H^+

Все методы создания отличаются характером создания активации гликозидного центра.

2. Метод Кенигса-Кнорра.

Гликозилирующий агент (гликозильный донор): ацилированный α-D-гликозилгалогенид (ацетилгалогеноза).

Реакция с гидроксилсодержащим компонентом в присутствии оксида или карбоната серебра приводит к образованию 1,2-гранс-гликозидной связи. Оксид и карбонат серебра играют двоякую роль: с одной стороны, они облегчают диссоциацию связи С-1 — галоген, являясь таким образом катализатором реакции, с другой стороны, служат акцептором протонов, образующихся в ходе превращения.

Недостатками метода являются образование в ходе реакции воды, разлагающе ацилгалогенозу, и гетерогенность реакционной смеси.