Непрямий іфа для виявлення аитнііл

Даний варіант ІФА найчастіше застосовується для аналізу біологічних рідин на наявність специфічних антитіл. Його широко застосовують в епідеміології ін­фекційних захворювань, а також для аналізу культуральної рідини гібридом на наявність специфічних моноклональних антитіл. Для проведення ІФА в лунку планшета сорбукгть антиген, проти якого виявляють антитіла (рис. 15).

- молекули антигену

У У - антитіла, що

Л л

*• ~ БОА

антиаидові антитілі ковалентно гоя'юані з маркерним ферментом

Рис. 15. Непрямий ІФА виявлення антитіл

Сьогодні, як правило, на підприємствах, що готують діагностичні набори, застосовують для даного засобу ІФА рєкомбінантні антигени і рідше - антигени, що отримані безпосередньо із збудників інфекцій. Далі в лунках планшета інку- бують зразки, що підлягають контролю (сироватки, молоко, спинномозкова ріди­на і т.д.). Антитіла, що зв'язалися з іммобілізованими на поверхні твердої фази ан­тигенами, далі виявляють, застосовуючи антиглобуліновий кон'югант (тобто - ан- тивидові антитіла проти імуноглобулінів, що аналізуються, які ковалентно пов'я­зані з маркерним ферментом). Залежно від мети аналізу до складу кон'юганта мо­жуть входити антитіла з широкою специфічністю, виявляючи антитіла всіх ізото­пів, або специфічні до окремих класів і підкласів імуноглобулінів, наприклад, які взаємодіють тільки з І&Е. Потім кон'югант, що зв'язався, виявляється додаванням в лунки розчину субстрату, подібно попередньому випадку. Перевага даного ме­тоду є певна «універсальність» кон'югантів, що застосовуються. Одні й ті ж кон'ю- ганти (наприклад, специфічні до всіх імуноглобулінів людини) можна використа­ти для виявлення антитіл проти різних антигенів.

У сучасній клінічній практиці ІФА застосовується досить широко й зупини­тися на всіх можливих випадках неможливо в рамках даної роботи. Нижче будуть розглянуті приклади ІФА в клінічній діагностиці, що найчастіше використовують­ся.

Визначення пухлинних маркерів

Пухлинні маркери - це речовини, підвищений вміст яких можна пов'язати з наявністю та розвитком новоутворень. Ці сполуки звільняються із пухлинних клі­тин і потрапляють до рідин організму або залишаються зв'язаними з поверхнею ракових клітин. Слід відзначити, що безпосередні пухлинні маркери є продукти неопластичних клітин на відміну від опосередкованих маркерів, зміни вмісту яких зумовлені реакцією нормальної тканини на розвиток новоутворень.

Тільки в рідких випадках визначення самого пухлинного маркера можна використати для постановки діагнозу. Переважно виявлення аномального вмісту маркера є лише поштовх для проведення додаткових обстежень, які мають підтве­рдити чи заперечити можливе існування новоутворення. Жоден з відомих марке­рів не має 100% чутливості й тому нормальний чи аномальний його рівень ніколи не виключає можливості існування підозрюваної пухлини. Крім того, потрібно пам'ятати, що чутливість аналізу залежить від стадії пухлинного процесу. На ран­ніх стадіях новоутворень рівень більшості маркерів зростає лише в незначній час­тині випадків (табл. 3).

43 V

Таблиця З

Основні пухлинні маркери, що застосовуються в клінічній практиці

Назва маркера	Орган (тканина), де продукується	Межа нормн	Показання	Примітки
1	2	3	4	5
Карціо- ембріона- льний ан­тиген (КЕА)	Слизова кишеч­нику в період ембріонального та фетального розвитку	<3 нг/мл	Моніторинг раку прямої кишки, шлунка, молочної залози, бронхів	У 5% курців - 2,5-5 нг/мл, у 3% -5-10 нг/мл, у 1% - 10-20 нг/мл
Альфа- фетопро- теїн (АФП)	Жовтковий мі­шок, печінка плоду	<15 нг/мл	Моніторинг вагі­тності, діагности­ка і моніторинг первинного гепа- тоцелюлярного раку та ембріона­льно-клітинних пухлин	Можливе тер­мінове підви­щення АФП при хворобах печінки
Простато- специфіч- ний анги- ген (ПСА)	Еусуреторні протоки проста­ти	<3,7 нг/мл	Рак простати	Тканинноспе- цифічний, але не пухлинос- пецифічний У випадку раку простати най­більш вірогід­но, що концен­трація переви­щить 10 нг/мл
Раковий антиген 15-3 (СА 15-3)	Клітини раку молочної залози	<28 нг/мл	Моніторинг раку молочної залози	Визначається в комбінації з РІА
Вуглевод­ний анти­ген 19-9 (СА 19-9)	Різні карциноми, епітелій шлун­ково* кишкового тракту плоду	<37 нг/мл	Моніторинг при багатьох фор­мах раку шлунко­во-кишкового тракту, аденокар­циномах, - пу­хлинах підшлун­кової залози, хронічному пан­креатиті, цирозі	Другий маркер при пухлинах прямої кишки та карциномі шлунка