Список рекомендованої літератури

Антитела. Методи: В 2 т. /Под ред. Д. Кзти. М.: Мир. 1991. Т.1. 285 с. Иммунологические методи исследований / Под ред. И. Лефковитса, Б. Перниса М.: Мир, 1988. 527 с.

Иммунологические методи / Под ред. Г Фримеля. М.: Медицина, 1987 472 с. Ллузлин МБ. Определение нуклеотидной последовательности ДНК. Молекулярная клиническая диагностика. Метода. М.: Мир, 1999. С.428- 447.

Маккреди Б.Дж., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенних микроорганизмов молекулярними методами. Молекулярная клиническая диагностика. Метода. М.: Мир, 1998. С. 496 - 506.

ВоЬо Ь.Б. РСК Оеіесііоп оГСНІашусІіа ігасЬотаїія. Оіавпозііс тоїесиїаг тісгоЬіоІ- ову. Ргіпсіріез апсі арріісаііопз. У/азЬіпяІоп: А8М Ргезз, 1993. Р. 235-241. Соскегіїї Р.К. Оепеїіс теїЬосіз Гог аззеззіпд апІітісгоЬіаІ гезізіапсе // АпІітісгоЬ. Авепіз СЬетоіЬег. 1999. УоІ 43. Р. 199 - 212.

Огадоп А.О., Браного І.Р., Магіє] К. Оиаіііу сопігої оГроІутегазе сЬаіп геасііоп. Оі- адпозііс тоїесиїаг тісгоЬіоІову. Ргіпсіріев апсі арріісаііопз. У/авЬіпдЮп: А8М Ргекк. 1993. Р 160-168.

Ргесіегіскз О.И., Кеїтап О.А. Арріісаііоп оГ роїутегазе сЬаіп геасііоп Іо іЬе сііавпояія оГіпІесІіоиз сіізеаяез // Сііп. ІпГесІ. СХз. 1999. УоІ. 29. Р. 457 - 488. МсОопоидЬ М., Ке» О., НеігЬоЬег і. РСК Пеіесііоп оГЬитап асіепоуігикея 1>іа(г- позііс тоїесиїаг тісгоЬіоІову. Ргіпсіріез апсі арріісаііопз. ОДзЬіпвІоп: А8М Ргезз, 1993. Р. 389 - 393.

МиШз К.В., Раїоопа РА. Зресійс яупіЬезіз оГ ОМА іп гііго уіа а роїутегазе-саіаіузесі

сЬаіп геасііоп // МеіЬосІз ЕпгутоІ. 1987. УоІ. 155. Р. 335 -350.

Иелуїоп С.К., ОгаЬат А. РСК. ОхГога: Віоз Зсіепіійс РиЬІізЬегз, 1996. Р. 18 - 29.

РСК ргоіосоїз. А виісіе іо теїЬосІв апсі арріісаііопз. Е<і Ьу М.А. Іппіз, О.Н. ОеІГапсІ.

И. ЗпіпзІсу, Т.1. У/Ьііе И-У.: Асасктіс Ргезз, 1990. 481 р.

Регеіпв О Н, Сітіпо О.О. Атріійсаііоп ргосіисі іпасііуаііоп теїЬосіз. Оіавпозііс то

Іесиїаг тісгоЬіоІоду. Ргіпсіріез апс! арріісаііопз. \УазЬіп£Іоп: А8М Ргезз, 1993.

Р. 105-121.

РіаІІег М.А., НетакИ Ь.А ТЬе сііпісаі тісгоЬіоІову ІаЬогаїогу апсі іп&сііоп сопігої: етег§іп£ раїЬовепз, алІітісгоЬіаІ гезізіапсе, апсі пему ІссЬпоІову // СІіп. ІпГесі. Оіз 19^7. УоІ. 25. Р 858 - 870.

КаїрЬ О., МсСІеІІапсІ М. АгЬіігагу ргітесі РСК теїЬосіз Гог зіисіуіпв ЬасІегіаІ сііз­еаяез. Моїесиїаг Ьасіегіоіо^у. Ргоіосоїз апсі сііпісаі арріісаііопз. Тоїо^а: Нитапа Ргезз. 1998. Р 83 - 102.

КісЬтап О.О. Апіігеїгоуігаї сігив гезізіапсе: тесЬапізтз, раіЬодспеяіз. сііпісаі зід- пійсапсе // АсК\ Ехр. Месі. Віоі, 1996 УоІ. 394. Р. 383- 395.

Інгібітори ПЛР можуть бути наявні в зразках крові (гемоглобін), мокроти, сечі, бюпсійного матеріалу. Різні речовини, наприклад ті, що часто використову­ються, антикоагулянти (особливо гепарин) або компоненти кров'яних поживних середовищ можуть також гнітити реакцію ампліфікації ДНК. Гальмування ПЛР звичайно можна виявити шляхом штучного додавання ДНК-мішені до досліджу­ваною зразка і іі подальшої ампліфікації. Негативний результат, отриманий з явно позитивним контролем, може свідчити про наявність інгібіторів, для усунення яких необхідно провести розведення зразка або застосувати спеціальні методи підготовки проб.

Серйозну проблему становить також вибір конкретних методів підготовки клінічних зразків до дослідження з допомогою ПЛР. У цей час не існує універса­льних підходів до виділення ДНК різних видів організмів з різних джерел. Швидкі методи підготовки проб, що передбачають можливість автоматизації, іноді не до­зволяють досягнути необхідного рівня чутливості. З іншого боку, багатоетапні ме­тодики, що дозволяють очистити і сконцентрувати ДНК для ПЛР-аналізу, вияв­ляються трудомісткими і можуть збільшувати ризик забруднення зразків. Нареш­ті, ГІЛР дорого коштує. Для її реалізації необхідне комплексне оснащення лабо­раторії, уключаючи не тільки термоциклер і пристрій для ДНК-електрофорезу, але й окремі центрифуги, холодильники, дозатори та інше обладнання. Реактиви і ма­теріали, що використовуються для ПЛР, мають високу вартість.

Є велика кількість способів визначення концентрації нуклеїнових кислот у пробі методом ПЛР, але всі вони вимагають додаткових трудомістких етапів ро­боти, зв'язаних з попереднім розведенням виділеної з аналізованої проби ДНК чи отриманих у ході ПЛР ампліконів, що приводить до збільшення часу, необхідного для постановки аналізу і складності інтерпретації отриманих результатів. Також наявність додаткових етапів роботи збільшує імовірність помилки й одержання недостовірною результату.

На сьогодні є метод, позбавлений більшості перерахованих вище недоліків - це метод ПЛР у реальному часі (КеаІ-Тіте РСК). Сутність методу полягає в дослі­дженні накопичення продуктів ампліфікації за допомогою спеціального прш>аду без застосування електрофорезу. Оскільки кінетика накопичення продуктів амп­ліфікації зв'язана з кількістю первинної матриці, це дає можливість точно оцінити її концентрацію. Особливими рисами даного методу, на відміну від класичної ПЛР, є можливість кількісного визначення ДНК/РНК інфекційних агентів у дослі­джуваному матеріалі, відсутність стадії електрофорезу, менш строгі вимої и до ор­ганізації ПЛР- лабораторії й автоматична реєстрація й інтерпретація отриманих результатів. ІЗІдсутнісгь стадії елекірофорезу дозволяє мінімізувати ризик конта­мінації продуктами ПЛР і в такий спосіб різко зменшити число хибнопозитивних результатів. Оскільки реєстрація результатів проводиться безпосередньо в процесі ПЛР, весь аналіз можна проводити в одній-двох кімнатах лабораторії і немає не­обхідності в окремому приміщенні для детекції продуктів реакції. Використання маїсмагичних методів аналізу дозволяє проводити авюмшичну інтерпретацію отриманих резульїагів і знімає проблему суб'єкіивної оцінки елекірофореірам